不同產(chǎn)地甘松藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究

伍 杰，蘭常軍，楊 冬，余海清，彭克忠，劉燕云

(甘孜藏族自治州林業(yè)科學(xué)研究所，四川 康定 626001)

不同產(chǎn)地甘松藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究

伍 杰，蘭常軍，楊 冬，余海清，彭克忠，劉燕云

(甘孜藏族自治州林業(yè)科學(xué)研究所，四川 康定 626001)

目的評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地甘松藥材的質(zhì)量。方法 采用ICP-OES、GC-MS、HPLC等方法，測(cè)定不同產(chǎn)地甘松藥材中甘松新酮、綠原酸、揮發(fā)油、常量元素、水分、總灰分的含量。結(jié)果11批不同產(chǎn)地甘松藥材的水分平均值為9.29%；總灰分平均值為5.98%。11批甘松藥材均含有鈣、鎂、鉀、鈉4種元素，平均含量分別為 3 802 mg·kg-1、1 236 mg·kg-1、8 662 mg·kg-1和149.2 mg·kg-1，其中來(lái)自于瀘定磨子溝的甘松樣品鎂、鉀、鈉含量明顯高于其它10個(gè)產(chǎn)地樣品。從11個(gè)產(chǎn)地甘松藥材揮發(fā)油中共鑒別出80個(gè)化學(xué)成分，其中有6個(gè)共有成分，分別為桉葉油醇、4-甲氧基苯乙烯、(1aR)-1aβ, 2, 3, 3a, 4, 5, 6, 7bβ-八氫-1,1,3aβ, 7-四甲基-1H-環(huán)丙烷[a]萘、(-)-亞葉菊烯、白菖油萜、Espatulenol。11批不同產(chǎn)地甘松藥材中綠原酸平均含量為0.27%，甘松新酮平均含量為0.47%；不同產(chǎn)地甘松樣品中綠原酸和甘松新酮含量有一定的差異，產(chǎn)于瀘定磨子溝的樣品中綠原酸含量最高(0.54%)，而甘松新酮在鄉(xiāng)城二道橋的樣品中含量最高(1.86%)。結(jié)論 不同產(chǎn)地甘松藥材中的揮發(fā)油、常量元素、綠原酸和甘松新酮成分有一定的差異，這可能與不同產(chǎn)地的氣候、生長(zhǎng)環(huán)境、土壤等因素有關(guān)。

甘松；質(zhì)量評(píng)價(jià)；揮發(fā)油；HPLC；常量元素；ICP-OES

甘松為敗醬科植物甘松(NardostachysjatamansiDc.)的干燥根及根莖，藥用歷史悠久，為藏醫(yī)、中醫(yī)常用藥材。除藥用外，在食品、化妝品等領(lǐng)域也被廣泛應(yīng)用，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和開發(fā)前景。甘松性辛、甘、溫，具有散風(fēng)除濕、通竅止痛、消腫排膿的功效，常用于治療脘腹脹滿、食欲不振、嘔吐等癥[1]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，甘松藥材具有抗心律失常、鎮(zhèn)靜、抗癲癇、抗驚厥、抗抑郁、抗心肌缺血、降血壓、解痙、抗菌等諸多作用[2]。

現(xiàn)代研究表明[2]，甘松藥材主要含有萜類成分，大多具有揮發(fā)性，因此揮發(fā)油為甘松藥材的主要成分。另外，甘松還含有甘松新酮、綠原酸、白菖烯、馬兜Espatulenol，以及微量元素等成分。目前，已有文獻(xiàn)[3～4]分別測(cè)定了甘松藥材中的揮發(fā)油、綠原酸、甘松新酮、無(wú)機(jī)元素等成分的含量，但這些方法大多僅測(cè)定了一種、兩種或一類成分，而沒有多類成分同時(shí)檢測(cè)分析的報(bào)道，這顯然不符合中藏藥多成分、多靶點(diǎn)的整體性作用特征。鑒于此，本研究同時(shí)測(cè)定了不同產(chǎn)地甘松藥材中的多類成分的含量，包括甘松新酮、綠原酸、揮發(fā)油、常量元素、水分和總灰分。其中，甘松新酮、綠原酸、揮發(fā)油為甘松藥材中主要的有效成分，與其臨床療效和質(zhì)量密切相關(guān)；水分、總灰分為藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)的基本指標(biāo)，一般藥材的水分越高，貯藏過(guò)程中越容易霉變，藥材的質(zhì)量則越低；而總灰分主要由無(wú)機(jī)物組成，一般藥材的總灰分含量越高，表明可能有泥沙等雜質(zhì)的殘留，則藥材的質(zhì)量越差。此外，常量元素是藥用植物生長(zhǎng)過(guò)程中必不可少的營(yíng)養(yǎng)成分，與藥材的質(zhì)量形成有著重要的關(guān)系。因此，這些成分均與甘松藥材的質(zhì)量息息相關(guān)，通過(guò)檢測(cè)分析，可為從整體上評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地甘松藥材的質(zhì)量提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

美國(guó)Agilent 1260高效液相色譜儀，配備自動(dòng)進(jìn)樣器和柱溫箱；Sartorius BP121s電子天平(北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；2.5-12型箱式電阻爐(沈陽(yáng)市節(jié)能電爐廠)；ULUP-I-10T優(yōu)普超純水機(jī)(成都超純科技有限公司)；CQ-250超聲波清洗器(上海必能信有限公司)；電感耦合等離子發(fā)射光譜儀(ICP-OES)(Agilent Technologies)。

綠原酸對(duì)照品(批號(hào)：PS000630)購(gòu)自成都普思生物科技股份有限公司；甘松新酮對(duì)照品(批號(hào)：MUST-16030615)購(gòu)自成都曼思特生物科技有限公司；鎂元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度：1 000 mg·L-1；標(biāo)物號(hào)：GSB 04-1735-2004)、鈣元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度：1 000 mg·L-1；標(biāo)物號(hào)：GSB 04-1720-2004)、鉀元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度：1 000 mg·L-1；標(biāo)物號(hào)：GSB 04-1733-2004)、鈉元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度：1 000 mg·L-1；標(biāo)物號(hào)：GSB 04-1738-2004)；乙腈為色譜純(Fisher)，水為超純水，其余試劑均為分析純。本文共收集了11批不同產(chǎn)地的甘松藥材，經(jīng)鑒定其為敗醬科植物甘松(NardostachysjatamansiDC.)的干燥根及根莖，藥材來(lái)源見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 甘松中水分、總灰分的測(cè)定

水分測(cè)定參照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0832第四法。總灰分測(cè)定參照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則2302。不同產(chǎn)地甘松樣品的水分和總灰分測(cè)定結(jié)果見表1。結(jié)果，11批不同產(chǎn)地甘松藥材的水分在7.35%～10.53%之間，平均值為9.29%?！吨袊?guó)藥典》2015版一部規(guī)定，甘松藥材的水分不得過(guò)12.0%，結(jié)果表明本研究采集的所有甘松藥材樣品的水分均符合《中國(guó)藥典》要求。此外，11批不同產(chǎn)地甘松藥材的總灰分在4.06～11.23%之間，平均值為5.98%。

表1不同產(chǎn)地甘松藥材中水分、總灰分和4種常量元素的含量測(cè)定結(jié)果

2.2 甘松中4種常量元素(鈣、鎂、鉀、鈉)的測(cè)定

取甘松樣品約0.2 g，精密稱定，置耐壓耐高溫微波消解罐中，加經(jīng)純化硝酸8 ml，靜置10 min，再加2 ml雙氧水，密閉并按微波消解儀的相應(yīng)要求及一定的消解程序進(jìn)行消解。消解完全后，消解液冷卻至60 ℃以下，取出消解罐，放冷，將消解液轉(zhuǎn)入25 ml容量瓶中，用少量超純水洗滌消解罐3次，洗液合并于容量瓶中，用超純水稀釋至刻度，搖勻，待測(cè)。利用電感耦合等離子發(fā)射光譜儀對(duì)甘松樣品中高含量的鈣、鎂、鉀、鈉4種元素進(jìn)行了定量分析。按外標(biāo)法計(jì)算各批次供試品中鈣、鎂、鉀、鈉的含量。測(cè)定結(jié)果見表1。

結(jié)果表明，甘松藥材中均含有鈣、鎂、鉀、鈉4種常量元素，平均含量分別為 3 802 mg·kg-1、1 236 mg·kg-1、8 662 mg·kg-1和149.2 mg·kg-1。此外，11個(gè)樣品中采集地為瀘定磨子溝的甘松樣品鎂、鉀、鈉含量明顯高于其它10個(gè)產(chǎn)地樣品，鎂、鉀和鈉的含量分別達(dá)到 1 728 mg·kg-1、13 149 mg·kg-1、573.0 mg·kg-1；采集地為鄉(xiāng)城秋松崗的甘松樣品，鈣含量最高，達(dá)到 5 010 mg·kg-1，略高于瀘定磨子溝的 4 818 mg·kg-1，明顯高于其余9個(gè)產(chǎn)地的甘松樣品。

2.3甘松藥材中揮發(fā)油成分的GC-MS分析

2.3.1 揮發(fā)油的提取

取不同產(chǎn)地甘松藥材粉末約30 g，按照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則2204甲法提取揮發(fā)油，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，再以1∶5比例加正己烷稀釋，取稀釋液適量，過(guò)0.45 μm微孔濾膜，即得不同產(chǎn)地的甘松揮發(fā)油樣品。

2.3.2 GC-MS條件

GC條件：安捷倫HP-5MS毛細(xì)管色譜柱(30 m × 0.25 μm × 0.25 mm); 柱溫50 ℃(保留2 min)，以5 ℃·min-1升溫至290 ℃，保持2 min；汽化室溫度為280 ℃；載氣為高純He(99.999%)；柱前壓為5.54 kPa；載氣流量為1.0 ml·min-1；進(jìn)樣量為1 μl; 分流比為100∶1。MS條件：離子源溫度為230 ℃；四極桿溫度150 ℃；質(zhì)量范圍為35 Amu～550 Amu。

2.3.3 樣品測(cè)定

不同產(chǎn)地甘松藥材中揮發(fā)油的GC-MS分析結(jié)果見表2。從11個(gè)產(chǎn)地甘松藥材的揮發(fā)油中共鑒別出80個(gè)化學(xué)成分，其中有6個(gè)共有成分，分別為桉葉油醇、4-甲氧基苯乙烯、(1aR)-1aβ, 2, 3, 3a, 4, 5, 6, 7bβ-八氫-1,1,3aβ, 7-四甲基-1H-環(huán)丙烷[a]萘、(-)-亞葉菊烯、白菖油萜、Espatulenol。在11個(gè)產(chǎn)地中，含量較高的成分主要有1-甲基雙環(huán)[3.2.1]辛烷(1.55%～9.56%)、(1aR)-1aβ, 2, 3, 3a, 4, 5, 6, 7bβ-八氫-1,1,3aβ, 7-四甲基-1H-環(huán)丙烷[a]萘(2.91%～8.74%)、白菖油萜(8.15%～19.00%)、Espatulenol(1.58%～3.41%)。

表2不同產(chǎn)地甘松藥材中揮發(fā)油GC-MS分析結(jié)果

續(xù)表2

序號(hào)化合物名稱理塘金礦洞理塘兔兒山鄉(xiāng)城二道橋鄉(xiāng)城秋松崗理塘63K理塘45K理塘上業(yè)務(wù)理塘苗圃瀘定磨子溝理塘白塔理塘軍馬場(chǎng)48十氫二甲基甲乙烯基萘酚-0．170．353．02--1．56---1．77491?(4?羥基苯基)?2?丁烯?1?酮-4．50--5．115．16-6．53-5．474．8450Α?畢橙茄醇-1．85--1．57---1．441．81-51佛手苷內(nèi)酯-0．95--1．141．93-0．45--0．4852(4-甲基苯甲?；?丙酮-9．48--7．64-----53對(duì)氟苯乙腈-0．560．8----0．54-0．220．4754γ?衣蘭油烯-0．280．37--------55cis?Muurola?4(15)，5?diene-0．29-0．570．340．51-0．400．200．51-56(+)?香橙烯--0．111．01---0．62--0．7557L?B?甜沒藥烯0．91--0．931．061．160．851．280．421．140．8958赤霉?4(15)，7?二烯?1β。醇--6．3611．78---6．588．627．838．16591?甲基?3?乙基金剛烷--1．83-0．87------604?(1?甲基乙基)?2?環(huán)己烯?1?酮---0．430．150．590．150．460．38--61異紫杉醇?5?酮--0．13--1．77-----621?甲基?1?(2?甲基?2?丙烯基)環(huán)戊烷---0．074．04------631，1，3?三甲基?1H?茚---0．12-0．21--0．070．18-64葫蘆烯------0．33--0．3365優(yōu)葛縷酮---0．49-----0．32-66a?Selinene--0．660．63-0．410．59--0．640．70671?石竹烯---0．27---0．39-0．16-683?苯基吡咯烷---0．52-----1．020．50692?甲氧基?6?甲基苯甲酸---0．34-----0．30-702，5?二甲基氫醌---0．100．10--0．08-0．12-714?乙基?2?甲基?苯酚---0．04-0．11-0．07-0．160．0972別香橙烯----0．13-1．10---0．87732，6，6?三甲基?1，4?環(huán)己二烯?1?甲醛--0．09-0．50------74α?法尼烯----0．53--0．16---753，3，6?三甲基?1，5?庚二烯?4?醇----0．34--0．05--0．2076白菖烯環(huán)氧化物--0．14-0．05-0．270．160．340．200．1577γ?4?二甲基?苯丁醛-----0．210．28-0．35--782?異丙烯基?1，3，5?三甲基苯-----3．271．17----795?甲酰水楊酸-----0．430．20----80d?綠花白千層醇--0．12---1．86-0．37--

圖1 綠原酸對(duì)照品

2.4 HPLC測(cè)定甘松藥材中綠原酸和甘松新酮的含量

2.4.1 色譜條件

InertSustain?C18色譜柱(4.6 mm× 250 mm，5 μm)；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脫，0～10 min乙腈15%～20%，10 min～20 min乙腈20%～50%，20 min～45 min乙腈50%～75%。在該色譜條件下，甘松樣品中綠原酸和甘松新酮與其他色譜峰分離度良好，見圖1。

2.4.2 供試品溶液的制備

取甘松樣品約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇30 mL，稱定重量，超聲處理(功率200 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取綠原酸5.00 mg、甘松新酮1.47 mg，分別定容于5 mL容量瓶中，得綠原酸和甘松新酮對(duì)照品貯備溶液(濃度分別為1.0 mg·mL-1和0.294 mg·mL-1)。

2.4.4 線性關(guān)系考察

精密吸取綠原酸對(duì)照品貯備溶液1 ml至10 ml容量瓶中，得綠原酸對(duì)照品溶液濃度為0.1 mg·mL-1，分別取綠原酸對(duì)照品溶液1 μL、3 μL、5 μL、8 μL、10 μL、12 μL、15 μL，取甘松新酮對(duì)照品貯備溶液1 μL、3 μL、5 μL、8 μL、10 μL、12 μL注入高效液相色譜儀，測(cè)定其峰面積，以其對(duì)照品峰面積值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得綠原酸的回歸方程為Y=985.85X+ 19.286，r2=0.9993，線性范圍為0.1 μg～1.5 μg，甘松新酮的回歸方程為Y=1 645.6X+56.977，r2=0.999 2，線性范圍為0.294 μg～3.528 μg，其濃度與峰面積線性關(guān)系良好。

2.4.5 樣品含量測(cè)定

取不同產(chǎn)地甘松樣品約0.5 g，精密稱定，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行HPLC測(cè)定，記錄綠原酸和甘松新酮的峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算兩種成分的含量，結(jié)果見表3。

表3不同產(chǎn)地甘松藥材中綠原酸和甘松新酮的含量測(cè)定結(jié)果

編號(hào)產(chǎn)地綠原酸(%)甘松新酮(%)1理塘金礦洞0．210．252理塘兔兒山0．240．493鄉(xiāng)城二道橋0．071．864鄉(xiāng)城秋松崗0．230．475理塘63K0．260．336理塘45K0．260．187理塘上業(yè)務(wù)0．240．358理塘苗圃0．400．249瀘定磨子溝0．540．3910理塘白塔0．300．2711理塘軍馬場(chǎng)0．260．30平均值0．270．47

結(jié)果表明，11批不同產(chǎn)地甘松藥材中綠原酸含量在0.07%～0.54%范圍內(nèi)，平均值為0.27%；甘松新酮含量在0.18%～1.86%范圍內(nèi)，平均值為0.47%?！吨袊?guó)藥典》2015版一部規(guī)定，甘松藥材中甘松新酮含量不得低于0.10%。從表3可知，本研究采集的所有甘松藥材中甘松新酮的含量均高于0.10%，符合《中國(guó)藥典》要求。此外，不同產(chǎn)地甘松樣品中綠原酸和甘松新酮含量有一定的差異，產(chǎn)于瀘定磨子溝的樣品中綠原酸含量最高(0.54%)，其次為理塘苗圃產(chǎn)地樣品(0.40%)，而產(chǎn)于鄉(xiāng)城二道橋的樣品中綠原酸含量最低(0.07%)。與綠原酸不同，甘松新酮在鄉(xiāng)城二道橋的樣品中含量最高(1.86%)，其次為理塘兔兒山產(chǎn)地樣品(0.49%)，而在理塘45K產(chǎn)地的樣品中含量最低(0.18%)。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2015年版[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2015, 86.

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2017-01-10

伍杰(1975-)，男，本科，高級(jí)工程師，主要研究方向?yàn)榱帜九嘤?/p>

10.16779/j.cnki.1003-5508.2017.04.008

S789.3

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:1003-5508(2017)04-0034-05