P21及CDK6與宮頸鱗狀細(xì)胞癌的關(guān)系

劉 靜,江 葉,閔 敏,許建瓊,袁 華,曾 淋,宋大萍

(四川省綿陽市第三人民醫(yī)院病理科 621000)

P21及CDK6與宮頸鱗狀細(xì)胞癌的關(guān)系

劉 靜,江 葉,閔 敏,許建瓊,袁 華,曾 淋,宋大萍△

(四川省綿陽市第三人民醫(yī)院病理科 621000)

目的 觀察P21、CDK6在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)情況，探討其與宮頸鱗狀細(xì)胞癌的關(guān)系。方法 采用免疫組織化學(xué)ABC法檢測(cè)100例宮頸鱗狀細(xì)胞癌、20例宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)及20例正常宮頸組織中P21及CDK6的表達(dá)情況，分析他們與癌組織分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期的關(guān)系。結(jié)果 宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織的P21及CDK6表達(dá)率均明顯高于CIN組及正常組；P21的低表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期(P<0.05)有關(guān)，與腫瘤分化程度(P>0.05)無關(guān)；CDK6的高表達(dá)與腫瘤分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期(P<0.05)均有關(guān)。結(jié)論 P21及CDK6表達(dá)異?？赡茉趯m頸鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用；且二者對(duì)判斷宮頸鱗狀細(xì)胞癌的預(yù)后有一定意義。

P21；細(xì)胞周期蛋白依賴激酶6；宮頸腫瘤;腫瘤,鱗狀細(xì)胞

近年來對(duì)于腫瘤發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制研究很多，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞癌變與細(xì)胞周期調(diào)控異常密切相關(guān)，細(xì)胞周期素依賴性激酶(CDK)推動(dòng)細(xì)胞過度增殖，細(xì)胞CDK抑制劑抑制細(xì)胞過度增殖[1]。宮頸癌是一漸進(jìn)性的細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制破壞的疾病，其發(fā)生是細(xì)胞增殖生長(zhǎng)的調(diào)控與調(diào)節(jié)嚴(yán)重紊亂的結(jié)果[2]。本研究檢測(cè)CDK6及CDKⅠ P21在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)情況，探討其與宮頸鱗狀細(xì)胞癌的關(guān)系，評(píng)價(jià)其對(duì)于宮頸癌患者的預(yù)后意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 所有病例及標(biāo)本均為本院2011年1月至2015年1月經(jīng)病理診斷為宮頸鱗狀細(xì)胞癌和宮頸上皮內(nèi)瘤樣變(CIN)的組織，以及因其他原因行子宮全切術(shù)而宮頸正常組織，并經(jīng)過復(fù)驗(yàn)證實(shí)。病理診斷、分類均參照WHO的分類標(biāo)準(zhǔn)，臨床病理分期均按宮頸癌國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟2000年(FIGO 2000)標(biāo)準(zhǔn)。選擇對(duì)象均無術(shù)前放、化療史，術(shù)后均有隨訪。其中宮頸鱗狀細(xì)胞癌組100例，CIN組20例，正常宮頸組20例。宮頸鱗狀細(xì)胞癌組低分化19例，中高分化81例；臨床病理分期Ⅰ、Ⅱ期83例，Ⅲ、Ⅳ期17例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移84例。全部標(biāo)本均為5%中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋切片。

1.2 方法 采用免疫組織化學(xué)ABC法對(duì)標(biāo)本進(jìn)行P21、CDK6檢測(cè)。即用型非生物素聚合物免疫組織化學(xué)Polink-1檢測(cè)試劑盒(PV-6000)及鼠抗P21、CDK6單克隆抗體(工作液)均來自北京中杉金橋公司。以PBS液代替一抗作為陰性對(duì)照，以已知的多次試驗(yàn)對(duì)照有效的宮頸癌標(biāo)本作為陽性對(duì)照。全部切片均厚4 μm。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) P21陽性著色定位于細(xì)胞核，細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒則為陽性細(xì)胞；反之，則為陰性細(xì)胞。CDK6陽性著色定位于細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒則為陽性細(xì)胞；反之，則為陰性細(xì)胞。隨機(jī)抽取20個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)大于或等于500個(gè)腫瘤細(xì)胞，按陽性細(xì)胞所占百分比分級(jí)如下：陽性細(xì)胞數(shù)小于10%為陰性表達(dá)；陽性細(xì)胞數(shù)大于或等于10%為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)數(shù)資料用率表示，率的比較采用四格表χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 P21與CDK6在各組中表達(dá) P21在正常宮頸組、CIN組及宮頸鱗狀細(xì)胞癌組中的陽性表達(dá)率逐漸升高(依次為0、15.0%、44.0%),宮頸鱗狀細(xì)胞癌組與正常宮頸組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),宮頸鱗狀細(xì)胞癌組與CIN組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CDK6在正常宮頸組、CIN組及宮頸鱗狀細(xì)胞癌組中的陽性表達(dá)率逐漸升高，宮頸鱗狀細(xì)胞癌組與正常宮頸組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，宮頸鱗狀細(xì)胞癌組與CIN組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),見圖1、2及表1。

A:正常宮頸組；B：CIN組；C：鱗狀細(xì)胞癌組

圖1 P21在各組中的表達(dá)(×400)

A:正常宮頸組；B：CIN組；C：鱗狀細(xì)胞癌組

圖2 CDK6在各組中的表達(dá)(×400)

表1 P21與CDK6在各組中的表達(dá)情況[n(%)]

表2 P21、CDK6陽性表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

2.2 P21及CDK6的表達(dá)與腫瘤臨床病理特征的相關(guān)性 P21在高中分化及低分化宮頸鱗狀細(xì)胞癌組中的陽性表達(dá)率逐漸降低(分別為48.1%、28.6%)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；P21的陽性表達(dá)降低與腫瘤浸潤(rùn)深度(P<0.05)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.05)相關(guān)；在FIGO分期中，Ⅰ、Ⅱ期P21表達(dá)與Ⅲ、Ⅳ期相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CDK6的陽性表達(dá)與腫瘤分化程度(P<0.05)、浸潤(rùn)深度(P<0.05)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.05)相關(guān)；在FIGO分期中，Ⅰ、Ⅱ期CDK6表達(dá)與Ⅲ、Ⅳ期比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

3 討 論

腫瘤是一種細(xì)胞周期性疾病，細(xì)胞周期主要依靠細(xì)胞周期素(cyclin)、CDK及周期蛋白依賴性激酶抑制因子CKI三者的相互作用進(jìn)行調(diào)控，cyclin和CDK是細(xì)胞周期正調(diào)節(jié)蛋白，CKI是細(xì)胞周期負(fù)調(diào)節(jié)蛋白[3]。

CDKs處于細(xì)胞周期調(diào)控中心，在細(xì)胞周期的特定時(shí)相激活或失活，其異常表達(dá)可使細(xì)胞周期調(diào)控發(fā)生障礙，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生[4]。許多研究一致表明胃癌[5]、肝癌[6]、子宮內(nèi)膜腺癌[7]、口腔鱗狀細(xì)胞癌[8]等的CDK6蛋白水平表達(dá)增高。本研究在67%的宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本中檢測(cè)到CDK6蛋白水平也異常增高，并發(fā)現(xiàn)CDK6的陽性表達(dá)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌的分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及臨床分期相關(guān)，提示CDK6有可能成為預(yù)測(cè)宮頸鱗狀細(xì)胞癌預(yù)后的新指標(biāo)，并為腫瘤的基因治療提供新途徑。

CKIs家族成員包括P16、P21、P27、P15。1993年，Harper分離出P21的cDNA[9]。P21蛋白可抑制CDK2和CDK4/6的活性，使去磷酸化Rb水平升高，抑制轉(zhuǎn)錄因子E2F所調(diào)控基因的激活，使細(xì)胞周期停滯于G2期[10]。所以理論上P21的表達(dá)水平在腫瘤中應(yīng)該降低。但對(duì)現(xiàn)有的關(guān)于肝癌[11]、直腸癌[12]、淋巴瘤[13]、外陰癌[14]等P21的表達(dá)情況及意義的文獻(xiàn)進(jìn)行分析，結(jié)果尚不一致。本研究發(fā)現(xiàn)P21在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中高表達(dá)，但隨著腫瘤的分化程度變差，浸潤(rùn)深度加深，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期晚時(shí)，P21的表達(dá)逐漸降低，且除了分化程度外(P>0.05)，均有明顯相關(guān)性(P<0.05)，這與張宏等[15]的研究結(jié)果一致。P21在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)升高的發(fā)生機(jī)制有待進(jìn)一步研究探討。

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Expression and significance of P21 and CDK6 protein in cervical squamous cell carcinoma

LiuJing,JiangYe,MinMin,XuJianqiong,YuanHua,ZengLin,SongDaping△

(DepartmentofPathology,theThirdPeople′sHospitalofMianyangcity,Mianyang,Sichuan621000)

Objective To observe the expression of P21 and CDK6 in cervical squamous cell carcinoma,and to investigate the relationship between their expression and cervical squamous cell carcinoma.Methods The expression of CDK6 and P21 in 100 cases of cervical squamous cell carcinoma,20 cases of cervical CIN lesions and 20 cases of normal cervical tissues were detected by immunohistochemical ABC method,and the relationship between them and tumor differentiation,invasion depth,lymph node metastasis and clinical stage were analyzed.Results The expression rates of P21 and CDK6 in cervical squamous cell carcinoma tissues were significantly higher than those in CIN lesions and normal cervical tissues;The low expression of P21 was associated with the depth of tumor invasion,lymph node metastasis and clinical stage (P<0.05),and was not associated with the degree of tumor differentiation (P>0.05);The high expression of CDK6 was associated with tumor differentiation,invasion depth,lymph node metastasis and clinical stage (P<0.05).Conclusion The abnormal expression of P21 and CDK6 may play an important role in the occurrence and development of cervical squamous cell carcinoma,and the two may have a certain significance in the prognosis of cervical squamous cell carcinoma.

P21 protein;cyclin-dependent kinase 6;uterine cervical neoplasms;neoplasms,squamous cell

劉靜(1980-)，主治醫(yī)師，本科，主要從事腫瘤病理研究。

△通信作者，E-mail:809906@qq.com。

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.23.020

R737.33

A

1671-8348(2017)23-3231-03

2017-03-20

2017-05-11)

論著·臨床研究