GC/MS測(cè)定明膠空心膠囊中17種塑化劑

呂東巖王瑩包懿趙守中李天宇劉斌劉洋姜海洋

（1.吉林省食品檢驗(yàn)所長(zhǎng)春130103；2.吉林省計(jì)量科學(xué)研究院長(zhǎng)春130103）

GC/MS測(cè)定明膠空心膠囊中17種塑化劑

呂東巖1王瑩1包懿1趙守中2李天宇1劉斌1劉洋1姜海洋1

（1.吉林省食品檢驗(yàn)所長(zhǎng)春130103；2.吉林省計(jì)量科學(xué)研究院長(zhǎng)春130103）

目的：建立氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)明膠空心膠囊中17種塑化劑，包括鄰苯二甲酸二異壬酯（DINP）的方法。方法：粉碎均勻樣品用乙腈提取，超聲提取30min后取上層清液用氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定。結(jié)果：17種塑化劑的線性關(guān)系較好，方法檢出測(cè)限范圍在0.01～0.24mg/kg，在高、中、低3個(gè)水平下進(jìn)行明膠空心膠囊樣品加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，平均回收率為86.68%～104.21%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差2.69%～5.11% (n=6)。結(jié)論：明膠空心膠囊用乙腈提取比用正己烷等溶劑提取效果好，同時(shí)方法的檢出限低，且該方法簡(jiǎn)便、快捷，溶劑用量小、重現(xiàn)性好。

明膠空心膠囊；塑化劑；鄰苯二甲酸二異壬酯；氣相色譜-質(zhì)譜法

1 引言

《中華人民共和國(guó)藥典》[1]（2015年版）第四部收載了“明膠空心膠囊”產(chǎn)品?！端幍洹芬?guī)定，明膠空心膠囊除了性狀、鑒別外，涉及檢查項(xiàng)目包括松緊度、脆碎度、崩解時(shí)限、鉻等13項(xiàng)。但未對(duì)鄰苯二甲酸酯類增塑劑進(jìn)行考察，而鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)已被列入食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單。衛(wèi)辦監(jiān)督函〔2011〕551號(hào)[2]也明確規(guī)定了食品、食品添加劑中鄰苯二甲酸二（2－乙基已脂）（DEHP）、鄰苯二甲酸二異壬酯（DINP）和鄰苯二甲酸二正丁酯（DBP）的最大殘留量分別為1.5mg/kg、9.0mg/kg和0.3mg/kg。雖然明膠空心膠囊為藥品的包裝材料，但同食品一樣被服用，因此，有必要關(guān)注。

目前，關(guān)于塑化劑的檢測(cè)方法研究已不鮮見(jiàn)，大多為食品[3-4]、食品包裝材料[5-6]、兒童玩具[7-9]等方面的檢測(cè)，而作為藥品包裝材料的明膠空心膠囊中是否含有塑化劑卻未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本方法旨在開(kāi)發(fā)明膠空心膠囊中塑化劑檢測(cè)新方法，為保證明膠空心膠囊質(zhì)量安全提供技術(shù)支持。

2 材料與方法

2.1 儀器與試劑

GC 7890B-MS 5977A型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent公司）；AB204-N型電子分析天平（梅特勒公司），精度為0.1mg；IKA VORTEX GENIUS3圓周振蕩器（廣州儀科公司），運(yùn)行速度≥2000rpm；KQ-300VDE型雙頻數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），HY-4型調(diào)速多用振蕩器（江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司）。

玻璃器皿，天津玻璃儀器廠。注：所用玻璃器皿洗凈后，用重蒸餾水淋洗三次，丙酮浸泡1h，在200℃下烘烤2h，冷卻至室溫備用。

16種PAEs標(biāo)準(zhǔn)品溶液（1000μg/mL，所用的溶劑為正己烷，Dr.Ehrenstorfer GmbH公司)：鄰苯二甲酸二甲酯(DMP）、鄰苯二甲酸二乙酯（DEP）、鄰苯二甲酸二異丁酯（DIBP）、鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）、鄰苯二甲酸（2-甲氧基）乙酯（DMEP）、鄰苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯（BMPP）、鄰苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯（DEEP）、鄰苯二甲酸二戊酯（DPP）、鄰苯二甲酸二己酯（DHXP）、鄰苯二甲酸丁基芐基酯（BBP）、鄰苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯（DBEP）、鄰苯二甲酸二環(huán)己酯（DCHP）、鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）、鄰苯二甲酸二苯酯（DPhP）、鄰苯二甲酸二正辛酯（DNOP）、鄰苯二甲酸二壬酯（DNP）。

鄰苯二甲酸二異壬酯（DINP）標(biāo)準(zhǔn)品，純度＞99.5%，Dr. EhrenstorferGmbH公司。

正己烷、甲醇（色譜純，美國(guó)TEDIA公司）；丙酮（色譜純，美國(guó)J.T.Baker公司）；無(wú)水乙醇（色譜純，天津科密歐公司）；乙腈（色譜純，美國(guó)SIGMA-ALDRICH公司）。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：

將17種PAEs以正己烷溶液配制成DINP濃度為100μg/mL，其他16種PAEs濃度為10μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；準(zhǔn)確移取儲(chǔ)備液，配制成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，使DINP的標(biāo)準(zhǔn)曲線工作范圍為2.0～100μg/mL，其他PAEs標(biāo)準(zhǔn)曲線工作范圍為0.2～10.0μg/mL。

2.2 方法

2.2.1 樣品處理：準(zhǔn)確稱取粉碎均勻的明膠空心膠囊0.5g（精確至0.1mg），置于10mL具塞玻璃離心管中，加入3mL乙腈，超聲提取30min，再用2mL乙腈重復(fù)提取一次，合并提取液，定容至5.0mL，待GC/MS測(cè)定?？瞻讓?shí)驗(yàn)按上述方法進(jìn)行。

2.2.2 氣相色譜條件：色譜柱：HP-5MS石英毛細(xì)管柱（30m× 0.25mm×0.25μm)或相當(dāng)型號(hào)色譜柱；進(jìn)樣口溫度：250℃；升溫程序：初始柱溫60℃，保持1min，以20℃/min升溫至220℃，保持1min，再以5℃/min升溫至280℃，保持10min；載氣：氦氣（純度≥99.999%）；載氣流速：1mL/min；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：1μL。

2.2.3 質(zhì)譜條件：GC/MS接口溫度：280℃；離子源溫度：230℃；四級(jí)桿溫度150℃；電離方式：電子轟擊源（EI源）；電離能量：70eV；監(jiān)測(cè)方式：選擇離子掃描模式（SIM）：監(jiān)測(cè)離子（參見(jiàn)表1）；溶劑延遲5min，17種PAEs標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的提取離子色譜圖（EIC）見(jiàn)圖1。

3 結(jié)果與討論

3.1 提取溶劑的選擇

《食品中鄰苯二甲酸酯的測(cè)定》GB/T21911-2008[10]及《食品塑料包裝材料中鄰苯二甲酸酯的測(cè)定》GB/T21928-2008[11]中塑化劑的提取溶劑為正己烷，因此，除了甲醇、無(wú)水乙醇、丙酮等試劑外，本實(shí)驗(yàn)還著重比較了正己烷、乙腈、正己烷飽和乙腈等不同提取溶劑對(duì)樣品中PAEs的提取效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乙腈對(duì)明膠空心膠囊的提取效果最佳，明顯優(yōu)于正己烷等溶劑，以DIBP、DBP和DEHP為例，結(jié)果如圖2，3。

圖2 DIBP、DBP在三種洗脫溶劑作用下的提取離子色譜圖（EIC）（1號(hào)為乙腈洗脫，2號(hào)為甲醇洗脫，3號(hào)為正己烷洗脫）Fig.2The EIC of DIBP and DBP under different eluting solvent.（1.acetonitrile，2.methanol，3.n-hexane)

圖3 DEHP在三種洗脫溶劑作用下的提取離子色譜圖（1號(hào)為乙腈洗脫，2號(hào)為甲醇洗脫，3號(hào)為正己烷洗脫）Fig.3The EIC of DEHP under different eluting solvent（1.acetonitrile，2.methanol，3.n-hexane）

3.2 提取方式的選擇

實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的提取方式有浸提、超聲、震蕩和渦旋，因此，本方法分別考察相同時(shí)間下，上述提取方式的提取效果。以DIBP和DBP為例，由圖4可見(jiàn)，超聲方式提取效果最佳，而震蕩和浸提效果較差，且震蕩和浸提兩種提取方式對(duì)DBP的提取效果不佳。

3.3 提取時(shí)間的確定

因超聲時(shí)間可能影響溶劑對(duì)塑化劑的提取效果，特考察了超聲10min、20min、30min、40min、50min、60min對(duì)塑化劑的提取效果的影響。結(jié)果顯示超聲30min時(shí)，提取效果最佳。超聲時(shí)間延長(zhǎng)，提取效果不再明顯，反而會(huì)產(chǎn)生干擾。

3.417 種塑化劑的線性方程及最低檢出限

將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用正己烷稀釋，使DINP的標(biāo)準(zhǔn)曲線工作范圍為2.0～100μg/mL，其他PAEs標(biāo)準(zhǔn)曲線工作范圍為0.2～10.0μg/ mL，以塑化劑濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，17種塑化劑的線性回歸方程見(jiàn)表1。

本方法的最低檢出限（LOD）為取某一低濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液加入空白明膠空心膠囊中，重復(fù)測(cè)定6次，以3倍信噪比時(shí)PAEs濃度計(jì)算出17種PAEs方法最低檢出限LOD(mg/kg)，計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表1。

圖4 DIBP、DBP在四種洗脫溶劑作用下的提取離子色譜圖(EIC)（1號(hào)為超聲，2號(hào)為渦旋，3號(hào)為震蕩，4號(hào)為浸提）Fig.4The EIC of DIBP and DBPunder different eluting solvent.（1.ultrasonic，2.vortex，3.Shock，4.extraction)

表117 種塑化劑的線性方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限Table1The linear equations，correlation coefficients，and detection limits of 17 PAEs

3.5精密度與回收率

取0.5g空白明膠空心膠囊樣品，分別進(jìn)行不同濃度的添加，按[2.2.1]方法處理后進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示，方法的平均回收率在86.68%～104.21%范圍內(nèi)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.69～5.11%（n=6）范圍內(nèi)（見(jiàn)表2），該方法的重現(xiàn)性較好，準(zhǔn)確度符合要求。

表2 明膠空心膠囊中17種塑化劑的平均回收率及精密度Table2The quantitativerecoveriesandprecisionsof17PAEs invacantgelatin capsules

3.6 明膠空心膠囊樣品的測(cè)定

本次共測(cè)定市售明膠空心膠囊樣品20批次，DEP、DIBP、DBP、DEHP均有不同程度的檢出，由監(jiān)測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，DEP檢出最高值為0.63mg/kg，檢出率為25%（5/20）；DIBP檢出最高值為3.23mg/kg，檢出率為30%（6/20）；DBP檢出最高值為0.66mg/kg，檢出率為20%（4/20）；DEHP檢出最高值為0.41mg/kg，檢出率高達(dá)40%（8/20），DINP均未檢出。

如果僅以DBP、DEHP、DINP三種鄰苯二甲酸酯類化合物作為判定標(biāo)準(zhǔn)的話，監(jiān)測(cè)樣品中共有4個(gè)產(chǎn)品超出國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)限制，占明膠空心膠囊樣品的20%。說(shuō)明鄰苯二甲酸酯類化合物在明膠空心膠囊中普遍存在，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)明膠空心膠囊中塑化劑的監(jiān)督，特別是對(duì)DIBP的監(jiān)督。

4 結(jié)論

本方法用乙腈作溶劑，采用超聲提取法對(duì)明膠空心膠囊中的塑化劑進(jìn)行提取和GC/MS選擇離子監(jiān)測(cè)模式進(jìn)行測(cè)定，建立了明膠空心膠囊中17種塑化劑（包括DINP）的檢測(cè)方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法提取效果好，檢出限低；處理過(guò)程簡(jiǎn)捷、快速、溶劑用量??；顛覆了傳統(tǒng)的正己烷提取系統(tǒng)，為明膠空心膠囊中塑化劑的監(jiān)測(cè)提供技術(shù)支持。

[1]Pharmacopoeia of People's Republic of China,2015 Edition，fourth.（《中華人民共和國(guó)藥典》，2015年版，四部）.

[2]Letter of the general office of the Ministry of health of thepeople's Republic of China on the maximum residue of phthalicacid esters in food and food additives（2011）Number 551.（衛(wèi)生部辦公廳關(guān)于通報(bào)食品及食品添加劑中鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)最大殘留量的函，衛(wèi)辦監(jiān)督函〔2011〕551號(hào)）.

[3]Chu Y，Liang D P，Sun Y M，Liu C H，Liu H.Journal of theChinese Cereals and Oils Association（褚玥，梁德沛，孫遠(yuǎn)明，柳春紅，劉輝.）中國(guó)糧油學(xué)報(bào)，2014，29（2）：94-99.

[4]Liu S J，F(xiàn)ang C G，Li Q，Jiang N，Yang D P.Chinese Journal of Health Laboratory Technology.（劉思潔，方赤光，李青，姜楠，楊大鵬.)中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2012，22（3）：598-600.

[5]Fang L，Lin Z P，Lin C H，Wang L P，Wu L T，Li X Y.foodindustry.（方麗，林澤鵬，林晨，王李平，吳凌濤，李雪瑩.）食品工業(yè)，2015，36（1）291-296.

[6]Bie T Y.Food Research And Development.（別同玉）.食品研究與開(kāi)發(fā)，2015，36（20）：123-126.

[7]Xu J，Wang H H，Zhu J B.Chemical Analysis and Meterage.(徐靖，汪歡晃，朱靜波.）化學(xué)分析計(jì)量，2010，19（2）：24-2.

[8]CuiW，XuJ，WenY，YangLG，ZhangL.HealthVocational Education.（崔雯，徐婧，聞毅，楊立剛，張林，康學(xué)軍.)衛(wèi)生職業(yè)教育, 2011，29（7）：108-110.

[9]Huang Y H.Plastics Science and Technology.（黃永輝)塑料科技, 2011，39（1）：94-98.

[10]GB/T 21911-2008.Determination of phthalate esters in foods.（食品中鄰苯二甲酸酯的測(cè)定.中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)）.

[11]GB/T 21928-2008.Determination of phthalate esters in food plastic packaging materials.（食品塑料包裝材料中鄰苯二甲酸酯的測(cè)定.中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)）.

Determinationof 17 kinds of plasticizer in Vacant gelatin capsules by chromatography-mass spectrometry

LVDong-yan1，WangYing1，BAOYi1，ZHAOShou-zhong2，LITian-yu1，LIUBin1，LiuYang1，JIANGHai-yang1
（1.Jilin Province Food Testing Institute，Changchun 130103，China；2.Jilin Institute of Metrologyand Research，Changchun 130022，China)

Objective:The method was established for the determination of 17 kinds of plasticizer（PAEs，incluiding DINP）in Vacant gelatin capsules by gas chromatography/mass spectrometry.Methods:The PAEs in the Crushing uniform sample were extraction by acetonitrile，Ultrasonic extraction after 30min take supernatant liquid gas and directly detected with gas chromatography spectrometry（GC-MS）.Results:The PAEs content was analyzed and it was in good linear relationship.The detection limits of 17 PAEs were from 0.01mg/kg to 0.24mg/kg.The recovery range was between 86.68%and 104.21%in low，middle and higher level standard addition experiments.The relative standard deviations were between 2.69%and 5.11%（n=6）.Conclusion:The acetonitrile solvent precedes n-hexane using were extracted 17 kinds of plasticizer in Vacant gelatin capsules and significantly lower the detection limits.The method is simple，accurate，and has good reproducibility；meanwhile the solvent consumption is small in this method.

Vacant gelatin capsules；Plasticizer；DINP；Gaschromatography-massspectrometry（GC/MS）

10.16627/j.cnki.cn22-1215/s.2017.09.018