不同殺菌劑對(duì)降香黃檀和油茶炭疽病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

章穎　陳曉萌　祝一鳴

摘要 采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了7種不同殺菌劑對(duì)降香黃檀和油茶炭疽病菌的室內(nèi)毒力效果。結(jié)果表明，98%溴菌腈對(duì)降香黃檀和油茶炭疽病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用最強(qiáng)，EC50值分別為0.019 5 mg/mL和0.001 1 mg/mL；其次是97%吡唑醚菌酯和96.8%苯醚甲環(huán)唑；81%氨基寡糖素在供試濃度下幾乎無(wú)任何抑制活性。

關(guān)鍵詞 降香黃檀；油茶；炭疽病菌；殺菌劑；毒力測(cè)定

中圖分類號(hào) S481+.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2017）14-0099-02

Abstract The mycelium growth rate method was used to determine inhibitory effect of the seven different fungicides against Colletotrichun gloeosporioides from Dalbergia odorifera and Camellia oleifera.The results showed that bromoxynil（98%，w） had the strongest inhibitory activity on Colletotrichun gloeosporioides，and the EC50 values were 0.019 5 mg/mL and 0.001 1 mg/mL，respectively.Pyraclostrobine（97%，w） and difenoconazole（96.8%，w） also showed good antifungal activities on the Colletotrichun gloeosporioides.While the amino-oligosaccharin（81%，w） didn′t show any inhibitory activities under the test concentration.

Key words Dalbergia odorifera；Camellia oleifera；Colletotrichun gloeosporioides；fungicide；toxicity measurement

降香黃檀（Dalbergia odorifera L.），俗稱黃花梨，為豆科蝶形花亞科黃檀屬植物，海南特產(chǎn)，瀕危樹種，所產(chǎn)木材為上等家具良材，其芯材可生產(chǎn)著名中藥材降香，是我國(guó)華南地區(qū)的珍貴樹種，具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值[1-5]。油茶（Camellia oleifera Abel.）又名茶子樹、茶油樹，是我國(guó)南方重要的經(jīng)濟(jì)林樹種，與油棕、油橄欖和椰子并稱“世界四大木本食用油料樹種”[6-7]，其種子所制茶油中不飽和脂肪酸含量高，對(duì)預(yù)防冠心病和動(dòng)脈粥樣硬化均有良好的作用[8-9]。

炭疽病是廣泛分布在熱帶、亞熱帶甚至溫帶等地區(qū)的一類病害，由炭疽菌屬（Colletotrichum）的多種真菌誘發(fā)，已確認(rèn)包括糧食、蔬菜、果樹、花卉等在內(nèi)600多種植物遭受其危害[10]。炭疽病是降香黃檀和油茶最主要的病害，其病原均為膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）[11-13]。降香黃檀感病后可導(dǎo)致葉片逐漸干枯或穿孔，直至脫落，嚴(yán)重影響植株光合作用以及芯材的形成，且常大面積暴發(fā)，對(duì)于降香黃檀行業(yè)的可持續(xù)發(fā)展十分不利[5]。而炭疽病危害油茶后可引起嚴(yán)重落果、落蕾、枝梢枯死，甚至整株衰亡，在油茶栽培區(qū)大面積發(fā)生，造成重大經(jīng)濟(jì)損失[12，14]。本研究采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了不同殺菌劑對(duì)降香黃檀和油茶炭疽病菌的室內(nèi)毒力效果，以期篩選出有效的殺菌劑，為降香黃檀和油茶炭疽病防治提供重要的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試菌種。油茶炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporio-ides Penz.）和降香黃檀炭疽病菌[Colletotrichum gloeospori-oides（Penz.） Sacc]均由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)森林保護(hù)教研室提供。上述植物病原真菌菌株長(zhǎng)期保存在 4 ℃條件，在活性測(cè)定前，需要在PDA平板上對(duì)供試真菌進(jìn)行活化培養(yǎng)（25 ℃，暗培養(yǎng)）5～10 d，然后繼代培養(yǎng)1～2次，即可用于活性測(cè)定。

1.1.2 供試藥劑。98%嘧菌酯、95%啶酰菌胺、98%溴菌腈、96.8%苯醚甲環(huán)唑、97%吡唑醚菌酯、81%氨基寡糖素、98%福美雙和80%多菌靈，以上藥劑均購(gòu)自中國(guó)農(nóng)科院植保所廊坊農(nóng)藥中試廠，4 ℃避光保存，備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 含殺菌劑PDA培養(yǎng)基的制備。用30% DMSO配制7種殺菌劑，制成24.000、12.000、6.000、3.000、1.500、0.750、0.375 mg/mL 7個(gè)濃度梯度的母液。用移液槍取1 mL母液注入滅菌后冷卻至約60 ℃的29 mL PDA 培養(yǎng)基中，輕輕搖勻，均勻倒入3個(gè)培養(yǎng)皿中，制成含毒平板。其終濃度依次為0.800 0、0.400 0、0.200 0、0.100 0、0.050 0、0.025 0、0.012 5 mg/mL。

1.2.2 供試化學(xué)藥劑對(duì)炭疽菌菌絲室內(nèi)毒力的測(cè)定。采用菌絲生長(zhǎng)速率法中的含毒介質(zhì)培養(yǎng)法[15]，用直徑7 mm的打孔器移取在25 ℃光照培養(yǎng)箱中生長(zhǎng)6 d的較為一致的菌落邊緣，使菌絲面朝下接種于經(jīng)不同藥劑處理的含毒培養(yǎng)平板中，每個(gè)處理3次重復(fù)，倒置于25 ℃光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。以加入無(wú)菌水的培養(yǎng)基為空白對(duì)照，以加入30% DMSO為陰性對(duì)照，以市場(chǎng)常見(jiàn)商品80%多菌靈為陽(yáng)性對(duì)照，每組對(duì)照3次重復(fù)。待生長(zhǎng)7 d后，即空白對(duì)照菌落生長(zhǎng)至培養(yǎng)皿面積2/3時(shí)，采用十字交叉法測(cè)量不同處理菌落生長(zhǎng)直徑，并求出各種化學(xué)藥劑的抑菌率。endprint

計(jì)算公式如下：

抑菌率（%）=（陰性對(duì)照純生長(zhǎng)量-處理純生長(zhǎng)量）/陰性對(duì)照純生長(zhǎng)量×100；

純生長(zhǎng)量=菌落平均直徑-菌餅直徑。

1.2.3 毒力分析，建立毒力回歸方程。計(jì)算出不同濃度下殺菌劑的抑菌率，并將抑菌率根據(jù)生物統(tǒng)計(jì)幾率值換算表?yè)Q算為幾率值，以殺菌劑濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，以抑菌率幾率值為縱坐標(biāo)在Excel中做XY散點(diǎn)圖，并添加趨勢(shì)圖，得出毒力回歸方程以及r，并計(jì)算出抑菌中濃度EC50（mg/mL），以此表示殺菌劑對(duì)降香黃檀和油茶炭疽病菌抑制作用的強(qiáng)弱[16]。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)降香黃檀炭疽菌菌絲的室內(nèi)毒力測(cè)定

不同供試藥劑對(duì)降香黃檀炭疽病菌的抑制效果見(jiàn)圖1、表1?？梢钥闯?，98%溴菌腈對(duì)降香黃檀炭疽病菌的抑制作用最強(qiáng)，其EC50值為0.019 5 mg/mL；97%吡唑醚菌酯次之，EC50值為0.025 6 mg/mL；81%氨基寡糖素對(duì)降香黃檀炭疽病菌抑制作用最差，EC50值>5 mg/mL。

2.2 對(duì)油茶炭疽菌菌絲的室內(nèi)毒力測(cè)定

不同供試藥劑對(duì)降香黃檀炭疽病菌的抑制效果見(jiàn)圖2、表2?？梢钥闯?，98%溴菌腈對(duì)油茶炭疽病菌的抑制作用最強(qiáng)，其EC50值為0.001 1 mg/mL；96.8%苯醚甲環(huán)唑和97%吡唑醚菌酯次之，EC50值分別為0.004 2 mg/mL和0.004 3 mg/mL；81%氨基寡糖素對(duì)降香黃檀炭疽病菌抑制作用最差，EC50值>5 mg/mL。

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，7種供試殺菌劑中，除81%氨基寡糖素外，其他6種供試殺菌劑對(duì)降香黃檀和油茶炭疽病菌的生長(zhǎng)均有抑制作用，但抑菌效果均不如陽(yáng)性對(duì)照80%多菌靈。7種供試殺菌劑對(duì)降香黃檀和油茶炭疽病菌的抑制作用具有相似性，其中抑制作用最強(qiáng)的均是98%溴菌腈，EC50值分別為0.019 5 mg/mL和0.001 1 mg/mL；其次是97%吡唑醚菌酯和96.8%苯醚甲環(huán)唑，而81%氨基寡糖素對(duì)2種炭疽病菌幾乎無(wú)抑制作用。

目前，對(duì)于炭疽菌屬真菌的研究報(bào)道較多[17]，但是不同殺菌劑對(duì)降香黃檀和油茶炭疽病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定研究還較少。本研究結(jié)果表明，溴菌腈、苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯等供試藥劑具有極強(qiáng)的抑菌效果，這與楊成德等[18]、韋文添[19]對(duì)其他種炭疽菌的研究結(jié)果類似。溴菌腈又名炭特靈，能抑制和鏟除細(xì)菌、真菌及藻類的生長(zhǎng)，在國(guó)內(nèi)主要應(yīng)用于農(nóng)作物病害的防治和魚塘滅藻及工業(yè)廢水處理，是目前國(guó)內(nèi)殺菌劑中防治各類作物炭疽病的特效藥劑[20]。而苯醚甲環(huán)唑又稱噁醚唑，為三唑類殺菌劑，通過(guò)抑制真菌和細(xì)菌的細(xì)胞麥角甾醇（是構(gòu)成細(xì)胞膜的重要成分，對(duì)細(xì)胞膜的理化性質(zhì)滲透性起重要作用）的生物合成，破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)與功能，從而達(dá)到殺菌目的[21]。炭疽病的防治是一項(xiàng)系統(tǒng)工程，應(yīng)貫徹“防重于治”的方針，以營(yíng)林措施為基礎(chǔ)，輔之以化學(xué)防治，采用綜合治理的方針。合理使用殺菌劑只是其中的一種手段，本文的研究結(jié)果為以后降香黃檀和油茶炭疽病的防治提供了重要的理論依據(jù)。

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