熒光定性PCR法檢測(cè)HBV-DNA與ELISA法乙肝免疫學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性

李春芳

（河北省廊坊市中心血站，河北 廊坊 065000）

熒光定性PCR法檢測(cè)HBV-DNA與ELISA法乙肝免疫學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性

李春芳

（河北省廊坊市中心血站，河北 廊坊 065000）

目的 針對(duì)ELISA法乙肝免疫學(xué)指標(biāo)與熒光定性PCR法檢測(cè)HBV-DNA間相關(guān)性進(jìn)行分析。方法 以我站在2016年1月-2017年3月期間所檢測(cè)的168份HBsAg反應(yīng)性的獻(xiàn)血為觀(guān)察對(duì)象，均給予HBV-DNA以及ELISA法乙肝免疫學(xué)指標(biāo)檢測(cè)，針對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果 本組獻(xiàn)血者中50例在ELISE檢測(cè)中為大三陽(yáng)，其HBV-DNA陽(yáng)性率連同Ct值與小三陽(yáng)組存在有顯著差異，且HbeAg（+）患者檢測(cè)陽(yáng)性率以Ct值平同樣較HbeAg（-）高（P＜0.05），差異具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 乙肝免疫學(xué)檢測(cè)結(jié)果與HBV-DNA檢測(cè)情況存在有一定關(guān)聯(lián)，臨床可借此對(duì)乙肝患者進(jìn)行診斷。

ELISA法；乙肝免疫學(xué)指標(biāo)；HBV-DNA

0 引言

乙肝屬于危害性較大一種傳染病，在我國(guó)存在有極高的病發(fā)率，在一定程度上影響著居民健康。為實(shí)現(xiàn)對(duì)該癥病發(fā)率的有效控制，乙肝檢測(cè)工作就顯得格外重要。當(dāng)前，臨床主要依據(jù)乙肝免疫學(xué)指標(biāo)進(jìn)行篩查與診斷。就檢測(cè)方法而言，以ELISA法與熒光定性PCR法存在有極高的使用率[1]。本次我站就針對(duì)上述兩種檢測(cè)方式與乙肝免疫學(xué)指標(biāo)間的聯(lián)系情況進(jìn)行探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以我站在2016年1月-2017年3月期間所檢測(cè)的168份HBsAg反應(yīng)性的獻(xiàn)血樣本為觀(guān)察對(duì)象，均給予HBV-DNA以及ELISA法乙肝免疫學(xué)指標(biāo)檢測(cè)。本組患者中存在有男性100例，女性68例，年齡于15-55歲間，均值為（46.45±1.45）。所有患者HbsAg均表現(xiàn)為陽(yáng)性。結(jié)合檢測(cè)結(jié)果，將本組患者劃分為大三陽(yáng)組50例，小三陽(yáng)組30例，A組 [AbsAg（+）、HbcAg（+）]40例，B組 [AbsAg（+）、HbcAg（-）]20例，以及C組[AbsAg（+）、HbcAb（+）]28例。均接受ELISA法與熒光定性PCR法檢測(cè)。年齡、性別組成等方面對(duì)比，5組患者無(wú)顯著差異（P＞0.05）無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法

ELISA法檢測(cè)中所使用設(shè)備為全自動(dòng)酶免分析儀（深圳愛(ài)康公司生產(chǎn)，型號(hào)為AE280，校驗(yàn)周期為1年），檢測(cè)中所用試劑，一檢由廈門(mén)英科新創(chuàng)科技有限公司生產(chǎn)，弱陽(yáng)性質(zhì)控品濃度為0.5 IU/ ml，二檢試劑由北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，弱陽(yáng)性質(zhì)控品濃度為0.2 IU/ml。以上試劑為ELISA法進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)用試劑，采用兩個(gè)不同廠(chǎng)家的試劑進(jìn)行兩次檢測(cè)，兩次檢測(cè)均合格，此項(xiàng)結(jié)果合格，雙試劑反應(yīng)性直接判定為該項(xiàng)目不合格；單試劑反應(yīng)性時(shí)需進(jìn)行雙孔復(fù)試，任意一孔反應(yīng)性則判斷為不合格；不合格樣本直接淘汰，不再進(jìn)行NAT檢測(cè)，合格樣本進(jìn)行NAT檢測(cè)；NAT檢測(cè)采用定性實(shí)時(shí)熒光PCR法，采用8混模式，混檢陽(yáng)性，下一工作日進(jìn)行拆分檢測(cè)（單檢）。

熒光定性PCR法檢測(cè)中，所用設(shè)備為，科華核酸檢測(cè)系統(tǒng)：Hamiltion Star（樣本處理系統(tǒng)）+ABI 7500（擴(kuò)增儀）校驗(yàn)周期為半年。所用試劑由上?？迫A生物工程股份有限公司生產(chǎn)，質(zhì)控品濃度為HBV DNA200IU/ml、HCV RNA 2000IU/ ml、HIV RNA 2000 IU/ml。各項(xiàng)操作均嚴(yán)格按照流程進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次研究中各類(lèi)數(shù)據(jù)均按照SPSS19.0進(jìn)行處理，采用%對(duì)計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)表示，以χ2檢測(cè)，而計(jì)量數(shù)據(jù)則以表示，以t檢測(cè)，若（P＜0.05）則表明數(shù)據(jù)間存在有顯著差異，具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大三陽(yáng)與小三陽(yáng)組HBV-DNA對(duì)比

結(jié)合檢測(cè)可知，大三陽(yáng)組獻(xiàn)血組檢測(cè)陽(yáng)性率為94.00 %（47/50），而小三陽(yáng)組為53.33 %（16/30），且大三陽(yáng)組Ct值為（37.01±0.05），而小三陽(yáng)組為（32.14±0.25），兩項(xiàng)對(duì)比（P＜0.05）具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，如表1、2所示。

表1 兩組患者陽(yáng)性率對(duì)比[n(%)]

表2 兩組患者Ct值對(duì)比

表2 兩組患者Ct值對(duì)比

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2.2 其他組檢測(cè)陽(yáng)性率與HBV-DNA對(duì)比

結(jié)合檢測(cè)可知，A組、B組與C組檢測(cè)陽(yáng)性率與HBV-DNA對(duì)比存在有顯著差異（P＜0.05），差異具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，詳見(jiàn)下表3。

表3 A、B、C三組患者檢測(cè)情況對(duì)比

3 討論

乙型肝炎為世界所關(guān)注的病癥，存在有較強(qiáng)的傳染性，且病發(fā)率較高，將直接使得患者病發(fā)肝硬化以及肝癌等病癥的幾率增加。結(jié)合臨床實(shí)際可知，我國(guó)一直屬于乙肝高發(fā)國(guó)家，乙肝攜帶率高達(dá)10 %以上，在很大程度上威脅著居民健康。因此，采用高效、安全的方式對(duì)乙肝進(jìn)行檢測(cè)，幫助患者盡早確診，對(duì)于延緩病癥發(fā)展以及傳播率均有著重要意義[2]。

當(dāng)前，臨床用于乙肝的檢測(cè)方式較多，常見(jiàn)有化學(xué)發(fā)光法、實(shí)時(shí)熒光定性PCR法以及酶聯(lián)免疫法（ELISA）等。其中ELISA因存在有操作簡(jiǎn)單，出結(jié)果快以及成本較低、具備極高的靈敏度等優(yōu)勢(shì)迅速在臨床得到推廣。但該檢測(cè)方式僅僅能達(dá)到定性檢測(cè)的效果，能為HBV感染情況提供有效診斷，而無(wú)法實(shí)現(xiàn)對(duì)患者體內(nèi)病毒復(fù)制情況及時(shí)、動(dòng)態(tài)反應(yīng)的效果。而實(shí)時(shí)熒光定性PCR法，則能有效對(duì)HBV-DNA在患者體內(nèi)的復(fù)制情況加以測(cè)定，以了解乙肝病毒在患者體內(nèi)的復(fù)制情況，因其操作較為簡(jiǎn)單，在臨床存在有極高的使用率。而該檢測(cè)方式確無(wú)法對(duì)非復(fù)制狀態(tài)感染進(jìn)行檢測(cè)?；谏鲜鰞煞矫嬉蛩?，臨床將上述兩種方案聯(lián)合的方式運(yùn)用于乙肝患者的檢測(cè)中[3-4]。

結(jié)合本次研究可知，大三陽(yáng)獻(xiàn)血組在PCR檢測(cè)中存在有極高的準(zhǔn)確率，且Ct值較高，可見(jiàn)該類(lèi)患者體內(nèi)乙肝病毒極為活躍，存在有較強(qiáng)的傳染性。同時(shí)也能證明ABsAg（+）、HBcAg（+）等可準(zhǔn)確對(duì)乙肝病毒感染、傳染情況加以反應(yīng)。且通過(guò)將A、B、C組對(duì)比可知，HbeAg的在乙肝患者體內(nèi)存在和HBV-DNA存在有極強(qiáng)的聯(lián)系。早在凌利芬等[5]報(bào)道中已經(jīng)指出，臨床可以將HbeAg作為乙肝病毒在患者體內(nèi)進(jìn)行復(fù)制的主要依據(jù)，若該指標(biāo)轉(zhuǎn)為陰性，則表明患者HBV-DNA復(fù)制水平得到顯著下降，能為臨床治療工作以及病癥監(jiān)測(cè)提供有效指導(dǎo)。同時(shí)，上述三組患者對(duì)比也可以發(fā)現(xiàn)，若HbeAg表現(xiàn)為陽(yáng)性，則患者體內(nèi)乙肝病毒復(fù)制量減少，其傳染性也相對(duì)減弱。

結(jié)合上述研究可以發(fā)現(xiàn)，采用熒光定性PCR法與ELISA法對(duì)乙肝患者進(jìn)行檢測(cè)，能更加準(zhǔn)確的對(duì)患者體內(nèi)乙肝病毒復(fù)制情況進(jìn)行定性進(jìn)行表示，能有效克服上述兩種檢測(cè)方式在單獨(dú)使用中的局限性，能幫助乙肝患者盡早得到確診。

[1] 羅燕春,李勇,鄭惠蘭,等.熒光定量PCR檢測(cè)主要性病病原體的臨床應(yīng)用[J].海南醫(yī)學(xué),2006,17(9):148-149.

[2] 何昕,姜惠民,張艷,等.熒光定量pcr檢測(cè)高危型hpv的方法及其試劑盒:中國(guó),CN101886137A[P].2010.

[3] 劉揚(yáng),吳孟超,陳漢,等.巢式RT-PCR定性檢測(cè)肝癌、癌旁組織及正常肝組織內(nèi)AFPmRNA表達(dá)[J].中國(guó)腫瘤臨床,2000,27(9):695-696.

[4] 石伍華,王海清,許艾明,等.熒光定量PCR檢測(cè)HBV-DNA與ELISA方法測(cè)定乙肝五項(xiàng)指標(biāo)相關(guān)性分析[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2009,8(01):87-88.

[5] 凌利芬,陸學(xué)東,吳正林,等.乙肝病毒大蛋白與HBV-DNA相關(guān)性研究及在不同性別、年齡群體中的差異分析[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2008,23(04):30-32.

Correlation between HBV-DNA and Immunological Indexes of Hepatitis B by ELISA Method by Fluorescence Qualitative PCR

LI Chun-fang

(The Central Blood Station of Langfang, Langfang,Hebei, 065000, China)

Objective To analyze the correlation between ELISA immunology index and fluorescence qualitative PCR method for detecting HBV-DNA. Methods In our station detected during the period of January 2016 to March 2017 of 168 copies of the HBsAg reaction of blood as the object of observation, HBV-DNA and ELISA were given the detection method of hepatitis B immune indicators, according to the analysis of test results. Results This group of blood donors in 50 cases in ELISE detection for HBeAg positive rate of HBV-DNA, which together with small Sanyang group there were significant differences in the values of Ct and HbeAg (+) patients with the positive rate detected by Ct value of flat than HbeAg (-) is high (P＜0.05) , the difference has statistical significance. Conclusion The immunological test results of hepatitis B are related to the detection of HBV-DNA, which can be used to diagnose the hepatitis B patients.

ELISA method; Hepatitis B immunology index; HBV-DNA

10.19335/j.cnki.2096-1219.2017.08.58