冰城壽離體培養(yǎng)與植株再生

胡松梅

摘 要 以冰城壽的花梗為外植體進行離體培養(yǎng)植株再生研究，結(jié)果表明：中段花梗最易形成愈傷組織并分化成苗。初代培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基為MS+1 mg/L6-BA+1 mg/LKT+0.2 mg/LNAA+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂，可誘導少量愈傷，也可直接誘導叢生芽。叢生芽增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+0.5 mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.2 mg/LNAA+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂。叢生芽壯苗的最佳培養(yǎng)基為MS+0.5 mg/LNAA+0.2 mg/L 6-BA+30 g/L 蔗糖+7 g/L瓊脂。

關(guān)鍵詞 冰城壽；花梗培養(yǎng)；植株再生

中圖分類號：Q943.1 文獻標志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2017.18.062

冰城壽是磨面壽的變異品種，為十二卷屬多肉植物變異三杰之一，近年來深受花卉市場的歡迎。冰城壽葉插易返祖，失去應有觀賞價值，且葉插繁殖率低，生長速度慢，不適宜大規(guī)模生產(chǎn)[1-3]。本試驗對其花梗進行離體培養(yǎng)與植株再生研究，旨在探索適于冰城壽組織培養(yǎng)的最佳條件，為其快速繁殖研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

取冰城壽剛開一朵花的花梗為外植體，常規(guī)消毒滅菌后，將花梗切成約2 cm的小段，每段盡量保留兩個花梗芽。將花梗接種至初代培養(yǎng)基中后，45 d時記錄誘導率。將誘導出的芽轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基中進行增殖，45 d后觀察統(tǒng)計叢生芽的增殖及生長狀況。選取高1 cm以上的叢生芽轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中，60d后觀察統(tǒng)計苗的生長狀況。

誘導、增殖和壯苗基本培養(yǎng)基為MS，所有培養(yǎng)基均附加30 g/L蔗糖，7g/L瓊脂，pH 5.8～6.0。誘導每瓶接1 個莖段、增殖和壯苗每瓶接6個，3次重復。培養(yǎng)溫度為23～25 ℃，光照時間為12 h/d，誘導前期暗培養(yǎng)，后期光照強度為2000 Lx[4]。

各階段培養(yǎng)基植物生長調(diào)節(jié)劑的濃度設計如下：（單位為mg/L，以下皆同）

2 結(jié)果與分析

2.1 不同植物生長調(diào)節(jié)劑組合對冰城壽莖段誘導成苗的影響

將花梗分成上、中、下三段，分別接入誘導培養(yǎng)基中。試驗發(fā)現(xiàn)，花梗上端褐化嚴重，易形成愈傷，下端組織老化，誘導率低，居中花梗段既可形成愈傷，也可以直接出苗（見圖1），花梗上的愈傷不轉(zhuǎn)接60 d后可形成叢生芽。不同植物生長調(diào)節(jié)劑組合對冰城壽莖段誘導成苗的影響見表1。

莖段在不同培養(yǎng)基中培養(yǎng)10 d左右，1、2號培養(yǎng)基中的莖段切口處膨大，出現(xiàn)淡黃色愈傷組織，愈傷組織松散，水漬狀，45 d后轉(zhuǎn)接到同種培養(yǎng)基中容易褐化死亡。此種愈傷組織接種于分化培養(yǎng)基中，未能分化成芽。3、4號培養(yǎng)基中莖段先產(chǎn)生少量愈傷組織，愈傷組織鮮綠堅硬，轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基中可分化成芽，如不轉(zhuǎn)接，60 d后也會部分分化成芽。有些莖段直接在花梗芽處形成叢生芽。

2.2 不同植物生長調(diào)節(jié)劑組合對冰城壽叢生芽增殖的影響

4種植物生長調(diào)節(jié)劑組合均能促進冰城壽不定芽的增殖（見圖2）。6-BA濃度越高，增殖速度越快，累積5代以后玻璃化程度增加，苗瘦弱，壯苗時間延長。6-BA濃度低，苗壯實增殖速度慢。一年多的叢生芽增殖試驗表明，前3代的最佳培養(yǎng)基為MS+0.5 mg/L6-BA+0.5 mg/LKT+

0.1 mg/LNAA+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂，以后繼代培養(yǎng)逐步降低細胞分裂素濃度，加入活性炭，減少玻璃化。

2.3 不同植物生長調(diào)節(jié)劑組合對冰城壽叢生芽壯苗的影響

因多數(shù)多肉植物易生根，組培苗生根后要去掉根系再移栽，故只研究培養(yǎng)基對叢生芽壯苗的影響。將1 cm左右小苗轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中，45 d后不同植物生長調(diào)節(jié)劑組合對冰城壽叢生芽的影響見表2。

1、2號培養(yǎng)基植株矮化，根系生長迅速，40 d粗壯膨大似蘿卜狀，培養(yǎng)基消耗速度快，但植株葉片皺褶變異，變短變寬，嚴重影響觀賞價值。2號培養(yǎng)基植株正常，葉片短而寬，葉色鮮綠（見圖3和圖4）。4號培養(yǎng)基植株葉片狹長，葉片數(shù)量少，不符合多肉植物矮壯厚的審美要求。

3 結(jié)果與討論

試驗結(jié)果表明：以冰城壽的花梗為外植體進行離體培養(yǎng)植株再生，中段花梗最易形成愈傷組織并分化成苗。初代培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基為MS+1 mg/L6-BA+1 mg/LKT

+0.2 mg/LNAA+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂，可誘導少量愈傷，也可直接誘導叢生芽。叢生芽增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+0.5 mg/L6-BA+0.5 mg/LKT+0.1 mg/LNAA+

30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂。叢生芽壯苗的最佳培養(yǎng)基為MS+0.5 mg/LNAA+0.2 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂。

6-BA對冰城壽的增殖和愈傷組織的玻璃化有明顯的促進作用。試驗發(fā)現(xiàn)，愈傷組織增殖中玻璃化嚴重，如降低6-BA濃度、適量加入KT，可減少玻璃化，但以花梗誘導和叢生芽增殖共8個培養(yǎng)基配方進行試驗，愈傷組織分化效果不佳，玻璃化嚴重，分化成苗率極低，需進一步研究愈傷組織的最佳分化培養(yǎng)基配方。

NAA對冰城壽的植株矮化和生根效果顯著[5]。試驗發(fā)現(xiàn)，NAA濃度1mg/L以上植株開始矮化，濃度越高，葉片越畸形，根系越粗壯。

參考文獻

[1]張爽，梁本國，萬群.植物組織培養(yǎng)實用技術(shù)[M].武漢：華中科技出版社，2013.

[2]孫濤，金蕊，李德森.康平壽的組織培養(yǎng)與快速繁殖[J].植物生理學通訊，2003，39（3）：232.

[3]左志宇，李建希，安曉云，等.克里克特壽的組織培養(yǎng)與快速繁殖[J].植物生理學通訊，2007，43（2）：311-313.

[4]張昊鵬，宋曉濤，張耀，等.白銀壽的組織培養(yǎng)與快速繁殖[J].植物生理學通訊，2008，44（5）：951-952.

[5]陳紅剛，高素芳，楊韜.玉露的組織培養(yǎng)與快速擴繁[J].北方園藝，2011（12）：101-102.

（責任編輯：趙中正）endprint