溶血標(biāo)本對化學(xué)發(fā)光方法檢測獻(xiàn)血者四項傳染病指標(biāo)的影響

萬小春

【摘要】 目的 探索溶血標(biāo)本對化學(xué)發(fā)光方法檢測獻(xiàn)血者四項傳染病指標(biāo)的影響。方法 無償獻(xiàn)血者乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、丙型肝炎病毒抗體（抗-HCV）、梅毒螺旋體抗體（抗-TP）單項檢測結(jié)果陽性標(biāo)本各30份， 人類免疫缺陷病毒抗體（抗-HIV）檢驗結(jié)果陽性標(biāo)本10份及隨機選取四項傳染病檢測結(jié)果均陰性的標(biāo)本30份。將實驗分為4組， 分為原血清組、輕度、中度和重度溶血組。原血清組標(biāo)本不做任何處理， 人為造成輕、中、重度溶血， 血紅蛋白濃度≤2 g/L為輕度溶血組， 2 g/L<血紅蛋白濃度≤4 g/L為中度溶血組， 血紅蛋白濃度﹥4 g/L為重度溶血組。在全自動免疫分析儀上進(jìn)行了化學(xué)發(fā)光法檢測。結(jié)果 輕度、中度、重度溶血組HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的測定值與原血清組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 溶血標(biāo)本用化學(xué)發(fā)光法檢測HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的結(jié)果沒有明顯影響， 化學(xué)發(fā)光法可用于獻(xiàn)血者傳染病四項篩查。

【關(guān)鍵詞】 溶血標(biāo)本；化學(xué)發(fā)光法； 獻(xiàn)血員；傳染病檢測

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.21.113

依據(jù)《血站技術(shù)操作規(guī)程（2012 版） 》第4章節(jié)“血液檢測”所規(guī)定了的可經(jīng)輸血傳播感染的檢測項目包括HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP， 檢測模式為兩種不同廠家生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫吸附劑測定（ELISA）試劑進(jìn)行初復(fù)檢[1]。2016年， 國家衛(wèi)計委要求獻(xiàn)血者篩查在原來的基礎(chǔ)上對前三項病毒增加一次核酸檢測。ELISA檢測技術(shù)具有成本低、靈敏度和特異性相對較好而作為基本檢測方法。近年來， 化學(xué)發(fā)光法作為一種新的檢測技術(shù)， 以其敏感性高、特異性強、簡便快捷、重復(fù)性好、影響因素少等優(yōu)點而廣泛應(yīng)用于臨床檢測， 而標(biāo)本溶血作為不可避免的現(xiàn)象影響實驗的準(zhǔn)確性， 有學(xué)者認(rèn)為ELISA檢測方法中標(biāo)本溶血可導(dǎo)致假陽性結(jié)果的出現(xiàn)[2， 3]。為研究標(biāo)本溶血對化學(xué)發(fā)光方法檢測獻(xiàn)血者四項傳染病指標(biāo)是否有影響， 設(shè)計本實驗， 報告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 收集本血站2016年5～6月無償獻(xiàn)血者HBsAg、抗-HCV、抗-TP單項檢測結(jié)果陽性標(biāo)本各30份， 抗-HIV檢驗結(jié)果陽性標(biāo)本10份及隨機選取四項傳染病檢測結(jié)果均陰性的標(biāo)本30份， 采用EDTA抗凝管留取5 ml。所有收集的標(biāo)本在離心后， 肉眼觀察血清無溶血、無黃疸、無混濁。

1. 2 儀器與試劑 全自動免疫分析儀（日本 SYSMEX HISCL-5000， 化學(xué)發(fā)光法）， 化學(xué)發(fā)光試劑：HISCL Anti-HBsAg、Anti-HCV、HIVAg+Ab和Anti-TP Assay Kit， 由希森美康醫(yī)用有限公司提供， 生產(chǎn)批號：ZS6108。

1. 3 方法 使用1.5 ml EP管將所有標(biāo)本分裝為4組， 分別標(biāo)為原血清組、輕度、中度、重度溶血組。對照組標(biāo)本不做任何處理， 實驗組標(biāo)本用竹簽攪動人為造成溶血， 離心后測量其上清液中的游離血紅蛋白濃度， 血紅蛋白濃度≤2 g/L為輕度溶血組， 2 g/L<血紅蛋白濃度≤4 g/L為中度溶血組， 血紅蛋白濃度﹥4 g/L為重度溶血組[4]。按照儀器操作說明書進(jìn)行化學(xué)發(fā)光法檢測， 所有標(biāo)本進(jìn)行平行兩次檢測， 取其平均值， HBsAg結(jié)果以 IU/ml表示；抗-HCV、抗-TP、抗-HIV以C.O.I表示。

1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計學(xué)軟件對研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

輕度、中度、重度溶血組HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的測定值與原血清組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

3 討論

輸血安全是全社會廣泛關(guān)注的重要問題之一， 獻(xiàn)血者安全篩查方法的選擇關(guān)乎患者感染經(jīng)輸血傳播疾病的風(fēng)險， 因此， 國家高度重視獻(xiàn)血者經(jīng)血源傳播性疾病的篩查， 明確規(guī)定了其檢測項目及檢測方法， ELISA仍然是此類檢查的主體方法。該方法在臨床應(yīng)用已有幾十年的歷史， 具有成本低廉、穩(wěn)定性較好、操作相對簡單、可實現(xiàn)批量自動化檢測等優(yōu)點， 但文獻(xiàn)資料顯示也有鉤狀效應(yīng)（HOOK效應(yīng)）引起的假陰性、非特異反應(yīng)、檢測時間長、易交叉污染引起的假陽性和靈敏度較低、檢測窗口期時間較長、容易導(dǎo)致假陰性等問題[5]。尤其是溶血標(biāo)本對ELISA技術(shù)有明顯的影響， 主要原因是因其游離血紅蛋白（Hb）具有過氧化物酶活性， 與辣根過氧化物酶作用相似， 可以催化底物顯色導(dǎo)致假陽性結(jié)果[6， 7]。

化學(xué)發(fā)光法引入于20世紀(jì)90年代， 是將化學(xué)發(fā)光或生物發(fā)光體系與免疫反應(yīng)相結(jié)合， 用于檢測微量抗原或抗體的一種新型標(biāo)記免疫測定技術(shù)。其檢測原理與放射免疫（RIA） 和酶免疫（EIA） 相似， 不同之處是借助發(fā)光底物自身的發(fā)光強度直接進(jìn)行測定[8]， 測得的光量子數(shù)和待測樣本中的抗原/抗體濃度成正比， 可用于定性和定量/半定量測定， 其檢測原理上與ELISA不同， 不受游離Hb中類過氧化物酶活性的影響， 不產(chǎn)生顏色反應(yīng)而干擾檢測結(jié)果。與ELISA 相比， 化學(xué)發(fā)光技術(shù)是異相免疫分析， 抗原抗體能夠高效結(jié)合；靈敏度可達(dá)10～22 mol/L；線性范圍寬， 其發(fā)光強度在4～6個量級之間， 與測定物質(zhì)濃度間呈線性關(guān)系；分析方法簡便快速， 絕大多數(shù)分析測定均為僅需加入一種試劑（或復(fù)合試劑）的一步模式， 操作全自動化；結(jié)果穩(wěn)定、誤差小， 不需要任何光源照射， 免除了各種可能因素（光源穩(wěn)定性、光散射、光波選擇器等）給分析帶來的影響， 使分析結(jié)果靈敏、穩(wěn)定、可靠；檢測時間短、速度快、可隨時檢測， 特別適應(yīng)于急診快速檢驗， 因而有取代ELISA檢測的趨勢。endprint

本次實驗研究中， 通過分析溶血標(biāo)本對化學(xué)發(fā)光法檢測獻(xiàn)血者傳染病四項指標(biāo)的實驗結(jié)果顯示， 輕度、中度、重度溶血組HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的測定值與原血清組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。表明溶血標(biāo)本對化學(xué)發(fā)光法檢測上述四種傳染病檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性并不受影響， 與本方法檢測在理論上保持了一致性， 這在白潔等[8]所報道的相關(guān)文章中得到證實， 溶血標(biāo)本中游離Hb的存在對此類檢測沒有干擾。但從具體每項檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)， 隨著溶血程度的增加， 檢測值呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢， Mann-Whitney U檢驗中Z值為負(fù)值， 其差異成一定程度上的負(fù)相關(guān)， 具體原因不明， 有待進(jìn)一步研究。

本實驗和文獻(xiàn)檢索結(jié)果顯示， 化學(xué)發(fā)光法對獻(xiàn)血者傳染病四項檢測更具有優(yōu)勢， 是否可以建議采用化學(xué)發(fā)光法取代ELISA檢測， 或一次ELISA加一次化學(xué)發(fā)光法檢測取代現(xiàn)有的兩種ELISA試劑進(jìn)行初復(fù)檢， 供同道們參考。

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[收稿日期：2017-03-17]endprint