無(wú)花果干果不同溶劑提取物及其抗氧化活性研究

徐 蔓，張錦華，白寶清

（山西大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山西太原030006）

無(wú)花果干果不同溶劑提取物及其抗氧化活性研究

徐 蔓，張錦華，白寶清

（山西大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山西太原030006）

采用4種極性溶劑（乙酸乙酯、正己烷、氯仿、乙醇）通過(guò)一次提取和雙溶劑萃取2種不同方法提取無(wú)花果干果中的總酚和總黃酮，測(cè)定其含量，并通過(guò)還原能力及羥自由基清除能力測(cè)定對(duì)其抗氧化活性進(jìn)行比較分析。結(jié)果表明，一次提取法得到的無(wú)花果干果提取物中總酚、總黃酮含量和相應(yīng)的抗氧化能力均高于雙溶劑萃取法；采用同種提取方法時(shí)提取溶劑極性越大其多酚和黃酮含量與對(duì)應(yīng)的抗氧化活性越高（乙醇提取物＞乙酸乙酯提取物＞氯仿提取物＞正己烷提取物）；采用60%乙醇作為提取溶劑通過(guò)一次提取法提取效果最好，提取物中總酚和總黃酮含量相對(duì)其他有機(jī)溶劑最高，相應(yīng)的還原能力和羥自由基清除率均最好。

無(wú)花果干果；提取方法；抗氧化活性

無(wú)花果（Ficus carica L.）系桑科落葉小喬木，是一種有悠久栽培歷史的藥食同源果品樹(shù)種，也是一種開(kāi)發(fā)應(yīng)用較廣的經(jīng)濟(jì)植物，其果實(shí)含有豐富的碳水化合物、蛋白質(zhì)、粗纖維、脂肪酸、多酚、維生素、礦物質(zhì)等，葉、根均可入藥[1]。無(wú)花果極易腐壞，因此，很大一部分是干無(wú)花果。干無(wú)花果是世界上最盛產(chǎn)的水果產(chǎn)品之一，除整個(gè)果實(shí)被食用外，還被加工為膏、濃縮汁、粉、粒等工業(yè)產(chǎn)品[2]。無(wú)花果富含酚類(lèi)化合物，酚類(lèi)物質(zhì)具有很強(qiáng)的生理活性[3-4]。植物多酚是水果中含量最豐富的抗氧化物質(zhì)之一，能夠有效清除自由基、保護(hù)機(jī)體生物大分子以及抗腫瘤、抗動(dòng)脈硬化等[5]。

無(wú)花果中亦含有黃酮類(lèi)化合物。黃酮類(lèi)化合物具有高度的化學(xué)反應(yīng)性，例如它能夠清除生物體內(nèi)的自由基，具有抗氧化作用[6]；在生物體中具有抗心腦血管病、抗氧化、抗病毒、抗腫瘤、抗衰老、抗過(guò)敏、免疫調(diào)節(jié)等作用[7-8]，在食品、醫(yī)藥、保健品等方面應(yīng)用十分廣泛，但是目前在無(wú)花果的研究中鮮有報(bào)道。

目前，國(guó)內(nèi)對(duì)無(wú)花果的研究主要集中在無(wú)花果多糖提取工藝優(yōu)化和無(wú)花果葉中活性物質(zhì)的提取及抗氧化活性方面。張澤俊等[9]以不同溶劑對(duì)無(wú)花果葉進(jìn)行超聲輔助提取，比較了各提取物抗氧化能力，結(jié)果表明，無(wú)花果葉水提取具有較強(qiáng)的抗氧化性。房昱含等[10]采用乙醇冷浸與溶劑分相萃取相結(jié)合的方法獲得無(wú)花果葉3種相提取物，測(cè)定不同相抗氧化能力，結(jié)果表明，無(wú)花果葉提取物各相均有抗氧化活性，并且有劑量依賴(lài)關(guān)系。大多研究主要使用乙醇作為提取溶劑，通過(guò)超聲波對(duì)無(wú)花果葉中的多酚及黃酮進(jìn)行提取，實(shí)現(xiàn)了無(wú)花果葉的綜合利用。

楊潤(rùn)亞等[1]通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化出超聲波輔助提取無(wú)花果葉中總黃酮的工藝條件，其提取量可以達(dá)到25.04 mg/g。莊奕筠等[11]通過(guò)乙醇浸提與超聲波輔助相結(jié)合的方法提取無(wú)花果葉中總黃酮，確定最佳工藝并得到了2.39%的較高提取率。齊建紅等[12]以金黃色葡萄球菌等5種菌作為供試菌種，對(duì)無(wú)花果葉提取物中有效成分的抑菌活性進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果表明，無(wú)花果葉提取物對(duì)5種試驗(yàn)菌均有抑菌作用，且抑菌作用隨著濃度的增加而增強(qiáng)。而報(bào)道中對(duì)于無(wú)花果干果提取物的研究較少。

本試驗(yàn)立足于無(wú)花果干果中的活性成分，采用不同溶劑及方法進(jìn)行提取，對(duì)其多酚和黃酮含量測(cè)定，并結(jié)合相應(yīng)的抗氧化活性的分析比較，尋找無(wú)花果干果活性物質(zhì)提取的最適溶劑和方法，旨在為無(wú)花果干果活性物質(zhì)的有效提取提供理論依據(jù)和應(yīng)用基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

無(wú)花果干果購(gòu)于太原市美特好超市。

無(wú)水乙醇，正己烷，氯仿，乙酸乙酯，甲醇，福林酚，Na2CO3，NaNO2，Al（NO3）3，NaOH，NaH2PO4·2H2O，Na2HPO4·12H2O，鐵氰化鉀，三氯乙酸，三氯化鐵，硫酸亞鐵，水楊酸，雙氧水（以上試劑均為分析純）；沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（上海融禾醫(yī)藥科技有限公司）。

1.2 儀器與設(shè)備

UV-2800型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（尤尼柯（上海）儀器有限公司）；GZX-9023MBE型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；JA1203N型電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；SC-3614型低速離心機(jī)（安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司）；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；SHZ-III型循環(huán)水真空泵（上海知信試驗(yàn)儀器技術(shù)有限公司）；XL-600B型多功能粉碎機(jī)（永康市小寶電器有限公司）；SB-4200DT型超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 原料預(yù)處理 無(wú)花果干果切小塊后放置于55℃烘箱中24 h，粉碎后過(guò)0.25 mm篩備用。

1.3.2 提取液的制備

1.3.2.1 一次提取法 取10 g待測(cè)樣品，分別于250 mL三角瓶中加入100 mL乙酸乙酯、正己烷、氯仿，室溫下100 r/min搖床提取2 h，每個(gè)試驗(yàn)重復(fù)2次，合并濾液，于50℃下減壓濃縮至干，再用甲醇定容至10 mL容量瓶中，得到乙酸乙酯、正己烷、氯仿提取物原液，4℃冰箱冷藏備用。同法以體積分?jǐn)?shù)分別為20%，40%，60%，80%的乙醇提取得到相應(yīng)的乙醇提取物原液。

1.3.2.2 雙溶劑萃取法 取10 g待測(cè)樣品，于250 mL三角瓶中加入100 mL 95%的乙醇進(jìn)行提取，放置于搖床（100 r/min）2 h，重復(fù)2次，合并濾液。50℃下減壓濃縮，得到無(wú)花果干果的乙醇浸膏。然后直接加入100 mL乙酸乙酯、正己烷、氯仿進(jìn)行萃取，直到有機(jī)相澄清為止。收集萃取液在50℃下再次減壓濃縮，用甲醇定容至10 mL容量瓶中，分別得到乙酸乙酯、正己烷、氯仿萃取液，于4℃冰箱冷藏備用[13]。

1.3.3 總酚含量測(cè)定[14]總酚含量采用福林-酚法進(jìn)行測(cè)量。分別吸取一次提取和雙溶劑萃取2種方法得到的乙酸乙酯、正己烷、氯仿及不同體積分?jǐn)?shù)乙醇提取物各0.5 mL于10 mL容量瓶中，加入1 mL福林-酚試劑，迅速搖勻，再加入2%碳酸鈉溶液3 mL，蒸餾水定容至刻度線。避光靜置反應(yīng)2 h后，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在760 nm處測(cè)量吸光度。結(jié)果以每克無(wú)花果干果中含有相當(dāng)于沒(méi)食子酸毫克數(shù)表示，單位為mg/g。

1.3.4 總黃酮含量測(cè)定[14]分別吸取一次提取和雙溶劑萃取2種方法得到的乙酸乙酯、正己烷、氯仿及不同體積分?jǐn)?shù)乙醇提取物各0.5 mL于10 mL容量瓶中，依次加入0.4 mL 5%的NaNO2，搖勻后靜置反應(yīng)6 min，加入0.4 mL 5%的Al（NO3）3，搖勻后靜置反應(yīng)6 min，再加入4 mL 5%的NaOH，搖勻后繼續(xù)靜置反應(yīng)15 min，于510 nm處測(cè)定吸光度值。結(jié)果以每克無(wú)花果干果中含有相當(dāng)于蘆丁毫克數(shù)表示，單位為mg/g。

1.3.5 還原能力測(cè)試[15]分別吸取1 mL樣品于10 mL離心管中，加入2.0 mL 0.2 mol/L磷酸鹽緩沖液（pH值為6.6），搖勻后加入2.0 mL 1%鐵氰化鉀溶液，混勻，50℃恒溫水浴反應(yīng)20 min，回到室溫后加入2.0 mL 10%三氯乙酸，4 000 r/min條件下反應(yīng)10 min。之后取2.0 mL上清液，再加入2.0 mL蒸餾水以及0.4 mL 0.1%三氯化鐵混勻，靜置10 min，700 nm處測(cè)定吸光度。重復(fù)測(cè)量求平均值，吸光度越高，還原能力越強(qiáng)。

1.3.6 羥自由基清除率測(cè)定[16]向離心管中依次各加入2.0 mmol/LFeSO42.0 mL，1.0 mmol/LH2O22.0 mL，振蕩，搖勻。再加入6.0 mmol/L水楊酸3.0 mL，搖勻，于37℃水浴加熱15 min。加熱完畢后于510 nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度A1。之后分別加入各待試樣品1.0 mL，搖勻，繼續(xù)水浴加熱15 min，待加熱完畢后再次分別測(cè)其吸光度A2。對(duì)照試驗(yàn)：用2.0 mL蒸餾水取代H2O2溶液，嚴(yán)格重復(fù)上述過(guò)程，測(cè)吸光度A3。其計(jì)算公式如下。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取方法與相應(yīng)提取液中總酚、總黃酮含量[17]比較

2.1.1 一次提取法及其不同溶劑提取物的總酚、總黃酮含量比較 從表1可以看出，3種溶劑作為提取劑均可以有效地提取無(wú)花果干果中的多酚和黃酮類(lèi)物質(zhì)，但是不同溶劑提取物中總酚和總黃酮含量不同，其中以乙酸乙酯為提取溶劑得到的提取物中的總酚和總黃酮含量（分別為（1.528±0.046），（7.946±0.210）mg/g）要高于其他2種提取溶劑得到的。

表1 一次提取及其不同溶劑提取物的總酚、總黃酮含量 mg/g

2.1.2 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇提取物中總酚、總黃酮含量比較 乙醇是大多數(shù)活性成分的有效提取溶劑。從圖1可以看出，采用乙醇作為提取溶劑，通過(guò)一次提取法可以有效地提取無(wú)花果干果中的總酚和總黃酮類(lèi)物質(zhì)，選擇的乙醇的體積分?jǐn)?shù)不一樣，提取的效率也不一樣，其中，采用體積分?jǐn)?shù)為60%的乙醇作為提取溶劑時(shí)，提取效果明顯高于其他體積分?jǐn)?shù)的乙醇，提取物中的總酚（1.738 mg/g）和總黃酮含量（8.472 mg/g）要明顯高于其他體積分?jǐn)?shù)的乙醇。

結(jié)合表1和圖1可以看出，4種提取溶劑中，60%乙醇提取物的總酚和總黃酮含量均高于其他3種提取溶劑。

2.1.3 雙溶劑萃取及其不同溶劑萃取物的總酚、總黃酮含量 從表2可以看出，采用不同溶劑對(duì)無(wú)花果干果的乙醇浸膏進(jìn)行再萃取可以將其中的多酚和黃酮物質(zhì)進(jìn)一步萃取出來(lái)，得到的提取物的總酚和總黃酮含量也不同，其中以乙酸乙酯為萃取溶劑得到的提取物中的總酚和總黃酮含量略高于其他2種溶劑的，且沒(méi)有明顯差異。

表2 雙溶劑萃取及其不同溶劑提取物總酚、總黃酮含量 mg/g

與表1相比，同種提取溶劑采用一次提取法得到的相應(yīng)提取物中總酚和總黃酮含量明顯比雙溶劑萃取法的高，且2種提取方法中，極性越大溶劑萃取所得提取物中總酚和總黃酮含量越高，乙酸乙酯提取物總酚和總黃酮含量最高，正己烷提取物總酚和總黃酮含量最低。

2.2 各提取物還原能力比較[18]

同樣條件下，試驗(yàn)測(cè)定了不同提取物對(duì)應(yīng)的還原力，結(jié)果用吸光度值表示，吸光度值越高，還原能力越大。由圖2可知，在保證多酚活性物質(zhì)濃度一致的情況下，采用一次提取法得到的各提取物的還原能力均比雙溶劑萃取法略高，其中，3種有機(jī)溶劑中乙酸乙酯2種提取方法的提取物還原能力均最高，還原力分別為0.57和0.55；正己烷提取物還原能力最低。還原能力強(qiáng)弱與活性物質(zhì)含量高低的趨勢(shì)一致。但是與乙醇為提取溶劑相比，一次提取法中乙醇提取物的還原力高于其他提取溶劑的，其中，60%乙醇提取物的還原力最大（還原力為1.14），低于或高于這一值，對(duì)應(yīng)的還原力都偏低，與對(duì)應(yīng)不同體積分?jǐn)?shù)乙醇提取物的多酚和黃酮含量的趨勢(shì)一致（圖3）。

2.3 各提取物羥自由基清除能力分析比較[19]

由圖4可知，2種提取方法相比較，在保證多酚活性物質(zhì)濃度一致的情況下，一次提取法各提取物清除羥自由基能力均高于雙溶劑萃取法，不同溶劑清除羥自由基能力趨勢(shì)為：乙酸乙酯＞氯仿＞正己烷，與相應(yīng)的活性物質(zhì)含量趨勢(shì)一致，其中，一次提取法中乙酸乙酯提取物的羥自由基清除能力達(dá)到89.17%，但仍低于60%乙醇提取物（羥自由基清除率為98.77%），低于或高于這一體積分?jǐn)?shù)值，對(duì)應(yīng)的乙醇提取物的羥自由基清除率都偏低，與不同體積分?jǐn)?shù)乙醇提取物中多酚和黃酮含量的趨勢(shì)一致（圖5）。

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)較系統(tǒng)地研究了不同溶劑和不同提取方法對(duì)無(wú)花果干果中多酚和黃酮物質(zhì)提取含量和抗氧化活性的影響[20]。本研究結(jié)果表明，采用同種提取溶劑時(shí)，一次提取法和雙溶劑萃取法都可以有效地提取無(wú)花果干果中的多酚和黃酮類(lèi)物質(zhì)，相比較之下，一次提取法效果更好，一次提取法提取物中多酚和黃酮含量及抗氧化能力均比雙溶劑萃取法高，推測(cè)可能是由于相比一次提取法直接從植物材料中提取活性成分，雙溶劑萃取法中乙醇浸膏的制備可以將原料中的絕大多數(shù)活性成分提取出來(lái)，而再采用乙酸乙酯、氯仿、正己烷等極性較弱的溶劑很難從乙醇中進(jìn)一步將有效成分進(jìn)行萃取，提取機(jī)理還有待進(jìn)一步試驗(yàn)推理。采用3種有機(jī)溶劑乙酸乙酯、氯仿、正己烷進(jìn)行提取，其中，2種方法得到的乙酸乙酯提取物中的多酚和黃酮含量相對(duì)較高，對(duì)應(yīng)的抗氧化能力也較好；3種溶劑提取物的抗氧化能力強(qiáng)弱與其多酚和黃酮含量多少的趨勢(shì)一致，可見(jiàn)提取物的抗氧化活性主要是由其含有的多酚和黃酮物質(zhì)貢獻(xiàn)的，即無(wú)花果干果提取物中多酚和黃酮可能是發(fā)揮抗氧化作用的主要活性物質(zhì)；但是3種有機(jī)溶劑提取物中的多酚和黃酮物質(zhì)含量低于采用乙醇作為提取溶劑得到的提取物中含量，相應(yīng)的抗氧化能力也偏低，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用60%的乙醇為溶劑通過(guò)一次提取法提取無(wú)花果干果中的活性物質(zhì)時(shí)，提取物中的多酚和黃酮含量最高，并與乙醇的體積分?jǐn)?shù)呈正相關(guān)，也與相應(yīng)的抗氧化活性趨勢(shì)一致?？梢?jiàn)，無(wú)花果干果活性成分及抗氧化活性與提取的溶劑和提取方法有一定的關(guān)系，通過(guò)本試驗(yàn)可以推斷，無(wú)花果干果中多酚和黃酮物質(zhì)的最佳提取溶劑為60%乙醇，采用一次提取法效果較好，乙醇提取物中的總酚和總黃酮含量分別為1.738，8.472 mg/g，試驗(yàn)將進(jìn)一步輔助超聲波對(duì)提取條件進(jìn)行優(yōu)化，提高無(wú)花果干果中多酚和黃酮的提取率，也為以后無(wú)花果及其他天然產(chǎn)物的提取提供了參考。

［1］楊潤(rùn)亞，明永飛，王慧.無(wú)花果葉中總黃酮的提取及其抗氧化活性測(cè)定[J].食品科學(xué)，2010，31（16）：78-82.

［2］BEYMB，LOUAILECHE H，ZEMOURIS.Optimization ofphenolic compound recovery and antioxidant activity of light and dark dried fig（Ficus carica L.）varieties[J].Food Science&Biotechnology，2013，22（6）：1613-1619.

［3］SLATNAR A，KLANCAR U，STAMPAR F，etal.Effectofdrying of figs（Ficus carica L.）on the contents of sugars，organic acids，and phenolic compounds[J].Journalof Agricultural&Food Chemistry，2011，59（21）：11696-11702.

［4］ MUJIC I，BAVCON K M，JOKIC S，et al.Characterisation of volatiles in dried white varieties figs（Ficus carica L.）[J].Journalof Food Science&Technology，2014，51（9）：1837-1846.

［5］趙偉，李建科，何曉葉，等.幾種常見(jiàn)植物多酚降血脂作用及機(jī)制研究進(jìn)展[J].食品科學(xué)，2014，35（21）：258-263.

［6］LANZAM.Flavonoids as antioxidantagents：Importance oftheir interaction with biomembranes[J].Free Radical Biology&Medicine，1995，19（4）：481-486.

［7］延璽，劉會(huì)青，鄒永青，等.黃酮類(lèi)化合物生理活性及合成研究進(jìn)展[J].有機(jī)化學(xué)，2008，28（9）：1534-1544.

［8］于晶，郝再彬，蒼晶，等.黃酮類(lèi)化合物的活性研究進(jìn)展[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，39（12）：125-130.

［9］張澤俊，沙坤，馬雯.無(wú)花果葉不同溶劑提取物抗氧化活性的比較研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（12）：6981-6982.

［10］房昱含，魏玉西，趙愛(ài)云，等.無(wú)花果葉提取物抗氧化活性的研究[J].中國(guó)生化藥物雜志，2008，29（6）：366-373.

［11］莊奕筠，張吟，許秋霞，等.超聲波輔助提取無(wú)花果葉中總黃酮的工藝研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2012，47（12）：1003-1005.

［12］齊建紅，馮航.無(wú)花果葉中提取物的抑菌活性研究[J].陜西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，62（3）：62.

［13］李銘花，楊文建，趙政，等.甘草不同極性溶劑提取物抗氧化活性研究[J].糧食與油脂，2009（3）：25-27.

［14］霍麗妮，李培源，鄧超澄，等.眼樹(shù)蓮不同極性溶劑提取物的體外抗氧化活性 [J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（9）：219-221.

［15］崔月花，徐鵬，章克昌.靈芝液態(tài)發(fā)酵有效產(chǎn)物體外抗氧化活性的研究[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2006，32（8）：32-34．

［16］曹曉霞，李翠芹，王喆之.翅莖香青中黃酮類(lèi)物質(zhì)的提取及其抗氧化性研究 [J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2008，8（4）：692-694.

［17］李濟(jì)芳，李芳，金舒寧，等.杏葉總黃酮提取工藝及抗氧化性研究[J].山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，45（2）：258-262.

［18］褚盼盼，宋奇琦，陳月桃，等.苦蕎麥多糖體外抗氧化活性評(píng)價(jià)[J].天津農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，22（9）：45-48.

［19］陳樹(shù)俊，胡潔，王振文，等.超聲波輔助響應(yīng)面法提取藜麥多酚及抗氧化性研究[J].山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，44（11）：1708-1714.

［20］楚祿建，劉陽(yáng)，朱單潔，等.超聲法提取杏鮑菇菌糠總黃酮工藝[J].天津農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，23（5）：49-52.

Study on Different Solvent Extracts of Fig Dried Fruit and Its Antioxidative Activity

XUMan， ZHANGJinhua，BAIBaoqing

（College ofLife Science，ShanxiUniversity，Taiyuan 030006，China）

Four polar solvent（ethylacetate,n-hexane,chloroform,ethanol）were used to extractthe phenols and flavonoids from dried fig fruits by the two differentmethods ofone-time extraction and dual-solventextraction,the totalcontentofwhich were measured. At the same time,the antioxidant activity wes compared by the scavenging activities against hydroxyl and reducing capacity evaluated. The results showed thatthe contentoftotalphenols and flavonoids by one-time extraction were higher than dual-solventextraction,also with theirantioxidantactivity correspondingly.Using the same extraction method,the polarity ofsolventextracts was greater,totalphenols and flavonoids content offour differentextracts was higher,the same as the trend of their antioxidant activity（ethanol extract＞ethyl acetate extract＞chloroform extract＞n-hexane extract）.The extraction effectwas the bestwhen using 60%ethanolas extraction solvent through one-time extraction method,with the highest of the total phenols and flavonoids content and their scavenging activities against hydroxyland reducing capacity.

dried figs;extraction method;antioxidantactivity

S663.3

：A

：1002-2481（2017）09-1430-05

10.3969/j.issn.1002-2481.2017.09.09

2017-04-10

山西大學(xué)引進(jìn)人才建設(shè)項(xiàng)目（113533801003）

徐 蔓（1992-），女，山西運(yùn)城人，在讀碩士，研究方向：天然活性物質(zhì)的提取。張錦華為通信作者。