瘧疾快速診斷試劑卡與鏡檢及乳酸脫氫酶檢驗結(jié)果比較觀察

盧愈新?覃丕恩?潘茂華?宋啟靈?蘇澤強?覃宇城?鄒春燕?黃亞銘

[摘要] 目的 分析以檢測瘧原蟲乳酸脫氫酶的瘧疾快速檢測試劑卡與瘧原蟲鏡檢及瘧疾患者乳酸脫氫酶檢測進行比較觀察。 方法 對2015～2016年在加納務(wù)工返鄉(xiāng)人員以瘧原蟲鏡檢陽性住院治療前的患者作為主要觀察對象，同時進行快速瘧原蟲檢測試劑卡檢測（膠體金法）及患者乳酸脫氫酶檢測，瘧疾陽性患者按照四種瘧原蟲種類分組統(tǒng)計分析比較。 結(jié)果 瘧疾觀察患者共144例，其中鏡檢陽性患者共142例和2例臨床癥狀明顯血檢陰性患者，鏡檢陽性率為98.61%（142/144）。惡性瘧108例，間日瘧、三日瘧和卵形瘧分別為9例、1例和24例?？焖侬懺x檢測試劑檢測總體陽性率為95.14%（137/144），兩種方法的統(tǒng)計學檢驗差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。乳酸脫氫酶增高的患者占44.44%（64/144），與血檢方法比較統(tǒng)計學檢驗差異有高度統(tǒng)計學意義（P<0.01）。結(jié)論 該快速瘧原蟲檢測試劑對瘧原蟲鏡檢技術(shù)掌握不熟練的醫(yī)療機構(gòu)是一種較好的輔助檢測試劑。而臨床檢驗乳酸脫氫酶增高患者作為判斷為瘧疾患者存在較大的差異。

[關(guān)鍵詞] 瘧疾；鏡檢；瘧疾快速診斷；乳酸脫氫酶

[中圖分類號] R531.3 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）16-07-04

Comparison of the results of the rapid diagnostic kit for malaria with microscopic examination and detection of lactic dehydrogenase

LU Yuxin1 QIN Pi'en1 PAN Maohua1 SONG Qiling1 SU Zeqiang1 QIN Yucheng1 ZOU Chunyan2 HUANG Yaming3，4

1. Shanglin County Peoples Hospital of the Guangxi Zhuang Autonomous Region， Shanglin 530500， China； 2. The Guangxi Zhuang Autonomous Region Peoples Hospital， Nanning 530021， China； 3. The Guangxi Zhuang Autonomous Region Center for Disease Control and Prevention， Nanning 530028， China； 4. School of Life Science and Technology， Guangxi University， Nanning 530004， China

[Abstract] Objective To analyze the comparison of rapid malaria detection kit for detection of Plasmodium lactate dehydrogenase was used to detect lactate dehydrogenase in malaria patients and malaria parasites. Methods The migrant workers returned home to patients who had been hospitalized for malaria positive microscopy from Garnor during 2015 to 2016 were selected as the major observation object. At the same time， rapid detection of malaria parasites by reagent card test （colloidal gold method） and patient lactate dehydrogenase test were carried on. Malaria positive patients were grouped， analyzed and compared according to four species of plasmodium. Results A total of 144 malaria patients were observed， of whom 142 were positive and 2 were clinically negative. The positive rate of microscopy was 98.61%（142/144）. There were 108 cases of falciparum malaria， 9 cases of vivax malaria， three days malaria and 24 cases of oval malaria， 1 cases and two cases. The overall positive rate of rapid detection of Plasmodium parasites was 95.14%（137/144）， and the difference between the two methods was not statistically significant（P>0.05）. Lactic dehydrogenase increased in 44.44%（64/144）. Compared with blood test， the difference between the two methods was statistically significant（P<0.01）. Conclusion The rapid detection agent for Plasmodium falciparum is a better assistant detection reagent for the medical institutions with poor grasp of the microscopic examination technique of plasmodium. The clinical test shows that lactic dehydrogenase increased in patients with malaria as judged there was a big difference.endprint

[Key words] Malaria； Microscopy； Rapid diagnosis of malaria； Lactate dehydrogenase

廣西上林縣2013～2016年累計從非洲輸入的瘧疾患者共1582例，占廣西輸入性瘧疾患者總數(shù)的85%，住院治療共1007例，屬于國內(nèi)累計從非洲輸入性瘧疾病例數(shù)量最多且最集中的一個縣[1-3]。特別是2013年6～7月出現(xiàn)短期大量從加納返鄉(xiāng)務(wù)工人員，入院治療的瘧疾患者急劇增加，曾經(jīng)最多的一天達到18例瘧疾患者，每年均有重癥瘧疾患者（腦型瘧）入院進行搶救，給臨床檢驗和住院治療造成極大壓力，為評價瘧疾快速診斷試劑卡與瘧疾鏡檢及乳酸脫氫酶之間的關(guān)系，在部分瘧疾患者中進行了比較觀察現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 觀察對象

上林縣2015～2016年在非洲加納務(wù)工返鄉(xiāng)人員因瘧疾發(fā)病入院治療患者作為觀察對象，瘧疾患者入院后治療前，經(jīng)顯微鏡鏡檢證實為瘧原蟲陽性患者，并做鏡檢瘧原蟲蟲種分類。同時采用瘧原蟲快速檢測試劑卡對血檢瘧原蟲陽性患者血樣做檢測?；颊哐獦訖z驗科同時做乳酸脫氫酶檢驗。

1.2 瘧原蟲鏡檢

取臨床診斷瘧疾患者耳垂血或靜脈血，用干凈的載玻片制作成厚、薄血膜，待自然干燥后，用甲醇固定薄血膜后，采用3%～4%吉姆薩染液染色25～30min，用清水緩慢沖去染液，自然晾干后顯微鏡油鏡頭下鏡檢，對鏡檢瘧疾陽性樣品同時進行瘧原蟲分類，對厚血膜全部鏡檢完未發(fā)現(xiàn)瘧原蟲判斷為陰性，對臨床瘧疾癥狀典型而血檢陰性患者同樣做瘧原蟲快速檢測試劑檢測。

1.3 瘧原蟲快速檢測試劑卡

試劑為廣州萬孚生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)的瘧原蟲檢測試劑（膠體金法），產(chǎn)品標準編號YZB/國4201-2011，2015年采購該試劑，有效期為24個月，均在有效期使用。該產(chǎn)品試劑條上主要包被有瘧原蟲的乳酸脫氫酶單克隆抗體。檢測方法和結(jié)果判斷均按照使用說明書進行。醫(yī)院檢驗科對瘧原蟲鏡檢陽性血樣同時采用瘧原蟲檢測試劑卡進行檢測。結(jié)果判斷試劑卡對照C條顯示為試劑正常，單獨T1條顯示為惡性瘧原蟲感染，單獨T2條顯示為間日瘧原蟲或三日瘧及卵形瘧原蟲感染，T1和T1同時顯示為惡性瘧合并其它三種瘧原蟲任何一種或幾種瘧原蟲感染。

1.4 乳酸脫氫酶檢驗

采用酶速率法進行檢測，試劑為上海執(zhí)誠生物科技有限公司生產(chǎn)的試劑盒（IFCC推薦方法（L→P）。此方法基于乳酸脫氫酶可以作用試劑中的乳酸和輔酶Ⅰ氧化型反應(yīng)得到丙酮酸和輔酶Ⅰ還原型，故可以在340nm處測定輔酶Ⅰ還原型特定吸收的上升速率進而計算出樣品中乳酸脫氫酶的活力。乳酸脫氫酶正常值110～240u/L

1.5 統(tǒng)計方法

患者血檢瘧原蟲陽性及瘧原蟲快速檢測試劑卡檢測和乳酸脫氫酶檢驗陰陽性均樣品按照瘧原蟲種種類進行統(tǒng)計分析，采用Excel 2003版軟件對檢測數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析并制作統(tǒng)計表，同時對數(shù)據(jù)進行卡方檢驗統(tǒng)計處理。

2 結(jié)果

2.1 觀察對象

瘧疾患者共144例，全部來自上林縣在非洲加納務(wù)工返鄉(xiāng)人員，返鄉(xiāng)人員在國外務(wù)工期間反復(fù)瘧疾發(fā)作并反復(fù)多次進行過抗瘧藥治療。

2.2 瘧原蟲鏡檢陽性

144例瘧疾中有142例血檢陽性，總陽性率為98.61%（142/144）?；颊咧袗盒辕懻?5%（108/144），間日瘧占6.25%（9/144），三日瘧占0.69%（1/144），卵形瘧占 16.67%（24/144），其中2例患者臨床癥狀典型而鏡檢為陰性占1.39%（2/144），見表1。

2.3 快速診斷試劑卡檢測

鏡檢惡性瘧陽性患者108例經(jīng)快速診斷試劑卡檢測結(jié)果，總的瘧原蟲檢出陽性率為96.30%（104/108），單純惡性瘧患者為51例，惡性瘧混合其它瘧原蟲感染為44例，合計為95例，陽性率為87.96%（95/108）。值得注意的是鏡檢4例陽性惡性瘧患者經(jīng)反復(fù)鏡檢為陽性但反復(fù)快速診斷試劑卡測試均為陰性，同樣的問題在卵形瘧的檢測中也一樣出現(xiàn)。對142例鏡檢陽性及2例鏡檢陰性但瘧疾臨床癥狀典型患者血樣采用快速檢測試劑卡檢測總的陽性達到95.14%（137/144），鏡檢和快速診斷試劑卡檢測的陽性率，兩種方法的統(tǒng)計學檢驗差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

2.4 瘧疾患者乳酸脫氫酶檢驗

鏡檢瘧原蟲陽性的144例瘧疾患者同時進行乳酸脫氫酶檢測結(jié)果顯示，只有44.44%（64/144）瘧疾患者存在乳酸脫氫酶增高，與血檢方法比較統(tǒng)計學檢驗差異有高度統(tǒng)計學意義（P<0.01），見表1，因此，臨床檢驗乳酸脫氫酶增高患者作為判斷為瘧疾患者存在較大的差異。

3 討論

據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）《2015年世界瘧疾報告》2015年全世界瘧疾病例數(shù)和死亡病例數(shù)與2000年相比有明顯的下降，但瘧疾病例數(shù)仍然有2.14億例，受瘧疾威脅人群為32億，瘧疾死亡病例

數(shù)為43.8萬人，有88%的瘧疾病例和90%瘧疾死亡病例均在非洲區(qū)域[4]。中國自2008年開始從非洲輸入性瘧疾患者逐年增多[5]，到2013年廣西輸入性瘧疾患者疫情呈現(xiàn)爆發(fā)性增多[6]，輸入性瘧疾患者主要集中在上林縣，直到目前該縣仍然是廣西輸入性瘧疾患者最多的地方，給當?shù)氐寞懠卜乐渭叭朐褐委煰懠不颊叩募皶r診斷和早治療帶來巨大的挑戰(zhàn)。國內(nèi)在本世紀初就開始現(xiàn)場測試國外生產(chǎn)的瘧疾快速診斷試劑產(chǎn)品[7-8]，所測試目標物質(zhì)為瘧原蟲的蛋白和代謝過程所產(chǎn)生的酶，蛋白為富含組氨酸蛋白II（HRP II），酶為醛縮酶（ALD&ALS）和乳酸脫氫酶（pfLDH &panLDH）兩種，這些瘧原蟲抗原用其制成單克隆抗體后包被在硝酸纖維膜上來檢測瘧疾患者血中的蛋白或酶[9]。目前國內(nèi)報道現(xiàn)場使用的產(chǎn)品分為國內(nèi)和國外兩種產(chǎn)品，同時分有檢測HRP II 和p-LDH檢測試劑卡及pfLDH和panLDH試劑卡兩種快速檢測試劑卡，HRP II 抗原為瘧原蟲合成的一種水溶性蛋白，即使血液中蟲體被清除后，該蛋白仍然會在血液中存在一段時間，據(jù)臨床觀察15d仍然檢測為陽性[10]，而pLDH是瘧原蟲的一種循環(huán)抗原，僅有活性蟲體產(chǎn)生，pLDH 的活性與瘧原蟲血癥水平一致，在抗瘧藥治療后2～4d，采用pLDH快速檢測試劑卡檢測結(jié)果為陰性[11]。本研究對鏡檢和快速檢測試劑卡檢測陽性患者同時檢測了患者血液中的乳酸脫氫酶，初步的研究顯示，乳酸脫氫酶增高的患者僅為44.44%，這或許與患者體內(nèi)瘧原蟲密度高低有關(guān)以及患者其它疾病引起該酶的增高，作為判斷為瘧疾患者存在較大的差異。關(guān)于快速檢測試劑卡檢測142例鏡檢陽性患者中出現(xiàn)7例陰性患者也可能由于瘧原蟲密度過低相關(guān)。本次研究檢測顯示，瘧疾患者采用鏡檢與快速診斷試劑卡兩種方法比較統(tǒng)計學檢驗差異無統(tǒng)計學意義，該快速瘧原蟲檢測試劑對瘧原蟲鏡檢技術(shù)掌握不熟練的醫(yī)療機構(gòu)是一種較好的輔助檢測試劑。國外與國內(nèi)瘧原蟲快速檢測試劑檢測效果國內(nèi)學者進行過現(xiàn)場比較研究，結(jié)果顯示兩者無差異[12-13]。采用瘧疾快速診斷試劑盒對國內(nèi)外瘧疾患者的檢測觀察結(jié)果表明[14-15]，與瘧原蟲鏡檢相比該診斷試劑盒的優(yōu)勢是操作簡單、無需任何儀器設(shè)備、檢測所需時間短、檢測結(jié)果判斷容易，對瘧原蟲鏡檢技術(shù)掌握不熟練的醫(yī)療機構(gòu)及基層醫(yī)院是一種瘧疾患者診斷較好的輔助檢測試劑。endprint

[參考文獻]

[1] Lai S，Wardrop NA，Huang Z，et al.Plasmodium falciparum malaria importation from Africa to China and its mortality： an analysis of driving factors[J].Sci Rep，2016，21（6）：395-424.

[2] 盧愈新，覃宇城，周建鈞，等.非洲輸入性瘧疾病例合并血小板減少情況分析[J].基層醫(yī)學論壇，2016，20（17）：2317-2319.

[3] 馬安翔，蔣益寶，溫勇康，等.2010-2014年廣西上林縣流動人口瘧疾監(jiān)測效果分析[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學，2016，43（9）：1694-1698.

[4] World Health Organization.2015 world malaria report[R]. Geneva：WHO Press，2015：2-20.

[5] 王亞麗，王煊，張彥平.2005-2013年全國本地感染與境外輸入瘧疾流行病學特征分析[J].中國媒介生物學及控制雜志，2015，26（2）：120-126.

[6] 何章飛，沈利.非洲瘧疾流行概況及對我國消除瘧疾的影響[J].熱帶病與寄生蟲學，2014，12（4）：271-274.

[7] 張再興，楊亞明.ICT瘧疾快速診斷卡與鏡檢的現(xiàn)場應(yīng)用效果比較[J].實用寄生蟲病雜志，2000，8（1）：29.

[8] 周升，張再興，李麗，等.OptiMAL 瘧疾快速診斷試紙條的現(xiàn)場應(yīng)用評價[J].中國熱帶醫(yī)學，2006，6（9）：1573-1574.

[9] 劉慧，賈瑞海，李春富，等.BinaxNOW 瘧疾快速診斷試劑卡現(xiàn)場應(yīng)用效果[J].中國血吸蟲病防治雜志，2008，20（6）：449-451.

[10] 范志成，邵英，夏詠，等.快速診斷試劑對惡性瘧病例治療后追蹤檢測觀察[J].寄生蟲病與感染性疾病，2012，10（4）：224-225.

[11] 張勇，宋維勝，張西才，等.快速診斷試劑盒在瘧疾診斷中的應(yīng)用效果[J].熱帶病與寄生蟲學，2014，12（3）：152-154.

[12] 營雅茹，李衛(wèi)東，張?zhí)?，?快速檢測試劑條、鏡檢和PCR在瘧疾診斷中的應(yīng)用研究[J].中華疾病控制雜志，2014，18（2）：163-165.

[13] 李衛(wèi)東，張?zhí)希o靜，等.國產(chǎn)試劑RDT 診斷瘧疾效果評價[J].中國病原生物學雜志，2013，8（12）：1099-1101.

[14] 王真瑜，江莉，張耀光，等.兩種瘧疾快速診斷試劑盒檢測效果的比較[J].中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志，2014，32（1）：50-53.

[15] 江海龍，田利源，王光輝，等.快速診斷試劑盒在援非人員瘧疾診斷中的應(yīng)用研究[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2015，12（增刊Ⅱ）：107-108.

（收稿日期：2017-05-15）endprint