溫度變化對(duì)七帶石斑魚早期發(fā)育及開口攝食的影響

劉 莉，陳 超，孔祥迪，2，李炎璐，于歡歡，2，翟介明，龐尊方

溫度變化對(duì)七帶石斑魚早期發(fā)育及開口攝食的影響

劉 莉1，陳 超1，孔祥迪1，2，李炎璐1，于歡歡1，2，翟介明3，龐尊方3

（1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所，青島市海水魚類育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東青島 266071；2.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海 201306；3.萊州明波水產(chǎn)有限公司，山東煙臺(tái) 261418）

觀察比較了9個(gè)溫度梯度（13、15、17、19、21、23、25、27、29℃）對(duì)七帶石斑魚（Epinephelus septem fasciatus）受精卵孵化時(shí)間、孵化率和畸形率的影響。用在（21±0.5）℃條件下孵出的健康仔魚進(jìn)行耐饑餓和攝食實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)溫度處理設(shè)兩種方式：一、處理溫度始終保持不變；二、將溫度在處理48 h后統(tǒng)一調(diào)節(jié)至21℃。實(shí)驗(yàn)期間，每天統(tǒng)計(jì)仔魚死亡數(shù)，測(cè)定不投餌條件下的存活指數(shù)（SAI），并觀察仔魚投餌后的開口攝食情況及其形態(tài)發(fā)育狀況。結(jié)果表明：1）受精卵孵化的最適溫度范圍為17～23℃，當(dāng)溫度低于13℃或高于27℃時(shí)，受精卵不能孵化。21℃時(shí)，受精卵孵化率最高，為（93.67±1.52）%；而畸形率最低，為（1.06±1.06）%。當(dāng)溫度低于或高于21℃時(shí)其孵化率降低，而畸形率升高；2）在13～28℃范圍內(nèi)，初孵仔魚的SAI值隨著溫度的上升先升高后逐漸降低，21℃時(shí)的SAI值最高，為（20.26±0.44）%。各組溫度保持不變時(shí)，13℃和27℃的SAI值分別為（2.18±0.01）%、（8.47±0.28）%；調(diào)整一致后分別為（6.90± 0.44）%、（13.30±0.31）%。溫度調(diào)節(jié)組與不調(diào)節(jié)組相比，其SAI值明顯提高。溫度調(diào)節(jié)后，每個(gè)梯度組的畸形率也出現(xiàn)了不同程度的降低；3）不同溫度處理的仔魚開口攝食存在差異。21℃時(shí)，仔魚的初始攝食率和飽食率分別可達(dá)80.0%和40.0%。隨著溫度偏離21℃，攝食率和飽食率均逐漸降低。溫度調(diào)節(jié)恢復(fù)組的仔魚攝食情況改善明顯，其中17℃不變和恢復(fù)組對(duì)比變化最為明顯：當(dāng)保持17℃不變時(shí)仔魚的攝食率和飽食率分別為20.0%、13.3%，而處理48 h后恢復(fù)到21℃后，兩者分別提高到66.7%和33.3%，分別提高了2.3和1.5倍。

七帶石斑魚；溫度變化；早期發(fā)育；開口攝食

七帶石斑魚（Epinephelus septemfasciatus）屬于鱸形目（Perciformes），鱸亞目（Pereoidei），鮨科（Serranidae），石斑魚亞科（Epinephelinae），又名：七帶斑、真鮨、子魚、過魚等，主要分布于西北太平洋區(qū)的韓國(guó)、日本、中國(guó)沿岸。在我國(guó)主要分布在黃海與東海，是唯一分布在黃海的石斑魚品種［1］。其生長(zhǎng)快、適應(yīng)能力強(qiáng)，因其能夠在9℃低溫的冷水中生存，又被稱為冷水石斑［2］，是適合在我國(guó)北方沿海及東北亞溫帶海域養(yǎng)殖的名貴魚種，具有較好的市場(chǎng)前景。

上世紀(jì)90年代就有日本和韓國(guó)學(xué)者對(duì)七帶石斑魚的苗種繁育和養(yǎng)殖技術(shù)、卵巢發(fā)育及成熟和神經(jīng)壞死癥致病病毒等方面進(jìn)行了研究。我國(guó)學(xué)者對(duì)七帶石斑魚的研究始于2002年［3］，主要在其胚胎發(fā)育［1，4］、人工繁育和養(yǎng)殖技術(shù)［5］、肌肉營(yíng)養(yǎng)成分［6］、染色體核型［3］、“突眼”病［7］、低溫脅迫［8］和重金屬毒害［9］等方面進(jìn)行了研究。國(guó)內(nèi)外有關(guān)溫度對(duì)海水魚類早期發(fā)育的影響已有很多報(bào)道［10－12］，而溫度對(duì)七帶石斑魚早期發(fā)育狀況的報(bào)道目前尚不多見。

溫度作為影響海水魚類生長(zhǎng)發(fā)育的重要環(huán)境因子是海水魚早期苗種培育的關(guān)鍵因子之一。溫度對(duì)海水魚類的影響不僅會(huì)因魚種的不同而不盡相同，對(duì)于同一種魚因其在不同區(qū)域培育溫度不同，早期發(fā)育狀況也會(huì)發(fā)生較大差異。在七帶石斑魚胚胎發(fā)育的研究中，有研究報(bào)道了在親魚培育水溫20～22℃、孵化水溫（20.5±0.5）℃條件下，受精卵歷時(shí)38 h 45 min完成孵化；也有研究報(bào)道了在水溫（27.77±1.05）℃條件下，胚胎孵化從胚體形成期至孵出仔魚歷時(shí)22 h 10 min［1］；還有研究認(rèn)為在21.2～23.2℃時(shí)，孵化效果最好。然而，這些研究?jī)H設(shè)計(jì)了單個(gè)溫度處理，沒有系統(tǒng)比較不同溫度條件對(duì)孵化的影響，無法得到最適的孵化溫度。因此，研究不同溫度條件下的胚胎發(fā)育，找出最適條件參數(shù)可以填補(bǔ)以往研究的空白。本實(shí)驗(yàn)針對(duì)不同溫度條件下七帶石斑魚受精卵的孵化及早期仔魚的存活、畸形產(chǎn)生、開口攝食的情況開展研究，以期掌握七帶石斑魚早期苗種培育的最適溫度范圍以及溫度變化對(duì)其早期發(fā)育的影響，從而為在實(shí)際生產(chǎn)中提高受精卵的孵化率和早期仔魚的成活率提供參考。

1 材料和方法

1.1 受精卵的獲取

2014年6月在山東省萊州明波水產(chǎn)有限公司開展實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)使用中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所暫養(yǎng)于公司的七帶石斑魚親魚。選取體重5～7 kg親魚，培育在水溫（21± 0.5）℃條件下，催產(chǎn)前使用人工配合飼料（結(jié)合營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑）、鮮雜魚等強(qiáng)化培養(yǎng)3個(gè)月。實(shí)驗(yàn)時(shí)，使用人絨毛膜促性腺激素（HCG）對(duì)親魚進(jìn)行催產(chǎn)，雌魚注射劑量為500 IU·kg－1，采用背部肌肉一次性注射，雄魚注射劑量為雌魚的1／2。48 h后選取性成熟度高的親魚采精、卵，進(jìn)行人工授精。受精卵置于消毒后的塑料桶中，加入海水，靜置5～10 min后取上浮的受精卵用于溫度對(duì)受精卵孵化影響實(shí)驗(yàn)。

用于溫度對(duì)初孵仔魚存活及攝食影響實(shí)驗(yàn)的材料取自同一批受精卵。在水溫（21±0.5）℃、鹽度32、流水、微充氣條件下孵化后，選取健康、活力好的初孵仔魚待用。

仔魚開口餌料為小球藻（Chlorella pyrenoidosa）和S型褶皺臂尾輪蟲（Brachionus plicatilis）。

1.2 溫度對(duì)受精卵孵化的影響實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

本研究以親魚培育溫度21℃為基準(zhǔn)，上下各擴(kuò)增4個(gè)溫度梯度，共設(shè)置13、15、17、19、21、23、25、27、29℃9個(gè)溫度梯度，以21℃組為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)時(shí)，提前將盛有孵化海水的1 000 mL玻璃燒杯放入設(shè)定為各處理溫度的智能恒溫水浴槽中（上海比朗儀器有限公司，DC—0506），使其分別達(dá)到預(yù)設(shè)溫度，每組設(shè)置3個(gè)重復(fù)。實(shí)驗(yàn)采用靜水法。實(shí)驗(yàn)時(shí)，每個(gè)燒杯放入100 cell受精卵。實(shí)驗(yàn)過程中用顯微鏡觀察各實(shí)驗(yàn)組胚胎發(fā)育情況，每4 h用吸管吸取發(fā)白沉底的死卵，記錄受精卵的胚胎發(fā)育情況、初孵仔魚數(shù)及畸形數(shù)，并拍照保存對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的胚胎及仔魚形態(tài)。以胚盤發(fā)黑、收縮或融合為受損胚胎標(biāo)準(zhǔn)；以魚體萎縮、脊椎彎曲、鰭膜破損等為仔魚畸形標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 溫度對(duì)初孵仔魚存活的影響實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)1.2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，設(shè)置13、15、17、19、21、23、25、27℃等8個(gè)溫度梯度處理，每個(gè)處理設(shè)置6個(gè)重復(fù)。實(shí)驗(yàn)時(shí)，選取在21℃下孵化出的健康初孵仔魚各100 ind，放入各溫度梯度下的1 000 mL玻璃燒杯中，在恒溫水浴槽中靜水培育，不投餌，連續(xù)觀察初孵仔魚的生長(zhǎng)情況。發(fā)現(xiàn)在48 h時(shí)，13、15、25、27℃試驗(yàn)組的初孵仔魚開始出現(xiàn)大量死亡和畸形，在此時(shí)，各溫度梯度中3個(gè)重復(fù)保持各溫度不變，另外3個(gè)重復(fù)進(jìn)行溫度調(diào)節(jié)，使其最終都逐漸達(dá)到21℃。逐日記錄仔魚存活數(shù)及畸形數(shù)，比較各組的不投餌存活系數(shù)SAI值。初孵仔魚的生存活力指數(shù)（SAI）的計(jì)算公式為：

式中，k為仔魚全部死亡的天數(shù)，N為實(shí)驗(yàn)起始時(shí)仔魚的數(shù)量，hi為第i天時(shí)仔魚的累積死亡數(shù)量。

1.4 溫度對(duì)仔魚開口攝食的影響實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

取健康的初孵仔魚用于溫度對(duì)早期仔魚攝食影響的實(shí)驗(yàn)，每個(gè)玻璃燒杯放入100 ind，溫度處理同1.3，溫度不變與溫度調(diào)節(jié)組各設(shè)置3個(gè)重復(fù)。觀察各組仔魚的生長(zhǎng)進(jìn)度，在其開口后，每天8∶00和15∶00進(jìn)行投喂，向燒杯中添加輪蟲（維持密度10～15 ind·mL－1）和小球藻（5×106cell·mL－1，水體呈淡綠色），于投喂后2 h，取15ind仔魚，在解剖鏡下進(jìn)行觀察，統(tǒng)計(jì)仔魚前2 d的攝食情況［13］。

攝食率＝攝食仔魚數(shù)／測(cè)定仔魚總數(shù)× 100%

飽食率＝3～4級(jí)消化道飽滿度仔魚數(shù)／測(cè)定仔魚總數(shù)×100%

按胃腸內(nèi)無餌料、有少量餌料、餌料適量、充滿但胃不膨脹、胃壁膨脹5種情況，將消化道飽滿度依次分為0～4級(jí)［14］。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean± SD）方式來表示。使用SPSS 17.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行ANOVA分析和Duncan多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 溫度對(duì)受精卵孵化的影響

不同溫度下七帶石斑魚受精卵的孵化情況見表1。當(dāng)溫度為13℃時(shí)，胚胎發(fā)育終止于囊胚期，隨著實(shí)驗(yàn)進(jìn)行受精卵逐漸畸形或死亡；溫度高于27℃時(shí)，胚胎發(fā)育到胚盤期時(shí)終止，未觀察到二細(xì)胞期胚胎（圖1）。結(jié)果表明，當(dāng)溫度低于13℃或高于27℃時(shí)，七帶石斑魚受精卵不能正常發(fā)育孵化。在15～25℃范圍內(nèi)，隨著溫度的升高孵化周期逐漸縮短，溫度為15℃時(shí)，孵化周期最長(zhǎng)，為（55.13±0.12）h，25℃時(shí)培育周期最短，為（24.50±0.00）h。

不同溫度對(duì)七帶石斑魚受精卵的孵化率影響很大，隨著溫度的升高，孵化率呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)。15℃時(shí)孵化率為（35.00± 3.00）%，與對(duì)照組差異顯著（P＜0.05）；19、21、23℃時(shí)的孵化率比較接近，3組間差異不顯著（P＞0.05），其中21℃時(shí)孵化率最高，為（93.67±0.12）%；25℃時(shí)孵化率大幅度下降到（31.33±4.04）%。

初孵仔魚的畸形率隨著溫度的變化也呈現(xiàn)出較大變化，有先下降后上升的趨勢(shì)。15℃時(shí)畸形率為（34.12±2.79）%；溫度在19～21℃時(shí)，初孵仔魚的畸形率沒有明顯的差異，21℃時(shí)，初孵仔魚的畸形率最低，為（1.06±1.06）%；隨著溫度的升高，初孵仔魚的畸形率隨之增加，溫度為25℃時(shí)，畸形率高達(dá)（30.86±3.09）%?；巫恤~多表現(xiàn)為尾椎彎曲（圖1）。

2.2 溫度對(duì)初孵仔魚存活的影響

不同溫度下，不投餌時(shí)初孵仔魚的存活情況有較大的差異。隨著實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行，仔魚死亡逐漸增加，19、21、23℃試驗(yàn)組的仔魚生長(zhǎng)存活情況相對(duì)較好，其它實(shí)驗(yàn)組溫度與21℃相差越大時(shí)仔魚生長(zhǎng)存活率越低。不調(diào)節(jié)溫度時(shí)，13℃組的仔魚在4 d時(shí)全部死亡，15、17℃組于7 d時(shí)全部死亡，其它試驗(yàn)組在9 d時(shí)全部死亡；在48 h后做溫度調(diào)節(jié)的試驗(yàn)組中，仔魚的生長(zhǎng)存活情況得到改善。相同天數(shù)下，仔魚的存活數(shù)明顯較高，13、15、17、27℃組的仔魚在7 d時(shí)全部死亡，其它溫度組則在9 d時(shí)全部死亡。

在不同溫度條件下，初孵仔魚的存活指數(shù)SAI值隨著溫度的升高，先升高后降低，21℃時(shí)SAI值最高，為（20.26±0.44）%，顯著高于其它溫度組（P＜0.05）。19、21、23℃溫度梯度組，在溫度調(diào)節(jié)與未調(diào)節(jié)兩種不同處理中，SAI值接近，差異不顯著而其它溫度梯度組間，溫度調(diào)節(jié)時(shí)的SAI值顯著高于溫度未做調(diào)節(jié)的組，如在溫度調(diào)解時(shí)，13℃和27℃SAI值分別為（6.90± 0.44）%、（13.30±0.31）%，顯著高于溫度處理時(shí)的（2.18±0.01）%和（8.47±0.28）%（P＜0.05）。

表1 不同溫度對(duì)七帶石斑魚受精卵孵化影響Tab.1 Effects of temperature on the fertilized egg hatching of E.septem fasciatus

圖1 24.5 h時(shí)（25℃溫度組受精卵完全孵化）各溫度梯度下受精卵的發(fā)育情況Fig.1 Development status of fertilized eggs under different temperature gradients at 24.5 h（the fertilized eggs were com pletely hatched at 25℃）

圖2 溫度對(duì)七帶石斑魚初孵仔魚存活的影響Fig.2 Effects of temperature on the survival of new ly hatched larvae of E.septem fasciatus

2.3 溫度對(duì)初孵仔魚畸形率的影響

不同溫度對(duì)七帶石斑魚早期仔魚的形態(tài)發(fā)育有較大影響（圖3）。溫度為13℃時(shí)，3日齡仔魚卵黃囊未完全吸收，身體大部發(fā)黑，出現(xiàn)萎縮（圖3-A），與正常仔魚（圖3-B）相比，其體長(zhǎng)萎縮均在35%以上；溫度27℃時(shí)，仔魚卵黃囊已完全吸收，且部分仔魚開口，但其身體發(fā)育出現(xiàn)異常，呈現(xiàn)不同程度的畸形，主要表現(xiàn)為脊椎或尾部彎曲較大，其脊椎骨某點(diǎn)偏離主軸線均在30°以上（圖3-C），屬于中度以上畸形［15］。

兩種不同溫度變化處理對(duì)七帶石斑魚早期仔魚畸形率的影響見圖4。由于7 d時(shí)仔魚大多數(shù)死亡，影響了畸形率的可比較性，故本文只列舉出1～6 d的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。由圖4可知，隨著溫度的升高，仔魚畸形率先下降后升高，19、21、23、25℃溫度組的仔魚畸形率較低，組間差異不顯著（P＞0.05）。溫度調(diào)節(jié)試驗(yàn)組與溫度未調(diào)節(jié)試驗(yàn)組相比，畸形率出現(xiàn)下降，而且隨著試驗(yàn)的進(jìn)行更加明顯。例如，第3 d時(shí)，溫度于48 h未做調(diào)節(jié)處理時(shí)的15、27℃組的畸形率分別為（36.91±4.31）%、（7.09±1.27）%，做溫度調(diào)節(jié)的兩組分別為（21.06±1.84）%、（6.66± 1.24）%，兩者均值分別相差42.94%和6.06%；6 d時(shí)，兩者之間均值分別相差86.52%和93.24%，畸形率明顯降低。

圖3 不同溫度下七帶石斑魚仔魚的正常和畸形形態(tài)（以3日齡仔魚為例）Fig.3 Larvae of E.septem fasciatus in normal and malformation morphology under different temperatures

2.4 溫度對(duì)仔魚開口攝食的影響

不同溫度下，七帶石斑魚早期仔魚的攝食情況也存在較大差異（表2）。21℃時(shí)，仔魚開口攝食的攝食率和飽食率最高，分別為80.0%和40.0%；隨著溫度的升高或下降，攝食率和飽食率都逐漸降低。17℃和25℃時(shí)，仔魚的攝食率和飽食率分別為20.0%、13.3%和33.3%、20%；溫度低至13℃時(shí)，仔魚不能正常開口并逐漸死亡；溫度27℃時(shí)，仔魚雖能形成口裂，但不能攝食，攝食率為0%。19、21、23℃試驗(yàn)組，2 d仔魚的攝食率和飽食率都有所提高，17℃和19℃兩組仔魚的攝食率和飽食率變化不明顯，有的組則呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，其中25℃仔魚的攝食率由33.3%降到26.7%。

對(duì)溫度進(jìn)行恢復(fù)處理的仔魚，攝食情況得到改善，仔魚攝食率和飽食率明顯升高。17℃試驗(yàn)組，在溫度調(diào)節(jié)恢復(fù)21℃后，仔魚第2 d的攝食率和飽食率為86.7%、73.3%，比溫度未做處理時(shí)分別提高了66.7%和53.3%，與正常21℃對(duì)照組的86.7%和80.0%已相近；25℃試驗(yàn)組在溫度調(diào)節(jié)恢復(fù)后，仔魚2 d的攝食率和飽食率較溫度未做處理時(shí)也有了較大提高，分別達(dá)到86.7%和53.3%。13、15、27℃溫度調(diào)節(jié)試驗(yàn)組中除個(gè)別仔魚有攝食現(xiàn)象，總體不攝食，這3組試驗(yàn)2 d仔魚的攝食率分別為13.3%、13.3%和6.7%，較1 d有下降趨勢(shì)，仔魚的飽食率全部為0%。

圖4 兩種不同溫度處理對(duì)七帶石斑魚仔魚畸形發(fā)生的影響Fig.4 Effects of two different temperature treatments on the larvaemalformation

表2 不同溫度對(duì)七帶石斑魚早期仔魚攝食的影響Tab.2 Effects of different tem peratures on the larva feeding of E.septem fasciatus

3 討論

3.1 溫度對(duì)受精卵孵化的影響

適宜的溫度對(duì)于任何一種海水魚類的胚胎發(fā)育來說都是必要的，魚種不同，其胚胎發(fā)育對(duì)所需要的溫度條件也不同，對(duì)溫度的適應(yīng)范圍也有較大的差異［16］。同樣，水溫也是影響七帶石斑魚受精卵孵化的重要因子，如對(duì)孵化周期的影響。有些研究顯示，在水溫（20.5±0.5）℃條件下，其受精卵歷時(shí)38 h 45 min孵化出膜［4］；水溫（27.77±1.05）℃時(shí)，胚體發(fā)育至初孵仔魚歷時(shí)約22 h 10 min，可見溫度不同，其孵化所需時(shí)間也相差很大。

從本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果來看，在一定溫度范圍內(nèi)，隨著溫度的升高，孵化周期逐漸縮短，這與張海發(fā)等［11］對(duì)斜帶石斑魚（Epinephelus coioides）的研究結(jié)果一致；魚類的胚胎發(fā)育及孵化出膜主要是依靠體內(nèi)各種酶促反應(yīng)來完成［17－19］，而超出適溫范圍可以導(dǎo)致酶失去活性［20］。本實(shí)驗(yàn)中低于13℃或高于27℃時(shí)胚胎發(fā)育到一定階段均停止，受精卵逐漸壞死。當(dāng)溫度偏離21℃時(shí)，受精卵孵化率降低，初孵仔魚畸形率逐漸升高，可能原因是溫度過低或過高時(shí)影響了胚胎發(fā)育所需各種酶的活性，使其無法進(jìn)行正常的酶促反應(yīng)，造成受精卵的代謝和發(fā)育形態(tài)的異常。值得注意的是，謝菁等［1］在對(duì)七帶石斑魚胚體發(fā)育的研究中，使用的溫度為（27.77±1.05）℃，成功得到了初孵仔魚，與本研究結(jié)果存在差異，可能的原因是其實(shí)驗(yàn)所用受精卵來自于日本，長(zhǎng)時(shí)間空運(yùn)過程中，受精卵已發(fā)育至胚體期，對(duì)高溫有了一定承受能力。另外，兩組實(shí)驗(yàn)所用親魚屬于不同的地理區(qū)域種群，其親本培育溫度不同，可能導(dǎo)致受精卵在孵化上存在差異。

已有研究把孵化率降低50%作為胚胎發(fā)育適宜溫度的上、下限的標(biāo)準(zhǔn)［21］，以孵化率最高的溫度做為魚類胚胎發(fā)育的最適溫度［22］。本實(shí)驗(yàn)中，在17～23℃范圍內(nèi)，受精卵的孵化率均超過50%，畸形率也很低，21℃時(shí)受精卵的孵化率最高，畸形率最低，因此，七帶石斑魚受精卵孵化的適宜溫度為17～23℃，最適溫度為21℃。

3.2 溫度對(duì)初孵仔魚成活率的影響

生存環(huán)境溫度影響著生物的生長(zhǎng)發(fā)育、生活狀態(tài)、繁殖和分布狀況，任何一種生物的生長(zhǎng)發(fā)育，都需要一定的溫度條件。水溫作為魚類生長(zhǎng)發(fā)育所需的關(guān)鍵因子，對(duì)其體內(nèi)酶活性、離子分布、滲透壓調(diào)節(jié)及氧氣消耗有明顯影響。如施兆鴻等［23］和陳超等［8］分別在溫度脅迫對(duì)銀鯧（Pamper argenteus）和七帶石斑魚的影響的研究中發(fā)現(xiàn)，溫度能夠引起魚體內(nèi)脂肪酶、胃蛋白酶等消化酶和葡萄糖、甘油三酯、肌酐等血清生化指標(biāo)的變化，在急性溫度脅迫時(shí)會(huì)對(duì)魚的機(jī)體組織造成一定的損傷。另外，溫度還會(huì)影響仔魚基因的轉(zhuǎn)入表達(dá)，通過對(duì)RNA加工和蛋白質(zhì)合成的調(diào)控，引起仔魚機(jī)體組織產(chǎn)生一系列變化［24］。本研究未從分子和生理水平研究溫度對(duì)七帶石斑魚仔魚發(fā)育的影響，因此，溫度對(duì)仔魚存活、畸形發(fā)生影響的機(jī)制仍需要進(jìn)一步的探究。

在溫度對(duì)七帶石斑魚初孵仔魚成活率的影響的研究中，以不投餌存活系數(shù)（SAI）和仔魚畸形率為主要評(píng)價(jià)指標(biāo)。在不投餌的條件下，觀察仔魚忍受能力和存活天數(shù)，以及形體發(fā)育畸形情況。SAI值越大，畸形率越低，說明仔魚的生長(zhǎng)活力越好，用于規(guī)?；绶N培育時(shí)健康魚苗的成活率也就越高［11］。本研究結(jié)果表明，隨著溫度的升高，SAI值有一個(gè)先升高后下降的過程，畸形率變化趨勢(shì)與之相反，在19、21、23℃時(shí)，SAI值都較高，仔魚畸形發(fā)生率也相對(duì)最低，當(dāng)溫度低于19℃或高于27℃時(shí)，SAI值明顯下降，都在10以下。進(jìn)一步驗(yàn)證了七帶石斑魚早期仔魚生存的適宜溫度范圍為19～23℃。

3.3 溫度對(duì)早期仔魚攝食的影響

魚類的苗種培育中，選擇適宜的溫度是必要前提之一，但水溫并不是恒定不變的，如天氣的影響往往造成水溫變化較大。仔魚在早期生長(zhǎng)階段對(duì)溫度較為敏感，此時(shí)溫度的變化會(huì)對(duì)其后期發(fā)育及生存產(chǎn)生重大影響［22］。如在仔魚開口進(jìn)入外源營(yíng)養(yǎng)階段，溫度變化幅度較大，仔魚活力受到影響而不能正常攝食，一定時(shí)間后，會(huì)進(jìn)入忍受饑餓的時(shí)間臨界點(diǎn)（PNR），一旦超過了這個(gè)時(shí)間點(diǎn)，仔魚就無法恢復(fù)攝食直至死亡［25］。仔魚開口到達(dá)PNR的時(shí)間與溫度有很大關(guān)系，在適宜的溫度范圍內(nèi)，仔魚達(dá)到PRN的時(shí)間較長(zhǎng)，當(dāng)溫度較低或較高時(shí)，仔魚達(dá)到PRN的時(shí)間會(huì)明顯縮短，給育苗工作帶來不利影響［26－27］。

本研究中，對(duì)溫度做了兩種不同的處理方式，17、19、23、25℃試驗(yàn)組在處理48 h后將溫度調(diào)節(jié)恢復(fù)到21℃，仔魚的攝食情況明顯好轉(zhuǎn)，2 d其攝食率和飽食率達(dá)到與正常21℃對(duì)照組的86.7%、80%相近的水平，而溫度保持17、19℃不變?cè)囼?yàn)組的攝食率為20.0%、26.7%，飽食率均為20%，低于溫度做調(diào)節(jié)恢復(fù)試驗(yàn)組的水平。13、15、27℃試驗(yàn)組仔魚未能正常開口攝食，當(dāng)溫度恢復(fù)調(diào)節(jié)后，其改善效果也不明顯，仔魚2 d攝食率分別為13.3%、13.3%和6.7%，較之1 d反而有所降低，飽食率均為0%，可能原因是溫度太低或過高，影響了仔魚正常的生理代謝機(jī)制，對(duì)其產(chǎn)生了不可逆轉(zhuǎn)的損傷［12，28］。

本實(shí)驗(yàn)從受精卵孵化、初孵仔魚的饑餓耐力、畸形發(fā)生和攝食狀況等方面探討了溫度對(duì)七帶石斑魚早期苗種繁育的影響，結(jié)果表明：19～23℃為七帶石斑魚早期發(fā)育階段的最適溫度。在仔魚開口攝食期，應(yīng)避免氣候等原因造成水體溫度大幅度波動(dòng)，當(dāng)水溫降至17℃以下或升至25℃以上時(shí)，應(yīng)及時(shí)采取措施，對(duì)溫度進(jìn)行恢復(fù)調(diào)節(jié)，使其維持在最適范圍內(nèi)，以保證七帶石斑魚早期仔魚的正常生長(zhǎng)和攝食，進(jìn)而獲得健康苗種。

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Effects of temperature changing on the early development and initial feeding of Epinephelus septem fasciatus

LIU Li1，CHEN Chao1，KONG Xiang-di1，2，LIYan-lu1，YU Huan-huan1，2，，ZHAI Jie-ming3，PANG Zun-fang3
（1.Yellow Sea Fisheries Research Institute of Chinese Academy of Fishery Sciences，Shandong Qingdao 266071，China；2.College of Fisheries and Science of Shanghai Ocean University，Shanghai 201306，China；3.Laizhou Mingbo Fisheries Limited Company，Shandong Yantai 261418，China）

The effects of temperature（13℃，15℃，17℃，19℃，21℃，23℃，25℃，27℃）on the hatching periods，the hatchability and the deformity rates were successively observed in fertilized eggs of Epinephelus septemfasciatus.To determine the survival activity index（SAI），morphological development of larvae and opening feeding after bait casting，starvation endurance and feeding experimentwere carried outon the healthy hatched larvae of Epinephelus septemfasciatus at the temperature of（21±0.5）℃，and the temperature gradients（13℃，15℃，17℃，19℃，21℃，23℃，25℃，27℃）of experiment were dealed with two groups：one group maintained the original temperature，the other group restored temperature to 21℃every other two days.The results showed that：1）Temperature from 17℃to 23℃was suitable for the hatching of fertilized eggs，and they could not be hatched at other temperatures.When the temperature was 21℃，the highest hatchability occurred at93.67±1.52%，while the lowest deformity rate occurred at 1.06±1.06%.When the temperature was lower or higher than 21℃，the lower or the higher the temperature，the lower hatching rate and the higher deformity rate occurred.2）The SAI values of newly hatched larvae firstly increased followed by a declinewith the changes of temperature.The SAI value at21℃was the highest（20.26±0.44%）.In unregulated groups，the SAI values at temperature 13℃and 27℃were（2.18±0.01）%and（8.47±0.28）%respectively.Compared to the unregulated groups，the SAI values（（6.90±0.44）%and（13.30±0.31）%）enhanced significantly after temperature restoring to 21℃（P＜0.05），while the deformity rates in different temperature gradient groups also decreased to different extents.3）There were some differences in feeding of hatching larvae between different temperature groups.The initial feeding rate and satiation rate of the larvae could reach 80.0%and 40.0%，respectively at21℃，but both of them declined gradually with temperature changing.In the same way，these feeding condition could be obviously improved through the temperature adjustment，for example，when temperaturemaintained at 17℃，the feeding rate and satiation rate of the larvae were 20.0%and 13.3%，respectively.However，the rates rose to 66.7%and 33.3%，respectively after the temperature restoring to 21℃.

Epinephelus septemfasciatus；temperature changing；early development；initial feeding

P 735

A

1004－2490（2017）04－0443－11

2017－01－06

科技部國(guó)際合作項(xiàng)目（2012DFA30360）

劉 莉（1988－），女，碩士研究生，研究方向?yàn)楹Ｋ~類繁育與養(yǎng)殖技術(shù)。

陳 超，研究員。Email：ysfrichenchao＠126.com