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      提取方法對澳洲堅果油的化學成分及其抗氧化活性影響研究

      2017-09-03 10:02:03帥希祥杜麗清涂行浩
      食品工業(yè)科技 2017年15期
      關鍵詞:水劑堅果澳洲

      帥希祥,杜麗清,張 明,涂行浩

      (中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院南亞熱帶作物研究所,廣東湛江 524091)

      提取方法對澳洲堅果油的化學成分及其抗氧化活性影響研究

      帥希祥,杜麗清*,張 明,涂行浩

      (中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院南亞熱帶作物研究所,廣東湛江 524091)

      本文旨在研究不同提取方法(水劑法、壓榨法、溶劑法)對澳洲堅果油主要理化性質(zhì)、活性成分、脂肪酸組成和紅外光譜的影響,并采用DPPH自由基清除能力和氧化穩(wěn)定性來綜合評價澳洲堅果油的抗氧化活性。結(jié)果表明:三種提取方法得到的澳洲堅果油的理化性質(zhì)(過氧化值、酸價、皂化值、碘值等)均符合國家食用油標準;與溶劑法和水劑法相比,壓榨法得到的澳洲堅果油表現(xiàn)出較好的產(chǎn)品特性,其總酚酸含量((41.82±0.73) mg/100 g)、不飽和脂肪酸含量(83.67%)最高,且其氧化誘導時間((13.87±0.37) h)最長,清除DPPH自由基能力(46.70%)最強。紅外譜圖顯示不同提取方法得到的澳洲堅果油均具有堅果油的特征吸收,且提取方法對其分子結(jié)構沒有影響;通過分析不同提取方法得到的澳洲堅果油的品質(zhì),可為提取高品質(zhì)澳洲堅果油奠定理論基礎,同時也為澳洲堅果油的工業(yè)化生產(chǎn)提供了參考依據(jù)。

      澳洲堅果油,提取方法,化學成分,抗氧化

      澳洲堅果(MacadamiaternifoliaF. Muell.)別名澳洲核桃、夏威夷果等,屬山龍眼科澳洲堅果屬多年生常綠喬木[1-3]。20世紀60~70年代開始引入中國[3],目前在中國廣東、廣西、云南及貴州等地均有種植[4]。澳洲堅果含油量高,其脂肪含量高達78%以上[5-6],而且其不含膽固醇,飽和脂肪酸含量低,單不飽和脂肪酸超過70%,可降低患心臟病的風險[7-8],對人體具有重要的生理作用和藥用價值。在發(fā)達國家,澳洲堅果油作為功能油脂,越來越受到消費者的歡迎。

      近年來,國內(nèi)外有研究[9-13]報道了不同提取方法如水劑法、溶劑法、熱榨法、超臨界CO2萃取法提取澳洲堅果油的工藝優(yōu)化及基本理化性質(zhì)的分析,但關于不同提取方法得到的澳洲堅果油的化學組分、結(jié)構性質(zhì)及抗氧化活性的分析比較尚未見報道。

      本文擬以烘干澳洲堅果仁為原料,采用水劑法、壓榨法、溶劑法提取澳洲堅果油,對不同方法提取的澳洲堅果油的主要理化性質(zhì)進行比較,并研究它們脂肪酸組成、生育酚、磷脂、甾醇等化學成分,以及不同提取方法得到的澳洲堅果油的抗氧化活性,旨在為提取高品質(zhì)澳洲堅果油奠定理論基礎,同時也為澳洲堅果油的工業(yè)化生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

      1 材料與方法

      1.1 材料與儀器

      烘干澳洲堅果仁 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院南亞熱帶作物研究所中試車間。

      沒食子酸(99%)、抗壞血酸(99.99%)、生育酚混標(α、β、γ、δ)(98%)、37種脂肪酸甲酯混標、溴化鉀(99.99%)、DPPH(≥97%)、膽甾烷醇(>99%)、磷脂酰膽堿(>99%)、磷脂酰乙醇胺(>99%)、磷脂酰肌醇(>99%) 標準品,阿拉丁化學試劑有限公司;福林酚、碳酸鈉、甲醇、無水乙醇、正己烷、異丙醇、氫氧化鉀、碘化鉀等 分析純,國藥集團化學試劑有限公司。

      分析天平AR224CN型 奧康斯儀器有限公司;高速離心機LXJ-IIB型 上海安亭科學儀器廠;冰箱BCD-539WT型 青島海爾股份有限公司;恒溫水浴鍋HH-4型 江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司;手動可調(diào)量程單道移液器 10~1000 μL,德國Eppendorf公司;高速冷凍離心機ST40型 賽默飛世爾科技(中國)有限公司;紫外-可見分光光度計UV2700型 島津企業(yè)管理(中國)有限公司;氣相色譜7890A型、液相色譜1260型 安捷倫科技(上海)有限公司;油脂氧化穩(wěn)定性分析儀892型 瑞士萬通中國有限公司。

      1.2 實驗方法

      1.2.1 澳洲堅果油的提取

      1.2.1.1 溶劑法提取澳洲堅果油 參考楊輝等[14]方法,并略作修改,修改如下:稱取100 g烘干的澳洲堅果仁,粉碎,加入1000 mL石油醚(30~60 ℃沸程)置于燒杯中,磁力攪拌4 h,過濾,收集濾液,旋蒸至石油醚完全揮發(fā),6000 r/min離心10 min,得到澳洲堅果油,備用。

      1.2.1.2 壓榨法提取澳洲堅果油 將烘干的澳洲堅果仁直接投入經(jīng)過預熱至70 ℃的榨油機中進行壓榨,收集壓榨油并在4800 r/min下離心分離除去殘渣,得到澳洲堅果油,備用。

      1.2.1.3 水劑法提取澳洲堅果油 參考文獻[12]。

      1.2.2 甾醇含量測定 參考文獻[15]。

      1.2.3 磷脂含量測定 按NY/T 1798-2009《植物油脂中磷脂組分含量的測定》的高效液相色譜法執(zhí)行。

      1.2.4 VE含量測定 參照文獻[16]。

      1.2.5 理化指標的測定 參照文獻[17]測定澳洲堅果油的酸值、過氧化值、皂化值、碘值、折光率、水分及揮發(fā)物含量。

      1.2.6 脂肪酸組成分析 參照文獻[12]。

      1.2.7 傅里葉紅外光譜分析 在紅外燈的照射下,將干燥的KBr粉末置于瑪瑙研缽中研磨,再擠壓成平整透明的小圓塊。在小圓塊中心滴加10 μL澳洲堅果油,采用Nicolet 5700傅里葉紅外光譜儀,在4 cm-1的分辨率下重復掃描128次,光譜掃描范圍為4000~400 cm-1,用Ominic 7.2軟件采集紅外光譜數(shù)據(jù),并用Origin 8.0軟件繪制紅外光譜曲線[18]。

      1.2.8 總酚酸含量的測定

      1.2.8.1 沒食子酸標準曲線的繪制 參考文獻[12]。

      1.2.8.2 澳洲堅果油樣品測定 準確稱取5.000 g澳洲堅果油于25 mL容量瓶中,用三氯甲烷溶解并定容至刻度。準確吸取0.20 mL上述溶液于10 mL比色管中,按1.2.8.1的方法測定,在760 nm處測定吸光值,并根據(jù)標準曲線計算澳洲堅果油中總酚酸的含量(以沒食子酸計)。

      1.2.9 澳洲堅果油氧化穩(wěn)定性分析 采用892型Rancimat油脂氧化酸敗儀測定澳洲堅果油的氧化穩(wěn)定性。測定條件:油樣用量3.0 g,溫度120 ℃,空氣流速10 L/h[11]。

      1.2.10 抗氧化活性的測定 以澳洲堅果油清除DPPH自由基的能力表示。采用無水乙醇將DPPH配制成2.0×10-4mol/L的溶液備用。測定時,在試管中依次加入2.0 mL DPPH和2.0 mL無水乙醇,混勻3 min后,用1 cm比色皿在517 nm波長處測吸光度,記為A0;加入2.0 mL DPPH溶液和2.0 mL三氯甲烷混勻后測定吸光度,記為A1;以無水乙醇調(diào)零。油脂樣品質(zhì)量濃度設置5個梯度:100.0%,50.0%,25.0%,10%,5.0%。每一吸光度平行測定3次,取其平均值。按式(1)計算清除率[19-20]。

      式(1)

      式(1)中:c-DPPH清除率,%;A0-空白樣品的吸光值;A1-樣品的吸光值。

      樣液的制備:用三氯甲烷分別配制濃度為100.0%、50.0%、25.0%、10.0%和5.0%的不同提取方法得到的澳洲堅果油溶液,按上述方法測定其清除率。

      1.3 統(tǒng)計分析

      所有實驗重復進行3次,實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進行分析,結(jié)果表示為均值±標準偏差,作圖采用origin 8.0軟件。

      表1 提取方法對澳洲堅果油主要理化性質(zhì)的影響Table 1 The physical and chemical properties of macadamia nuts oil from different extraction methods

      注:不同字母表示數(shù)據(jù)有顯著性差異(p<0.05)。

      表2 提取方法對澳洲堅果油化學成分的影響Table 2 The chemical composition of macadamia nuts oil from different extraction methods

      2 結(jié)果與分析

      2.1 提取方法對澳洲堅果油主要理化性質(zhì)的影響

      由表1可知,水劑法提取的澳洲堅果油的酸價和過氧化值比溶劑法和壓榨法提取的較高,且水劑法提取的澳洲堅果油的酸價與溶劑法和壓榨法存在顯著性的差異(p<0.05),且三種方法提取的澳洲堅果油的過氧化值和酸價均符合國家食用油標準(GB 2716-2005)規(guī)定的酸價(≤3 mg KOH/g)和過氧化值(≤9.85 mmol/kg)的范圍,表明不同提取方法提取的澳洲堅果油都具有較好的品質(zhì);三種方法提取的澳洲堅果油的碘值都較低,皂化值都較高,且三種方法提取的堅果油的碘值不存在顯著性差異(p>0.05),碘值較低說明澳洲堅果油是一種良好的不干性油,皂化值較高說明澳洲堅果油脂肪酸分子量較小,親水性更強,更適合用做化妝品原料[21];溶劑法提取的澳洲堅果油的水分及揮發(fā)物含量偏高,可能是溶劑法提取過程中有部分溶劑殘留。同時這些數(shù)值與許良等[20]研究亞臨界丁烷萃取、正己烷萃取和熱榨得到的澳洲堅果油及黃宗蘭等[9]、杜麗清等[12]和范曉波[10]研究的水劑法提取的澳洲堅果油的理化性質(zhì)是極其相似的。

      從表1中還可以看出,三種方法提取的澳洲堅果油的氧化誘導時間分別為(11.44±0.27)、(13.87±0.37)、(11.27±0.34) h。有研究[12,21]表明,亞臨界萃取、正己烷萃取和壓榨澳洲堅果油的氧化誘導時間(120 ℃)分別為8.74,8.83,11.22 h,壓榨法得到澳洲堅果油氧化誘導時間最長,這與我們研究結(jié)果是相一致的。壓榨法得到的澳洲堅果油的氧化誘導時間較長,說明壓榨法得到的澳洲堅果油的氧化穩(wěn)定性更好,這可能是由于水劑法和溶劑法提取對澳洲堅果油中的抗氧化物質(zhì)造成了一定的損失。

      2.2 提取方法對澳洲堅果油活性成分的影響

      澳洲堅果油中活性成分包括甾醇、磷脂、VE、酚酸類物質(zhì)、亞麻酸、亞油酸、二十二碳六烯酸(DHA)等,本文采用氣相和液相色譜法對油脂中常見的活性物質(zhì)—甾醇、磷脂和VE進行分析,結(jié)果見表2。由表2可知,水劑法、溶劑法、壓榨法得到的澳洲堅果油的甾醇含量分別為(55.51±0.21)、(47.19±1.10)和(30.64±0.46) mg/100 g,水劑法提取的較高,壓榨法的較低,且存在顯著性的差異(p<0.05),Kaijser等[22]對新西蘭地區(qū)的澳洲堅果油中甾醇含量進行分析,共鑒定出4種甾醇類,分別為谷甾醇、5-燕麥甾醇、菜油甾醇和豆甾醇,其總含量為105~179 mg/100 g,比我們的分析結(jié)果較高,這可能與澳洲堅果的產(chǎn)地和品種有較大的關系。然而三種方法提取的澳洲堅果油中磷脂(檢出限0.75 mg/g)和VE(檢出限2 mg/kg)均未檢出,這與前人研究的結(jié)果是非常相似的,Kaijser等[22]研究發(fā)現(xiàn)了澳洲堅果油中幾乎不含生育酚;Wall[23]對7個不同品種的澳洲堅果油的生物活性成分進行研究,發(fā)現(xiàn)大多數(shù)品種的澳洲堅果油中幾乎不含生育酚,但卻含有大量的生育三烯酚和角鯊烯;生育三烯酚比生育酚含有更多的雙鍵,更易淬滅自由基反應,可能增加澳洲堅果油的氧化穩(wěn)定性,這與前面研究發(fā)現(xiàn)三種提取方法得到的澳洲堅果油的氧化誘導時間都較長是相對應的,推測三種提取方法得到的澳洲堅果油中可能也含有大量的生育三烯酚,后期將對此進行深入研究。

      同時,通過沒食子酸標準曲線的繪制,得出其線性回歸方程為y=0.0064x+0.0267(x為沒食子酸含量μg/mL,y為吸光度,R2=0.9963)。從表2也可以看出,三種方法提取得到的澳洲堅果油中總酚酸含量分別為(31.87±0.16)、(34.91±0.50)、(41.82±0.73) mg/100 g,壓榨法得到的澳洲堅果油中總酚酸含量最高,這與前面分析發(fā)現(xiàn)其氧化誘導時間最長是相對應的,且Quinn等[24]研究也發(fā)現(xiàn)澳洲堅果仁及殼中的總酚酸類物質(zhì)含量較高,且分離出四種酚類物質(zhì),同時發(fā)現(xiàn)帶殼壓榨的澳洲堅果油的氧化穩(wěn)定性較純?nèi)蕢赫サ母?未精煉比精煉的更好,這些可能與油中酚類物質(zhì)含量有關。

      2.3 提取方法對澳洲堅果油脂肪酸組成的影響

      水劑法、壓榨法和溶劑法提取得到的澳洲堅果油的脂肪酸組成、各自的保留時間及所占的比例見表3。

      表3 提取方法對澳洲堅果油脂肪酸組成的影響(%)Table 3 The fatty acid composition of macadamia nuts oil from different extraction methods(%)

      由表3可知,水劑法、壓榨法、溶劑法提取得到的澳洲堅果油基本都檢測出19種脂肪酸,但溶劑法提取的澳洲堅果油中未檢出十五烷酸,且澳洲堅果油主要以不飽和脂肪酸為主,其含量分別為83.45%、83.67%和83.51%,壓榨法提取的含量較高,但不存在顯著性差異(p<0.05)。其不飽和脂肪酸主要為棕櫚油酸和油酸,棕櫚油酸含量分別為17.252%、19.692%和17.645%,油酸含量分別為61.443%、58.030%和61.173%,油酸由于可降低血液總膽固醇和有害膽固醇,卻不降低有益膽固醇[4];同時油酸的充分攝取可促進人體鈣、磷、鋅等礦物質(zhì)的吸收,因此澳洲堅果油是一種品質(zhì)較好的植物油。且水劑法、壓榨法和溶劑法提取得到的澳洲堅果油的單不飽和脂肪酸含量分別為81.36%、80.57%和81.40%,多不飽和脂肪酸含量分別為2.09%、3.10%和2.11%,飽和脂肪酸含量分別為16.55%、16.33%和16.49%。許良[21]研究亞臨界丁烷萃取的澳洲堅果油脂肪酸組成,共檢測出11種脂肪酸,其中飽和脂肪酸占18.50%,不飽和脂肪酸占81.50%;魏長賓等[25]研究溶劑提取的澳洲堅果油脂肪酸組成,共檢測出10種脂肪酸,且飽和脂肪酸占22.39%,不飽和脂肪酸占77.23%。說明不同提取方法得到的澳洲堅果油的脂肪酸組成存在一定的差異,但壓榨法得到的澳洲堅果油中不飽和脂肪酸含量偏高,飽和脂肪酸含量偏低,都不存在顯著性差異(p<0.05)。此外,Kaijser等[22]研究新西蘭產(chǎn)地不同品種的澳洲堅果油脂肪酸發(fā)現(xiàn)單不飽和脂肪酸平均含量為80%,飽和脂肪酸含量為13.2%~17.8%,并且發(fā)現(xiàn)其存在4%左右的異油酸,而本實驗三種提取方法得到的澳洲堅果油中都未發(fā)現(xiàn)異油酸,可能與澳洲堅果的品種和產(chǎn)地等不同有較大的關系。

      2.4 提取方法對澳洲堅果油紅外光譜的影響

      采用傅里葉紅外光譜對水劑法、壓榨法和溶劑法提取得到的澳洲堅果油結(jié)構進行分析,見圖1。從圖1中可以看出,三種提取方法得到的澳洲堅果油的紅外光譜是完全相吻合的,說明提取方法對澳洲堅果油的結(jié)構沒有產(chǎn)生影響,且圖中3000~2750 cm-1處吸收帶代表的是—CH3、—CH2、—CH的特征吸收峰,1750 cm-1處吸收帶代表的是長鏈脂肪酸中羰基、甲酯基、酮類和醛類的特征吸收蜂,1200 cm-1處吸收帶代表的是不飽和酯的特征吸收峰,1290~1040 cm-1處吸收帶代表的是醇類、酯類、醚類、羧酸類和脂肪酸的特征吸收峰,750 cm-1處吸收帶可能與脂肪酸中脂肪族鏈的鏈接順序有關,這與Albuquerque等[26]研究的布荔蒂油和巴巴蘇仁油的紅外光譜圖和Santos等[27]研究的巴西堅果油的紅外光譜是非常相似的。同時,從圖1中可以發(fā)現(xiàn),三種提取方法得到的澳洲堅果油的紅外光譜圖在2900,1600,750 cm-1處都具有較強吸收,這與Silverstain等[28]和Reda等[29]報道不飽和脂肪酸中雙健的功能基團(C—H和C═O)在2900,1600,750 cm-1處具有較強的特征吸收是相吻合的,說明三種提取方法得到的澳洲堅果油都含有大量的不飽和雙健,這也驗證了脂肪酸組分分析的結(jié)果。

      圖1 提取方法對澳洲堅果油紅外圖譜的影響Fig.1 The FT-IR spectroscopy of macadamia nuts oil from different extraction methods

      2.5 提取方法對澳洲堅果油抗氧化活性的影響

      DPPH自由基的清除能力可以用來綜合評價澳洲堅果油的抗氧化活性。圖2顯示了溶劑法、壓榨法、水劑法得到澳洲堅果油對DPPH自由基的清除能力。由圖2可知,澳洲堅果油對DPPH自由基都有一定的清除能力,且三種提取方法得到的澳洲堅果油對DPPH自由基的清除能力強弱為壓榨法>溶劑法>水劑法,同時,隨著澳洲堅果油質(zhì)量濃度的增加,其清除能力也增強,三種提取方法得到的澳洲堅果原油(100%)對DPPH自由基的清除能力分別為44.78%、46.70%和23.45%,溶劑提取得到的澳洲堅果油比壓榨法的抗氧化活性較低,可能是溶劑提取對澳洲堅果油中活性物質(zhì)造成一定的損失。Miraliakbari等[30]研究發(fā)現(xiàn)樹堅果油的氯仿/甲醇提取物比正己烷提取物的清除DPPH能力更強;Prado等[31]研究花生油的抗氧化活性,發(fā)現(xiàn)花生油較強的抗氧化活性與其中含有較高的酚類物質(zhì)有關。這與本實驗發(fā)現(xiàn)壓榨法得到的澳洲堅果油中總酚酸和不飽和脂肪酸含量較高是相一致的,同時,與前面分析發(fā)現(xiàn)壓榨法得到澳洲堅果油的氧化誘導時間較長也是相吻合的,說明壓榨法得到的澳洲堅果油具有較好的抗氧化活性。

      圖2 提取方法對澳洲堅果油抗氧化活性的影響Fig.2 The antioxidant activities of macadamia nuts oil from different extraction methods

      3 結(jié)論

      研究不同提取方法(水劑法、壓榨法、溶劑法)得到的澳洲堅果油,發(fā)現(xiàn)不同提取方法提取的澳洲堅果理化性質(zhì)(過氧化值、酸價、皂化值、碘值等)均符合國家食用油標準;與溶劑法和水劑法相比,壓榨法得到的澳洲堅果油表現(xiàn)出較好的產(chǎn)品特性,其總酚酸含量((41.82±0.73) mg/100 g)、不飽和脂肪酸含量(83.67%)最高,并且其氧化誘導時間((13.87±0.37) h)最長,清除DPPH自由基能力(46.70%)最強,具有較強的抗氧化活性;紅外譜圖顯示不同提取方法得到的澳洲堅果油均具有堅果油的特征吸收,但提取方法對其分子結(jié)構沒有影響。與國內(nèi)外學者對澳洲堅果油的研究[9-13]相比,本研究更全面系統(tǒng)地對不同提取方法得到的澳洲堅果油的理化指標、化學組成及抗氧化活性進行了研究,這為提取高品質(zhì)澳洲堅果油奠定理論基礎,同時也為澳洲堅果油的工業(yè)化生產(chǎn)提供了參考依據(jù)。

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      Study on the antioxidant activities and compositions of macadamia nuts oil from different extraction methods

      SHUAI Xi-xiang,DU Li-qing*,ZHANG Ming,TU Xing-hao

      (South Subtropical Crops Research Institute,Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences,Zhanjiang 524091,China)

      Kernel oil was extracted by different extraction methods from dried macadamia nut(aqueous extraction,solvent extraction,compression process). Firstly,the basic physicochemical properties were analyzed. And then,physicochemical properties,active components,fatty acid composition and the infrared characteristics of macadamia nut oil with different extraction methods were analyzed. To evaluate the oxidation induction time and free radical scavenging capacity,the antioxidant capacity of macadamia nut oil with different extraction methods was determined. The results showed that the basic physicochemical properties(peroxide value,acid value,saponification value,iodine value)of the oil extracted by the three methods all conformed to the national edible oil standard,and compression process was found to be the best process for extracting oil with a favorable quality characteristics compared to aqueous extraction and solvent extraction. Higher total phenolic acid content((41.82±0.73) mg/100 g),unsaturated fatty acid content(83.67%)and oxidation induction time((13.87±0.37) h)were obtained with compression process,also the DPPH scavenging capacities(46.70%)of this group was the highest. The infrared spectrum showed that the macadamia nut oil from different extraction methods had the characteristic absorption of the nut oil,extraction method had no effect on its molecular structure. The quality analysis of macadamia nut oils extracted by different methods could lay a theoretical foundation for the extraction of high quality macadamia nut oil,as well as provide a reference for the industrial production of macadamia nut oil.

      macadamia nut oil;extraction methods;chemical composition;antioxidant

      2017-03-08

      帥希祥(1989-),男,碩士,研究實習員,研究方向:農(nóng)副產(chǎn)品精深加工,E-mail:shuaixixiang1989@163.com。

      *通訊作者:杜麗清(1976-),男,碩士,副研究員,研究方向:休閑農(nóng)產(chǎn)品加工,E-mail:duliqing927618@163.com。

      中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務費專項資金項目(1630062016007);中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院基本科研業(yè)務費專項資金(1630062017018);南昌大學食品科學與技術國家重點實驗室開放基金課題(SKLF-KF-201604)。

      TS255.6

      A

      1002-0306(2017)15-0001-06

      10.13386/j.issn1002-0306.2017.15.001

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