中藥飲片金銀花增重物質(zhì)的鑒別

康慶偉，閻 姝，夏亞飛，楊 艷

中藥飲片金銀花增重物質(zhì)的鑒別

康慶偉，閻 姝，夏亞飛，楊 艷

目的：運(yùn)用不同的分析鑒別方法研究市售金銀花樣品的增重物質(zhì)，總結(jié)中藥飲片增重物質(zhì)的鑒別方法。方法：采用性狀鑒別、顯微鑒別、理化鑒別并結(jié)合紅外光譜，逐層剖析金銀花樣品的增重物質(zhì)。結(jié)果：性狀鑒別該樣品質(zhì)硬、有粉性；顯微鑒別該物質(zhì)粉末含有不規(guī)則團(tuán)塊狀物質(zhì)；理化鑒別該物質(zhì)陰離子為硫酸根、陽(yáng)離子為鈣離子；紅外光譜顯示該物質(zhì)分別在3562cm-1、3387 cm-1、3337 cm-1、909 cm-1、868 cm-1、850 cm-1、634 cm-1、609 cm-1處有吸收峰。結(jié)論：市售金銀花樣品中所含物質(zhì)為硫酸鈣與蔗糖，在增重物質(zhì)的鑒別過(guò)程中應(yīng)將傳統(tǒng)鑒別方法與紅外光譜方法相結(jié)合。

金銀花；增重物質(zhì)；紅外光譜；鑒別

中藥材和中藥飲片是中藥生產(chǎn)、使用、經(jīng)營(yíng)的源頭，它的好壞、真假優(yōu)劣直接影響藥品質(zhì)量。目前存在染色增重、摻雜摻假等不法行為。常見(jiàn)中藥增重物質(zhì)有鈉鹽、鉀鹽、硫酸鹽等，其鑒別方法有理化鑒別，高效液相色譜法。隨著增重手段的不斷變化，不但增加分析鑒別的難度，同時(shí)耗費(fèi)大量的人力、物力。金銀花為忍冬科植物忍冬（Lonicera Japonica Thunb）的干燥花蕾或初開(kāi)的花，夏初花開(kāi)放前采收，干燥[1-2]。首載于梁代陶弘景的《名醫(yī)別錄》，為常用中藥品種之一[3]。本品味甘、性寒，歸肺、心、胃經(jīng)，具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱的功效，可用于治療癰腫疔瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、溫?zé)岚l(fā)病[4-5]，藥用歷史悠久，有“中藥中的抗生素”之稱[1]。現(xiàn)代藥理研究表明，金銀花具有抗病原微生物、抗炎、解熱、保肝、抗生育、止血、免疫調(diào)節(jié)、降血脂、中樞興奮等作用[6-7]。臨床上主要用于多種感染、各種炎癥、高熱癥、高脂血癥、腫瘤放療、化療口干癥等[8]。本文擬通過(guò)對(duì)比市售金銀花樣品增重物質(zhì)的不同鑒別方法，探索一條簡(jiǎn)單、易行、省時(shí)省力的路徑。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材 金銀花標(biāo)準(zhǔn)藥材（120907-201111）購(gòu)自天津市藥品檢驗(yàn)所，金銀花樣品購(gòu)自河北安國(guó)藥材市場(chǎng)。

1.1.2 儀器與試劑 傅立葉變換紅外光譜儀（Spectrum GX，Perkin-Elmer公司）；顯微鏡（Olympus BX51，日本Olympus公司）及配套攝相機(jī)（Olympus3X optical zoom，Olympus公司）；電熱恒溫干燥箱（天津市華北實(shí)驗(yàn)儀器有限公司制造）；電子天平（FA2104，上海菁海儀器有限公司）。KBr為光譜純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），水合氯醛試液、稀甘油試液、BaCl2試液均購(gòu)自天津市化學(xué)試劑供銷公司；NaOH試液，稀HCl試液，Na2CO3試液，氯化銨試液，磷酸氫二鈉試液，草酸銨試液，碘試液，氨試液，茚三酮試液均購(gòu)自天津化學(xué)試劑三廠。

1.2 方法

1.2.1 性狀鑒別方法 對(duì)金銀花標(biāo)準(zhǔn)品和市售金銀花樣品的形狀、大小、色澤、氣味和表面等特征進(jìn)行鑒別。

1.2.2 顯微鑒別方法 制作金銀花標(biāo)準(zhǔn)品和市售金銀花樣品粉末用水合氯醛裝片或制作水合氯醛透化片，置顯微鏡下觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)，將其鑒別特征記錄并描述，比較正偽品的差異性。

1.2.3 理化鑒別方法 水試：取金銀花飲片，加水?dāng)嚢?，觀察水的顏色。取金銀花正品和偽品各0.5 g于試管中，滴加蒸餾水4 mL，稀鹽酸6 mL，酒精燈加熱3～4 min，過(guò)濾。取濾液2 mL，加氯化鋇試液5～6滴，觀察顏色變化。

1.2.4 紅外光譜鑒別方法 取摻偽金銀花飲片及其標(biāo)準(zhǔn)品若干單位，研碎，取粉末樣品約3 mg與200 mg溴化鉀晶體混合研磨充分均勻，壓片，置于紅外光譜儀中進(jìn)行測(cè)試，得到樣品的紅外光圖譜，應(yīng)用PerkinElmer公司的Spectrum One軟件進(jìn)行分析；二階導(dǎo)數(shù)譜的獲得采用Savitzky-Golay方法，平滑點(diǎn)數(shù)為13點(diǎn)。

這種直接壓片的方法樣品處理簡(jiǎn)單，且不損失任何信息，而且可以同時(shí)與多個(gè)對(duì)照品的紅外光譜圖進(jìn)行比較分析。

通過(guò)對(duì)比金銀花偽劣飲片和其標(biāo)準(zhǔn)飲片的紅外光譜圖與二階導(dǎo)數(shù)紅外光譜圖，來(lái)鑒別金銀花的真?zhèn)巍?/p>

2 結(jié)果

2.1 性狀鑒別 （1）金銀花標(biāo)準(zhǔn)品：呈小棒狀，上粗下細(xì)略彎曲。表面黃白色或綠白色，密被短柔毛?；ㄝ嗉?xì)小，黃綠色，先端5裂，裂片邊緣有毛。開(kāi)放花朵筒狀，先端二唇形，雄蕊5，附于筒壁，黃色，雌蕊1，子房無(wú)毛。氣清香，味淡，微苦。（2）市售金銀花樣品：呈小棒狀，上粗下細(xì)略彎曲，表面綠白色，幾無(wú)柔毛，手感重，花萼細(xì)小，黃綠色，先端5裂，裂片邊緣有毛；表面有顆粒性粉狀物，揉之粉狀物脫落，無(wú)金銀花特有的清香氣聞之微酸，口嘗有甜味，并且有牙磣感?？梢?jiàn)市售金銀花的性狀與金銀花相似，但其表面附著有增重物。

2.2 顯微鑒定 （1）金銀花標(biāo)準(zhǔn)品：粉末淺黃色。腺毛有兩種，一種頭部呈倒圓錐形，頂端平坦，側(cè)面觀約10～33個(gè)細(xì)胞，排成2～4層，直徑40～108 μm，有的細(xì)胞含淡黃色物，柄部2～5個(gè)細(xì)胞，長(zhǎng)70～700 μm；另一種頭部類圓形或略扁圓形，側(cè)面觀4～20個(gè)細(xì)胞，直徑24～80 μm，腺柄2～4個(gè)細(xì)胞，長(zhǎng)24～80 μm。非腺毛為單細(xì)胞，有兩種，一種長(zhǎng)而彎曲，壁薄，有微細(xì)疣狀突起；另一種非腺毛較短，壁稍厚，具壁疣，有的具單或雙螺紋?；ǚ哿１姸?，黃色球形，直徑60～70 μm，外壁具細(xì)刺狀突起，萌發(fā)孔3個(gè)。柱頭頂端表皮細(xì)胞呈絨毛狀。薄壁細(xì)胞中含細(xì)小草酸鈣簇晶，直徑6～45 μm。（2）市售金銀花樣品：粉末較正品偏白，顯微鏡下可見(jiàn)與金銀花標(biāo)準(zhǔn)品的細(xì)胞種類及大小一致的腺毛、非腺毛及花粉粒等，但該樣品顯微鏡下還可見(jiàn)大量形狀不規(guī)則的團(tuán)塊狀物質(zhì)，其直徑為7～75 μm?？梢?jiàn)市售金銀花樣品為摻有不明物質(zhì)的金銀花。

2.3 理化鑒定 （1）水試：取少量藥材，加水?dāng)嚢瑁方疸y花溶液澄清透明，偽品金銀花溶液有不容物，溶液乳白色，見(jiàn)圖1。（2）取金銀花正品和偽品各0.5 g于試管中，滴加蒸餾水4 mL，稀鹽酸6 mL，酒精燈加熱3～4 min，過(guò)濾。取濾液2 mL，加氯化鋇試液5～6滴，正品與偽品溶液產(chǎn)生白色渾濁；分離，沉淀在鹽酸或硝酸中不溶解。另取濾液2 mL，加草酸銨試液5～6滴，正品無(wú)明顯現(xiàn)象，偽品溶液產(chǎn)生白色渾濁，濾過(guò)，沉淀不溶于鹽酸。如圖2所示，a、c為淡黃色、澄明溶液；b為黃白色渾濁溶液，且該沉淀在鹽酸中不溶解。如圖3所示，A為淡黃白色渾濁液。B、C為乳白色渾濁液，其渾濁程度均強(qiáng)于A。說(shuō)明加入氯化鋇、草酸銨試液后偽品濾液均有沉淀生成，且加入氯化鋇生成的沉淀不溶于鹽酸，證明溶液中含硫酸根離子；加入草酸鈣試液生成的白色沉淀不溶于稀鹽酸，證明溶液中含鈣離子。

圖1 金銀花正品與偽品的水試圖

圖2 正品滴入氯化鋇、草酸銨的理化實(shí)驗(yàn)圖

偽品金銀花的摻偽方式是加入了硫酸鈣（石膏），用以增加金銀花的重量。

2.4 金銀花的紅外光譜鑒定 金銀花與金銀花增重紅外吸收光譜圖分別在3600～2800 cm-1、1100～800 cm-1、700～500 cm-1三個(gè)區(qū)間的峰型與峰的個(gè)數(shù)的差異較大，金銀花吸收峰的個(gè)數(shù)分別為2、1、2個(gè)，金銀花增重的吸收峰的個(gè)數(shù)分別為4、7、3個(gè)；其中3562 cm-1、3387 cm-1、3337 cm-1與蔗糖的O-H的伸縮振動(dòng)峰3562 cm-1、3390 cm-1、3338 cm-1相對(duì)應(yīng)；909 cm-1、868 cm-1、850 cm-1與蔗糖糖環(huán)的骨架振動(dòng)吸收909 cm-1、868 cm-1、849 cm-1相對(duì)應(yīng)；634 cm-1、609 cm-1與硫酸根離子中O-S-O鍵的伸縮振動(dòng)吸收峰638 cm-1、616 cm-1相對(duì)應(yīng)。見(jiàn)圖4。

圖3 樣品滴入氯化鋇、草酸銨的理化實(shí)驗(yàn)圖

金銀花增重藥材的紅外光譜在1200～800 cm-1范圍內(nèi)的吸收峰重疊在一起形成峰包，在二階導(dǎo)數(shù)紅外光譜上，重疊在一起的譜峰分解成若干個(gè)單峰。其中1171 cm-1、1116 cm-1、1104 cm-1、1069 cm-1、1052 cm-1、1037 cm-1、1014 cm-1、990 cm-1、942 cm-1、921 cm-1、909 cm-1與蔗糖的二階導(dǎo)數(shù)紅外譜圖的1171 cm-1、1116 cm-1、1104 cm-1、1070 cm-1、1053 cm-1、1038 cm-1、1014 cm-1、990 cm-1、942 cm-1、921 cm-1、909 cm-1的峰型和峰位相對(duì)應(yīng)，說(shuō)明金銀花增重中含有蔗糖。1127 cm-1、635 cm-1、610 cm-1說(shuō)明金銀花增重中含有硫酸根。見(jiàn)圖5。

3 討論

中藥材、中藥飲片增重問(wèn)題主要是由于藥材資源緊缺、以藥養(yǎng)醫(yī)、不法中藥商逐利心理嚴(yán)重等因素造成，嚴(yán)重侵害廣大人民群眾的用藥安全。金銀花增重的物質(zhì)有面粉、氯化鈉、白帆、糖、滑石粉、沙石、灰土、石英粉等[9]。常用的鑒別方法是，性狀鑒別、顯微鑒別、薄層色譜法、高效液相色譜法判斷金銀花的真?zhèn)?；理化鑒別多用于判斷增重物質(zhì)的成分。理化鑒別在判斷物質(zhì)成分時(shí)，通過(guò)陰離子、陽(yáng)離子的鑒別反應(yīng)，判斷無(wú)機(jī)物的成分，而通過(guò)顏色的變化、沉淀的生成和溶解、氣體的產(chǎn)生和氣味，判斷有機(jī)物的成分。為了確定增重物質(zhì)、防止遺漏，對(duì)已報(bào)道的市場(chǎng)上可能出現(xiàn)的增重物質(zhì)，需要逐一檢驗(yàn)，工作量大。另外，由于中藥化學(xué)成分的復(fù)雜性，鑒別時(shí)還需要對(duì)其進(jìn)行提取、分離、精制等過(guò)程，導(dǎo)致耗時(shí)長(zhǎng)，藥材損耗量大，各成分間相互干擾。因此，對(duì)中藥飲片建立起準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便且可以和國(guó)際接軌的鑒別方法，有效地控制中藥飲片的質(zhì)量，是中藥現(xiàn)代化的迫切需要，也是整個(gè)中藥質(zhì)量控制的必然環(huán)節(jié)。

圖4 金銀花正品與樣品的紅外吸收譜圖

圖5 金銀花正品與樣品的紅外二階導(dǎo)數(shù)吸收譜圖

隨著計(jì)算機(jī)技術(shù)和化學(xué)計(jì)量學(xué)的飛速發(fā)展，近紅外光譜技術(shù)在中藥鑒定領(lǐng)域得到了越來(lái)越廣泛的關(guān)注和應(yīng)用，不僅用于中藥品種、產(chǎn)地的鑒定，也應(yīng)用于加工炮制后的中藥飲片鑒定，同時(shí)還用于中藥的質(zhì)量評(píng)價(jià)[10]。紅外光譜是分子的振動(dòng)波譜，可歸結(jié)為化學(xué)鍵的振動(dòng)，而紅外光譜的吸收頻率則對(duì)應(yīng)一定的特征吸收頻率，可以利用紅外光譜來(lái)分析分子的結(jié)構(gòu)。利用中藥材紅外圖譜進(jìn)行直觀對(duì)比[11-12]和利用其特征進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析鑒別的方法均有報(bào)道[13-14]。通過(guò)樣品圖譜的比對(duì)，可以確定物質(zhì)的種類，方法簡(jiǎn)便，工作量??；但是無(wú)法確定無(wú)機(jī)的陰、陽(yáng)離子。近年來(lái)，紅外光譜分析法常用于中藥材的真?zhèn)舞b別[15]，但在增重物質(zhì)成分的鑒別中少見(jiàn)。在增重物質(zhì)的鑒別中，將理化鑒別法與紅外光譜法相結(jié)合，運(yùn)用紅外光譜法測(cè)定具有分子振動(dòng)的物質(zhì)，確定增重物質(zhì)的種類，縮小檢測(cè)范圍，再運(yùn)用理化鑒別法測(cè)定無(wú)分子振動(dòng)的物質(zhì)。

本實(shí)驗(yàn)檢出金銀花的增重物質(zhì)為硫酸鈣和蔗糖，傳統(tǒng)理化鑒別中需對(duì)陰離子、陽(yáng)離子分別檢出，離子的種類不同，方法各異；面對(duì)未知物，需將可能存在的離子逐一鑒別，致使實(shí)驗(yàn)內(nèi)容復(fù)雜；而紅外光譜技術(shù)，可以收集具有分子振動(dòng)的含氧的陰離子的吸收譜圖，如CO2-3、SO2-4、PO3-4、SiO2-3等；因此，在鑒定增重物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)將紅外光譜技術(shù)與理化鑒別相結(jié)合，先利用紅外光譜技術(shù)，確定有紅外吸收的酸根離子，縮小實(shí)驗(yàn)范圍，再通過(guò)理化實(shí)驗(yàn)鑒定無(wú)紅外吸收的陰離子以及陽(yáng)離子，從而簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，防止遺漏。

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（收稿：2016-12-28 修回：2017-06-07）

（責(zé)任編輯 劉洪斌）

Adulteration Identification from the Medicinal Slices of Lonicerae Japonicae Flos

KANG Qing-wei, YAN Shu,XIA Yafei,et al.
Department of Pharmacy,Tianjin Nankai Hospital,Tianjin(300100),China

Objective To identify the adulterated heavy substances from the commercial medicinal slices of Lonicerae Japonicae Flos sample employing different analytical methods and to summarize the identification methods of adulterated heavy substances in chinese herbal pieces. Methods The adulterated heavy substanc?es from the commercial medicinal slices of Lonicerae Japonicae Flos samples were identified by characteristic, microscopic,physical and chemical distinguishing methods combining with infrared spectroscopy technology. Results The sample quality was hard and powdery and the microscopic identification revealed that the pow?der contained irregular clumps of material.It was found that the anion is sulfate and cation is calcium ion through physical and chemical identification.The IR spectra showed that the material had absorption peaks in 3387 cm-1,3562 cm-1,909 cm-1,3337 cm-1,850 cm-1,868 cm-1,609 cm-1and 634 cm-1,respectively. Conclusions The adulterated heavy substances in the commercial medicinal slices of Lonicerae Japonicae Flos were calcium sulphate and sucrose,suggesting that traditional identification methods should be combined with infrared spectroscopy in the identification of adulterated heavy substances.

Lonicerae Japonicae Flos;weight material;infrared spectroscopy;identify

R284.1

：A

：1007-6948(2017)04-0381-05

10.3969/j.issn.1007-6948.2017.04.012

天津市中醫(yī)藥管理局中醫(yī)中西醫(yī)結(jié)合基金資助項(xiàng)目（13049）

天津市南開(kāi)醫(yī)院藥學(xué)部（天津 300100）

閻姝，E-mail:13389989966@163.com