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    全自動(dòng)毛細(xì)管電泳技術(shù)在河源地區(qū)新生兒地中海貧血篩查的應(yīng)用及價(jià)值

    2017-09-07 23:49:23王葭
    中國實(shí)用醫(yī)藥 2017年19期
    關(guān)鍵詞:毛細(xì)管電泳全自動(dòng)

    王葭

    【摘要】 目的 研究全自動(dòng)毛細(xì)管電泳技術(shù)用于河源地區(qū)新生兒地中海貧血篩查中的價(jià)值。方法 17454例河源地區(qū)新生兒為研究對(duì)象, 對(duì)全部新生兒使用Sebia全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行濾紙干血斑標(biāo)本的血紅蛋白(Hb)電泳, 對(duì)于檢測(cè)顯示為陽性的標(biāo)本召回繼續(xù)進(jìn)行常見的α、β地中海貧血基因的檢測(cè)分析。結(jié)果 17454例新生兒中檢測(cè)出2712例血紅蛋白陽性, 陽性率為15.54%;其中1879例(10.77%)α型地中海貧血, 750例(4.30%)β型地中海貧血, 異常血紅蛋白83例(0.48%);本院召回221例α地中海貧血樣本和80例β地中海貧血樣本進(jìn)行基因分析, 其中α地中海貧血的診斷符合率為90.05%, β地中海貧血診斷符合率為83.75%。結(jié)論 全自動(dòng)毛細(xì)管電泳篩查在新生兒地中海貧血的篩查中具有較高的價(jià)值, 診斷符合率高, 有助于臨床醫(yī)師早期發(fā)現(xiàn)地中海貧血, 并通過基因分析分型, 早期干預(yù)治療, 確保新生兒的健康成長發(fā)育。

    【關(guān)鍵詞】 毛細(xì)管電泳;地中海貧血篩查;新生兒;診斷符合率;基因分析

    DOI:10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.19.035

    地中海貧血是非常罕見的貧血性疾病, 是因珠蛋白基因不同而出現(xiàn)的多類型疾病, 癥狀較為輕微的患者基本不會(huì)受到影響, 但是嚴(yán)重的則會(huì)危及生命安全[1]。根據(jù)珠蛋白基因不同, 可以將地中海貧血分成四種類型, 也即:α、β、γ、δ型地中海貧血, 其中α、β型地中海貧血較為常見[2, 3]。在發(fā)病區(qū)域上, 我國南方地區(qū)的新生兒地中海貧血發(fā)病率較高, 其會(huì)嚴(yán)重影響到患兒的正常生活?,F(xiàn)就河源地區(qū)的17454例新生兒為例, 抽取足跟血采用全自動(dòng)毛細(xì)管電泳技術(shù)進(jìn)行地中海貧血的篩查, 現(xiàn)報(bào)告如下。

    1 資料與方法

    1. 1 一般資料 選取河源地區(qū)(五縣一區(qū))在2016年1~6月出生的新生兒17454例為本次研究的對(duì)象, 新生兒出生3 d時(shí)抽取足跟血, 然后將血樣滴在血濾紙片上, 在自然晾干后送檢。記錄所有新生兒的檢驗(yàn)結(jié)果, 將其中陽性者召回進(jìn)行地中海貧血基因的檢測(cè)。

    1. 2 方法

    1. 2. 1 儀器和試劑 選擇法國Sebia公司的Capillarys2全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀以及血紅蛋白電泳試劑盒?;蚍治錾喜捎肈NA提取儀、PCR擴(kuò)增儀、分子雜交儀、電泳儀以及地中海貧血基因診斷試劑盒, 由深圳亞能生物技術(shù)有限公司提供基因診斷試劑盒。

    1. 2. 2 檢測(cè)方法 首先對(duì)所有血樣進(jìn)行血紅蛋白電泳, 方法為:在濾紙干血斑上打1個(gè)4.84 mm2的血斑片, 然后置入到50 ml蒸餾水測(cè)試杯中進(jìn)行溶解處理, 保濕過夜后于第2天將測(cè)試杯放置到電泳儀中進(jìn)行檢測(cè)。將血紅蛋白電泳為陽性的血樣召回進(jìn)行基因分析, 確定地中海貧血的類型。

    1. 2. 3 血紅蛋白電泳陽性的判斷標(biāo)準(zhǔn) α地中海貧血篩查陽性判斷標(biāo)準(zhǔn):HBbarts>0.2%即為α地中海貧血篩查陽性。β地中海貧血篩查陽性判斷標(biāo)準(zhǔn):按綜合分析法, 根據(jù)血紅蛋白組分HbA2含量、HbA含量及HbA2/HbA 比值篩查β地中海貧血陽性。見表1。

    2 結(jié)果

    17454例新生兒足跟血采用全自動(dòng)毛細(xì)管電泳技術(shù)篩查出2712例(15.54%)血紅蛋白陽性樣本, 其中α型地中海貧血1879例, 陽性率為10.77%(1879/17454);β型地中海貧血750例, 陽性率為4.30%(750/17454), 異常血紅蛋白83例為0.48%(83/17454)。

    血樣召回遵循就近原則, 其中本院召回221例α地中海貧血血樣進(jìn)行基因分析, 確診199例為α型地中海貧血, 診斷符合率為90.05%(199/221), 其中共有196例靜止型或輕型, 血紅蛋白H病3例。對(duì)β地中海貧血血樣召回80例在本院接受基因分析, 確診67例為β型地中海貧血, 診斷符合率為83.75%(67/80)。

    3 討論

    地中海貧血是指由珠蛋白生成障礙引起的遺傳性溶血疾病, 其是目前在全球分布最為廣泛且發(fā)病人數(shù)最多的一種單基因性疾病, 目前全球的地中海貧血基因攜帶者約為2億人, 且尚無治愈方法。由于地中海貧血具有非常大的異質(zhì)性, 部分病情輕微的無臨床癥狀, 且不會(huì)對(duì)日常生活造成明顯的影響, 而病情嚴(yán)重的患者會(huì)存在嚴(yán)重的貧血癥狀, 生活受到嚴(yán)重影響, 甚至死亡。尤其是β型地中海貧血, 多數(shù)在出生或是出生后很長時(shí)間都不會(huì)有典型臨床癥狀, 若沒有癥狀, 且父母均未做相關(guān)檢查以及產(chǎn)前的診斷, 那么在出生后難以進(jìn)行早期的地中海貧血診斷, 一般是在感染、炎癥時(shí)誘發(fā)貧血, 進(jìn)而被發(fā)現(xiàn)[4]。隨著圍生期保健技術(shù)的快速發(fā)展, 在婚孕前、產(chǎn)前的地中海貧血篩查已普遍開展起來, 中重型地中海貧血新生兒的出生率有所降低, 但是依然有不少地中海貧血攜帶患兒出生, 尤其是南方地區(qū), 地中海貧血發(fā)病率極高, 也有部分地區(qū)已開始開展新生兒的地中海貧血篩查, 通過血常規(guī)、血紅蛋白電泳等方法進(jìn)行初篩, 然后采用基因檢測(cè)的方法對(duì)地中海貧血進(jìn)行基因分型[5]。在采血進(jìn)行檢測(cè)上, 由于新生兒的股靜脈、頸靜脈采血難度較大, 且新生兒較為痛苦, 因而臨床上一般采取足跟血。

    正常新生兒的HbF占70%左右, HbA占30%左右, HbA2<1%;而地中海貧血新生兒的Hb組分和含量與正常新生兒不同, 通過檢驗(yàn)技術(shù)將多種血紅蛋白成分、含量區(qū)分開, 從而判斷是否為地中海貧血[6]。干血斑標(biāo)本目前已在多項(xiàng)新生兒疾病篩查中得到應(yīng)用, 標(biāo)本易于運(yùn)輸, 尤其適用于新生兒疾病的初步篩查中[7]。正常胎兒一般在3個(gè)月的時(shí)候開始合成HbA, 在6個(gè)月的時(shí)候已增加到5%~10%, 在分娩時(shí)則可達(dá)35%~40%, 而β地中海貧血新生兒在母體發(fā)育中因β珠蛋白合成存在障礙, 從而導(dǎo)致HbA含量較低, 遠(yuǎn)低于正常水平, 而且含量越低表明β地中海貧血越嚴(yán)重。所以在β地中海貧血的篩查中可以采用HbA含量高低來進(jìn)行初步的篩查。在α地中海貧血的篩查中, 一般采用血常規(guī)、紅細(xì)胞脆性法進(jìn)行篩查, 但是對(duì)于其中的靜止型和標(biāo)準(zhǔn)型這兩種沒有明顯血常規(guī)變化和臨床癥狀的攜帶者, 在篩查中漏診率極高, 因此并不能將血常規(guī)、紅細(xì)胞脆性法單獨(dú)用于臨床篩查中。endprint

    近些年來, 不少學(xué)者提出可將全自動(dòng)毛細(xì)管血紅蛋白電泳分析技術(shù)應(yīng)用到新生兒地中海貧血的篩查中, 該技術(shù)是利用新生兒濾紙干血斑中的微量血紅蛋白在高壓電作用下, 在25 μm直徑的毛細(xì)管中進(jìn)行血紅蛋白組分的分離, 其對(duì)血紅蛋白組分的檢測(cè)具有非常高的靈敏度和穩(wěn)定性, 可以準(zhǔn)確測(cè)定出各種血紅蛋白組分的含量, 是目前進(jìn)行新生兒地中海貧血篩查最為簡(jiǎn)便、有效的方法[8]。本研究對(duì)河源地區(qū)的17454例新生兒進(jìn)行地中海貧血的篩查, 采用的是法國Sebia Capillarys2全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行檢測(cè), 該電泳儀使用的是未處理的石英毛細(xì)管電泳柱, 其能在十幾分鐘內(nèi)進(jìn)行血紅蛋白的常規(guī)分析, 而且無需對(duì)樣本進(jìn)行處理就能得到與瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)相似的結(jié)果。曾有學(xué)者對(duì)這兩種電泳技術(shù)進(jìn)行對(duì)比, 發(fā)現(xiàn)在新生兒地中海貧血篩查中, 兩種方法都具有較高的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度, 在α、β地中海貧血陽性的檢測(cè)中, 兩種檢測(cè)方法的靈敏度相似, 而在HbCS和HbH上, 毛細(xì)管電泳檢測(cè)的靈敏度更高[9]。毛細(xì)管電泳技術(shù)可以直接顯示出HbH、HbCS、HbE的異常區(qū)帶, 不會(huì)與HbA、HbA2出現(xiàn)重疊現(xiàn)象, 故而準(zhǔn)確結(jié)果非常高;而且對(duì)于血紅蛋白各個(gè)組分的分辨率非常高, 能準(zhǔn)確檢測(cè)出組分的含量, 測(cè)出準(zhǔn)確的百分比, 定量準(zhǔn)確[10, 11]。而且在應(yīng)用電泳儀檢測(cè)過程中, 有相關(guān)配套的質(zhì)控品進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控, 這樣能更好的保證結(jié)果準(zhǔn)確性。本研究結(jié)果顯示:17454例新生兒出現(xiàn)血紅蛋白異常的幾率為15.54%, 其中10.77%為α地中海貧血, 4.30%為β地中海貧血, 0.48%為異常血紅蛋。本院召回的221例α地中海貧血樣本和80例β地中海貧血樣本經(jīng)過檢測(cè)發(fā)現(xiàn), 對(duì)于α地中海貧血的診斷符合率為90.05%, β地中海貧血診斷符合率為83.75%, 診斷符合率高。結(jié)果指出河源地區(qū)的新生兒地中海貧血發(fā)生率較高, 加強(qiáng)對(duì)新生兒的地中海貧血篩查具有重要意義。

    綜上所述, 全自動(dòng)毛細(xì)管電泳技術(shù)在河源地區(qū)新生兒地中海貧血的篩查中應(yīng)用具有重大價(jià)值, 診斷符合率高, 且操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短、成本低, 可以作為新生兒地中海貧血篩查的重要手段。

    參考文獻(xiàn)

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    [9] 阮麗明, 周艷潔, 朱茂靈, 等.全自動(dòng)毛細(xì)管電泳系統(tǒng)在地中海貧血篩查中的臨床應(yīng)用.廣西醫(yī)學(xué), 2012, 34(2):178-180.

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    [11] 李東明, 何升, 周暉登, 等.α-地中海貧血表型兒童基因診斷分析.中國婦幼保健, 2015, 30(4):575-577.

    [收稿日期:2017-03-13]endprint

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