綠玉菊組織培養(yǎng)快繁技術(shù)研究

趙明君

摘要 以綠玉菊的葉片和帶腋芽莖段為試材，以MS為基本培養(yǎng)基，研究不同激素配比培養(yǎng)基對組織快繁的影響以及外植體最適消毒組合。結(jié)果表明，葉片的最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 3.0 mg/L，出愈率達(dá)80%；帶腋芽莖段的最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L，誘導(dǎo)率高達(dá)92%；最適生根培養(yǎng)基為MS+NAA 0.05 mg/L，生根效果最佳、根系粗壯、次級根多；外植體消毒宜采用酒精和升汞（20 s+7 min）的搭配，污染率可以控制在15%。

關(guān)鍵詞 綠玉菊；葉片；帶腋芽莖段；離體培養(yǎng)；快繁技術(shù)

中圖分類號 S682.36 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）14-0141-01

Abstract To study the effects of different hormone ratios media on the rapid propagation of tissue and the optimal disinfection combination of explants with leaves and stem segments with axillary bud of Senecio macroglossus and MS as the basic medium.The results showed that the optimum medium was MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 3.0 mg/L，and the callus rate was 80%.The optimum medium for induction of axillary buds was MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L，the induction rate was up to 92%.The optimum rooting medium was MS+NAA 0.05 mg/L，the root was thick and more secondary root.The combination of alcohol and mercury（20 s+7 min）was the best suited for disinfecting explants，which could control pollution rate to 15%.

Key words Senecio macroglossus；blade；stems segment with axillary bud；in vitro；rapid propagation

綠玉菊（Senecio macroglossus）為菊科千里光屬多年生肉質(zhì)植物，原產(chǎn)于非洲南部，耐干旱和半陰，是現(xiàn)在常見的室內(nèi)觀葉植物，市場需求量大，但關(guān)于其研究較少，擴(kuò)繁技術(shù)還停留在扦插階段，嚴(yán)重影響了優(yōu)良植物多元化利用[1-2]。此次進(jìn)行綠玉菊的快繁試驗初探，以期篩選出最適培養(yǎng)基配方，為最終建立綠玉菊繁體系奠定基礎(chǔ)[3-4]。

1 材料與方法

1.1 材料及藥劑

選取綠玉菊的葉片、帶腋芽莖段作為本次試驗研究材料。供試藥劑為75%酒精、0.1%升汞、MS培養(yǎng)基、瓊脂、1 mg/mL NAA、1 mg/mL 6-BA。

1.2 培養(yǎng)基配方

試驗以MS為基本培養(yǎng)基，根據(jù)試驗用途不同添加不同激素配比的培養(yǎng)基，對外植體進(jìn)行腋芽的誘導(dǎo)與增殖。

1.2.1 啟動誘導(dǎo)配方。①MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L；②MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 2.0 mg/L；③MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 3.0 mg/L；④MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 1.0 mg/L；⑤MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 2.0 mg/L；⑥MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 3.0 mg/L；⑦M(jìn)S+NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L；⑧MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 2.0 mg/L；⑨MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 3.0 mg/L；⑩MS+NAA 0.0 mg/L+6-BA 0.0 mg/L（對照）。

1.2.2 外植體芽誘導(dǎo)增殖配方。A1：MS+NAA 0.05 mg/L+6-BA 1.0 mg/L；A2：MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L；A3：MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L；A4：MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 3.0 mg/L；A5：MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 3.0 mg/L。

1.2.3 生根誘導(dǎo)配方。Ⅰ：MS+NAA 0.01 mg/L；Ⅱ：MS+NAA 0.05 mg/L；Ⅲ：MS+NAA 0.25 mg/L。

每個處理30瓶，每瓶接種2個外植體，3次重復(fù)；培養(yǎng)室溫度在25～28 ℃之間；光照度2 000 lx，光照時間12 h/d；pH值為5.6～5.8。3～7 d觀察1次，培養(yǎng)30 d后，統(tǒng)計結(jié)果。

1.3 試驗方法

1.3.1 外植體消毒。將綠玉菊帶腋芽莖段的枝條和葉片先用洗衣粉浸泡1～2 min并不斷用軟毛刷刷洗，刷洗時水流量不宜過大，之后用自來水沖洗1～2 h，放入75%酒精中浸泡，枝條浸泡15～30 s，葉片浸泡10～20 s，取出后用無菌水沖洗5～6次，再放入0.1%升汞中，枝條浸泡8～10 min，葉片浸泡3～7 min并不斷攪拌，消毒完成后用無菌水沖洗4～6次，最后在無菌操作臺上將枝條切成約1 cm的帶腋芽莖段，葉片沿葉脈橫向切成小塊，用濾紙吸干表面水分待接種[5-6]。endprint

1.3.2 不定芽的誘導(dǎo)及增殖。將已滅菌的綠玉菊葉片切成1～2 cm小塊接種于①～⑩號培養(yǎng)基上，培養(yǎng)約20 d，在葉片切口處逐漸形成愈傷組織，此后愈傷組織不斷膨大[7-8]。10 d后觀察并記錄培養(yǎng)基中愈傷組織的脫分化及出芽情況。

1.3.3 腋芽的誘導(dǎo)及增殖。將當(dāng)年生的莖段滅菌后切成小段，每段帶有1個腋芽，在無菌臺上接種到①～⑩號培養(yǎng)基進(jìn)行芽誘導(dǎo)試驗。4～10 d后，在葉腋部位長出腋芽，并在莖段的基部長出愈傷組織。當(dāng)腋芽長到約2 cm時將其切下轉(zhuǎn)接到A1～A5培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)。20 d后觀察并記錄各瓶培養(yǎng)基中芽的增殖情況。

1.3.4 生根培養(yǎng)。小芽經(jīng)過多次轉(zhuǎn)接，培養(yǎng)后選取高挑、健壯的苗將其轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)[9]。15 d后觀察并記錄各瓶生根情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 升汞與酒精消毒外植株效果

所用升汞濃度為0.1%，酒精濃度為75%，比較單獨用酒精消毒和與升汞組合的消毒效果。

由表1可知，在單獨使用酒精作外植體消毒試劑時，帶腋芽莖段以20 s消毒時間效果最佳，污染率可控制在8.3%；而葉片滅菌時間在15 s和20 s時的消毒效果差異不大，污染率達(dá)到25.0%。當(dāng)消毒時間在5 s時，消毒效果最差，帶腋芽莖段污染率達(dá)到40.0%，葉片污染率達(dá)到58.3%。由表2可知，以酒精消毒20 s與不同消毒時間的升汞組合進(jìn)行滅菌，發(fā)現(xiàn)帶腋芽莖段在20 s+7 min的消毒組合中效果最佳，污染率可控制在15.0%；而葉片在20 s+5 min的消毒組合中效果最佳，污染率可控制在13.3%。綜上所述，使用酒精與升汞組合比單獨使用酒精的消毒效果好。

2.2 不同激素濃度配比誘導(dǎo)愈傷效果

初代培養(yǎng)采用10種不同濃度的培養(yǎng)基，編號為①～⑩，每個濃度培養(yǎng)基接種數(shù)量30瓶，15 d后，觀察不同啟動培養(yǎng)基對腋芽、愈傷組織的誘導(dǎo)情況。統(tǒng)計結(jié)果表明，帶腋芽莖段的誘導(dǎo)要比葉片容易，效果也好，但不同激素濃度配比會產(chǎn)生不同誘導(dǎo)效果。具體來說，葉片在①～⑩號培養(yǎng)基中均可以產(chǎn)生愈傷組織，尤其以MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 3.0 mg/L誘導(dǎo)效果最佳，可以產(chǎn)生大量愈傷組織，愈傷率達(dá)到80%，且愈傷組織質(zhì)地緊密；帶腋芽莖段在①～⑩培養(yǎng)基中均可產(chǎn)生愈傷和芽，以MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L誘導(dǎo)效果最佳，誘導(dǎo)率達(dá)到92%左右。與此同時，還可看出，當(dāng)6-BA濃度相同時，隨著NAA濃度不斷增加，帶腋芽莖段的誘導(dǎo)情況及生長狀況也隨之下降，以NAA為0.1 mg/L時帶腋芽莖段誘導(dǎo)效果最佳，誘導(dǎo)率可達(dá)92%左右。

由表3可以看出，莖段在誘導(dǎo)芽的增殖試驗中效果成正相關(guān)，在6-BA+NAA的不同激素濃度配比中，以A1即MS+NAA 0.05 mg/L+6-BA 1.0 mg/L培養(yǎng)基的誘導(dǎo)效果最好，腋芽平均增殖4.5個，主要是因為6-BA/NAA的比值較高，而其他培養(yǎng)基6-BA/NAA的比值較低。試驗也做過6-BA/NAA比值更高的濃度配比組合，但誘導(dǎo)效果不理想，叢芽長勢較差，且個別畸形苗出現(xiàn)。因此，菊腋芽增殖狀況不僅與6-BA/NAA各自的激素濃度配比有關(guān)，而且與它們的比值有很大的相關(guān)性。

2.3 各激素濃度配比對根誘導(dǎo)的影響

生根培養(yǎng)采用3種不同濃度的培養(yǎng)基，編號為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。培養(yǎng)15 d后，觀察并統(tǒng)計結(jié)果，在對根的誘導(dǎo)試驗中發(fā)現(xiàn)，生根以Ⅱ號即MS+NAA 0.05 mg/L效果最好，且根的誘導(dǎo)率很高，可達(dá)87%，且生根時間早于Ⅰ號和Ⅲ號，Ⅰ號和Ⅱ號在10 d左右生根，其他較遲，平均生根5～6條，根系粗壯。次級根多，平均根長2 cm；Ⅰ號生根3～4條，細(xì)長，次級根較Ⅲ號好，平均根長1.8 cm；Ⅲ號根系最粗，但是生長緩慢，平均根長1.9 cm。

3 結(jié)論與討論

綠玉菊外植體的消毒宜采用酒精和升汞的搭配，最佳消毒時間為20 s+7 min，污染率為15.0%。莖段的誘導(dǎo)出芽率要易于葉片，葉片的最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 3.0 mg/L，出愈率達(dá)80%；帶腋芽莖段的最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L，誘導(dǎo)率高達(dá)92%。Ⅱ號生根培養(yǎng)基生根效果最佳，根系粗壯，次級根多。

4 參考文獻(xiàn)

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