春石斛蘭的組培快繁

郭英鐸+張秀珊+曾寶珰+洪生標(biāo)+鄭運(yùn)歡+黃茜莉+陳少玲

引言

以自育雜交后代春石斛蘭的側(cè)芽為材料，通過(guò)試驗(yàn)，篩選春石斛蘭最適培養(yǎng)基配方，研究其組培快繁技術(shù)，建立一套春石斛蘭組培快繁的技術(shù)體系，為春石斛蘭種苗生產(chǎn)奠定技術(shù)基礎(chǔ)，實(shí)現(xiàn)工廠化生產(chǎn)的目標(biāo)。結(jié)果表明：1/3 MS + 6-BA 5.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L，蔗糖20.0 g/L 、瓊脂6.0 g/L和椰汁100.0 ml/L，對(duì)于叢生芽的增殖效果較好。

石斛屬（Dendrobium）為蘭科（Orchidaceae）中的第二大屬，依開花時(shí)間不同，石斛蘭可分為秋石斛和春石斛，春石斛園藝品種主要由原產(chǎn)于我國(guó)西南和華南地區(qū)的金釵石斛（Dendrobium nobile Lindl）與亞熱帶原生種培育而成。春石斛蘭又名美花石斛，因春天開花而得名，多年生附生蘭科植物，與常見的秋石斛相比，具有株形緊湊、花多、色艷、有香味，是近年來(lái)比較受歡迎的盆栽花卉之一。春石斛最先由英國(guó)從中國(guó)引入歐洲栽培，并進(jìn)行品種改良。第二次世界大戰(zhàn)后，日本大力發(fā)展春石斛，與其他品種的石斛雜交，培育出許多園藝品種。汕頭市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所在多年引種、栽培和雜交育種探索的基礎(chǔ)上，不斷篩選和培育出適宜本地區(qū)推廣的優(yōu)良品種，并初步建立一套包括種苗擴(kuò)繁、種苗培育、花期調(diào)控及盆花生產(chǎn)的技術(shù)方法。在規(guī)?；a(chǎn)中，春石斛主要采用莖段扦插、高位芽切取、組織分生培養(yǎng)3種方法進(jìn)行繁殖，而組培分生培養(yǎng)與其它兩種方法相比，具有生長(zhǎng)整齊，長(zhǎng)勢(shì)旺盛，易于標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)等特點(diǎn)，利于最新育種成果的推廣應(yīng)用。本試驗(yàn)主要研究總結(jié)春石斛蘭雜交后代的組培快繁技術(shù)，為盆花春石斛蘭標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)提供技術(shù)保障，更好地加快我所選育良種的推廣應(yīng)用。

1 材料和方法

1.1 供試材料

試驗(yàn)在汕頭市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所的花卉育種與推廣研究室的組培中心進(jìn)行，供試材料是從雜交的春石斛蘭果莢播種后代篩選株型和花色適合當(dāng)?shù)厥袌?chǎng)推廣的優(yōu)良品系的莖段側(cè)芽或新芽莖尖為外植體。每年3～5月份為春石斛蘭新芽抽生旺季，此時(shí)切取新生側(cè)芽或莖尖，用自來(lái)水沖洗干凈，置于超凈工作臺(tái)上用75%酒精浸泡30秒，無(wú)菌水沖洗3次，再用0.I%Hg Cl2溶液消毒8分鐘，無(wú)菌水沖洗3次，繼續(xù)用0.I%Hg Cl2溶液消毒5分鐘，無(wú)菌水徹底沖洗5次，除去包葉接入1/3 MS + 6-BA 10.0 mg/L，蔗糖20.0 g/L 、瓊脂6.0 g/L和椰汁100.0 ml/L的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，將形成的不定芽，切割成1.5cm，帶2片葉的外植體作為試驗(yàn)材料。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

將無(wú)菌外植體接入培養(yǎng)基進(jìn)行為期60d的培養(yǎng)，60d后對(duì)不定芽的個(gè)數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，篩選出最適培養(yǎng)基配方，培養(yǎng)條件為溫度（26±2）℃，光照強(qiáng)度1300～1500lx，光照時(shí)間為10h/d。

1.2.2 不同BA濃度對(duì)組培苗的影響

以1/3 MS為基本培養(yǎng)基，加入蔗糖20.0 g/L 、瓊脂6.0 g/L和椰汁100.0 ml/L，然后分別加入6-BA 0 mg/L + NAA 0.1 mg/L，6-BA 3.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L，6-BA 5.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L，6-BA 7.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L和6-BA 9.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L形成5個(gè)不同激素濃度的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，pH調(diào)整為 5.8，以BA濃度為0 mg/L的培養(yǎng)基為對(duì)照。每個(gè)處理接種10瓶，每瓶接種一個(gè)無(wú)菌外植體。

1.2.3 壯苗和生根試驗(yàn)

借鑒蝴蝶蘭組培擴(kuò)繁技術(shù)，選取健壯的組培苗，從基部分開，接入用于蝴蝶蘭過(guò)度和生根的培養(yǎng)基花寶+蛋白胨+活性炭+香蕉泥+馬鈴薯泥+IBA 0.3mg/L+NAA 0.3mg/L對(duì)試驗(yàn)材料進(jìn)行培養(yǎng)，60d后統(tǒng)計(jì)生根數(shù)和生根率。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同BA濃度對(duì)組培苗的影響結(jié)果

由表1可知，細(xì)胞分裂素6-BA和生長(zhǎng)素類似物NAA的組合對(duì)春石斛蘭不定芽的繼代增殖有一定的效果，在NAA 0.1 mg/L濃度不變的情況下，隨著6-BA的濃度增加，增殖倍數(shù)先上升而后下降，在6-BA濃度為5.0 mg/L的時(shí)候增殖倍數(shù)最大，高于其它處理。

2.2 壯苗和生根結(jié)果

由表2統(tǒng)計(jì)可知春石斛蘭組培苗的生根率為80±5%，生根數(shù)2.1±0.5條。

3 結(jié)論與討論

汕頭市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所花卉育種與推廣研究室是以蝴蝶蘭的組織快繁和栽培為主要研究方向的部門，所以本試驗(yàn)是建立在蝴蝶蘭培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上進(jìn)行，其中的二次消毒也是在大量蝴蝶蘭花梗消毒效果總結(jié)下來(lái)的方法，能有效降低污染率和提高成活率。

試驗(yàn)結(jié)果表明1/3 MS、蔗糖20.0 g/L 、瓊脂6.0 g/L和椰汁100.0 ml/L，pH5.8在不同激素濃度配比的情況下是適合春石斛蘭的繼代增殖的。在本試驗(yàn)中，用5個(gè)不同濃度的6-BA與NAA 0.1 mg/L形成激素組合進(jìn)行培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)春石斛蘭的不定芽增殖倍數(shù)隨著6-BA濃度的升高呈先升后降的趨勢(shì)，不定芽的增值率高于其它濃度的處理，這個(gè)變化趨勢(shì)跟蝴蝶蘭進(jìn)行組織培養(yǎng)相似，隨著6-BA濃度的升高出現(xiàn)增殖倍數(shù)先升后降的結(jié)果，不同的是，春石斛蘭增殖的激素濃度相對(duì)較低，在6-BA濃度為5.0 mg/L時(shí)增殖倍數(shù)最高，然后出現(xiàn)下降趨勢(shì)，而蝴蝶蘭增殖所需激素濃度相對(duì)較高，在本試驗(yàn)中，6-BA濃度為7.0 mg/L或者更高時(shí)，春石斛蘭的增殖倍數(shù)已出現(xiàn)下降趨勢(shì)，而蝴蝶蘭增殖倍數(shù)仍比低濃度的要高，呈上升趨勢(shì)。因此，通過(guò)本試驗(yàn)，我們篩選6-BA濃度為5.0 mg/L對(duì)應(yīng)的配方為春石斛蘭最佳配方。

春石斛蘭在經(jīng)過(guò)幾次繼代培養(yǎng)達(dá)到一定數(shù)量后就要進(jìn)行壯苗和生根處理，因?yàn)樵鲋澈蟮慕M培苗生長(zhǎng)不均勻，苗況不齊，一些苗況較差的組培苗移栽后很容易死亡，所以要進(jìn)行壯苗和生根。添加香蕉泥對(duì)石斛蘭的壯苗和生根有明顯促進(jìn)作用，而加入活性炭能有效防止組培苗褐化，根系更粗壯，葉色濃綠，并促進(jìn)組培苗鮮重的增加。春石斛蘭組培苗使用蝴蝶蘭的過(guò)度和生根培養(yǎng)基也能取得較好的效果，所以本試驗(yàn)沒(méi)有進(jìn)一步研究。根據(jù)本所在春石斛蘭栽培方面的研究，得出組培苗出瓶移栽最好是每年10月到清明節(jié)之前，這時(shí)對(duì)經(jīng)過(guò)壯苗和生根的組培苗進(jìn)行出瓶移栽的存活率是比較高的。

作者簡(jiǎn)介：郭英鐸（1984-），男，漢族，汕頭，助理農(nóng)藝師，大學(xué)本科，園藝。

*通訊作者：張秀珊（1972-），女，漢族，梅州，高級(jí)農(nóng)藝師，大學(xué)本科，園藝。

作者單位：廣東省汕頭市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所endprint