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      闌尾周圍膿腫中檢出未分類新型鏈球菌1例

      2017-08-17 10:04:14楊銳屈平華陳東科
      臨床檢驗雜志 2017年7期
      關(guān)鍵詞:檢驗科鏈球菌革蘭

      楊銳,屈平華,陳東科

      (1.張掖市甘州區(qū)人民醫(yī)院檢驗科,甘肅張掖 734000;2.廣東省中醫(yī)院/廣州中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院檢驗醫(yī)學部,廣州 510006;3.北京醫(yī)院檢驗科,北京 100730)

      ·案例分析·

      闌尾周圍膿腫中檢出未分類新型鏈球菌1例

      楊銳1,屈平華2,陳東科3

      (1.張掖市甘州區(qū)人民醫(yī)院檢驗科,甘肅張掖 734000;2.廣東省中醫(yī)院/廣州中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院檢驗醫(yī)學部,廣州 510006;3.北京醫(yī)院檢驗科,北京 100730)

      闌尾;膿腫;新型鏈球菌

      隨著16S rRNA基因序列分析為代表的分子生物學技術(shù)在細菌分類鑒定中的廣泛應用,鏈球菌(Streptococcus)的菌群劃分發(fā)生了很大變化。原先一些鏈球菌群先后被劃分出,獨立成屬,如腸球菌屬、孿生球菌屬、乳球菌屬、乏養(yǎng)球菌屬、顆粒鏈菌屬等;同時,一些新的菌種不斷被分離、命名和補充增加,成為鏈球菌屬的新成員[1],如中華鏈球菌(S.sinesis)[2]、香港鏈球菌(S.hongkongensis)[3]。我們于2013年3月自1例急性化膿性闌尾炎患者闌尾周圍膿腫中分離出1株鏈球菌,經(jīng)16S rRNA基因測序,初步鑒定為一未分類的新型鏈球菌,報道如下。

      1 病歷摘要

      患者,男,50歲。2013年2月因右下腹疼痛,伴惡心、嘔吐數(shù)次,當?shù)蒯t(yī)院診斷為闌尾炎,輸液治療后疼痛緩解(具體藥物不詳)。2013年3月4日,右下腹疼痛再次發(fā)作,且逐漸加重,伴惡心,無嘔吐,以“慢性闌尾炎急性發(fā)作”收入本院?;颊哂新宰枞苑尾?、肺結(jié)核、肺大泡、胸膜炎、冠心病等基礎(chǔ)疾病。入院查體:體溫38.6 ℃,脈搏72次/分鐘,呼吸20次/分鐘,血壓120/80 mmHg;腹部平坦,未見腹壁靜脈曲張,未見腸型及蠕動波,腹軟,右下腹壓痛明顯,反跳痛存在,無肌緊張,未扣及包快,肝脾肋下未觸及,Murphy征陰性;肝腎區(qū)扣擊痛陰性,移動性濁音陰性,腸鳴音正常,結(jié)腸充氣試驗陰性,腰大肌試驗陰性,閉孔內(nèi)肌試驗陰性。血液常規(guī)檢查:WBC 7.5×109/L,N 77.8%,L 12.8%,M 9.4%。腹部超聲檢查提示:右下腹混合性包塊。急診在硬膜外麻醉下行闌尾切除術(shù),術(shù)中見闌尾發(fā)黑,壞疽,周圍形成膿腫,抽吸膿液做細菌培養(yǎng),檢出大腸埃希菌和鏈球菌各1株。術(shù)后給予頭孢吡肟抗感染治療,并止血、補液對癥治療,7 d后患者切口愈合良好出院。

      2 細菌培養(yǎng)鑒定

      無菌抽取膿汁接種哥倫比亞血瓊脂平板(英國Oxoid公司)和麥康凱平板(英國Oxoid公司),其中哥倫比亞血瓊脂平板放入CO2產(chǎn)氣袋(法國生物梅里埃公司)中,35 ℃培養(yǎng)24 h后觀察到2種菌落:一種為濕潤、扁平、灰白色的直徑約2 mm的大菌落,涂片革蘭染色(珠海貝索公司)鏡檢為革蘭陰性桿菌;另一種為圓形突起、邊緣整齊、半透明、濕潤、易乳化、β溶血、菌落直徑約0.5 mm的小菌落,涂片革蘭染色為革蘭陽性球菌,呈成雙或成短鏈排列。麥康凱平板上則僅生長一種菌落,其發(fā)酵乳糖,呈桃紅色,菌落直徑和形態(tài)與哥倫比亞血瓊脂平板上生長的陰性桿菌一致。革蘭陰性桿菌經(jīng)法國生物梅里埃公司ID 32E試條鑒定為大腸埃希菌,生物編碼為54465743420,鑒定百分率99.9%,T值為0.93。革蘭陽性球菌觸酶試驗陰性、吡咯烷酮芳基酰胺酶(PYR)試驗陽性、CAMP試驗陰性、精氨酸水解試驗陽性、V-P試驗陽性、6.5%NaCl肉湯生長、桿菌肽耐藥、復方磺胺甲噁唑敏感。采用法國生物梅里埃公司Lancefield血清F群凝集,Rapid ID 32 Strep條鑒定為豕鏈球菌,生物編碼3732305110,鑒定百分率為99.9%,T值為0.7。在硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基(杭州天和公司)中呈顆粒狀沉淀生長,上層澄清。采用16S rRNA基因通用引物,27f:5′-AGAGTTTGATYMTGGCTCAG-3′和1492r:5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′進行PCR擴增[4]。PCR產(chǎn)物送上海英駿廣州分公司進行測序,獲得>1 400 bp的有效序列(部分峰圖見圖1)。測序序列在EzBioCloud(http://www.ezbiocloud.net/ eztaxon/)進行比對,結(jié)果顯示該菌與假豕鏈球菌、香港鏈球菌和豕鏈球菌的相似度較高,分別為98.0%、97.5%和97.3%。按Stackebrandt等[5]2006年修訂的16S rRNA基因低于99.2%的新分類單元標準,初步鑒定為一未分類的新菌種。

      圖1 16S rRNA部分測序結(jié)果

      3 討論

      鏈球菌屬內(nèi)種別多、分類方法多,種間鑒別較復雜,傳統(tǒng)的鑒定方法技術(shù)復雜,影響因素多,商品化鑒定系統(tǒng)和儀器有時難以將菌種準確區(qū)分鑒定,尤其一些不常見和新型菌株,僅依靠形態(tài)學和生化反應等表型特征難以準確識別和鑒定。以16S rRNA基因測序技術(shù)為代表的分子鑒定方法是傳統(tǒng)表型鑒定方案之外的常用替代方案,特別是在臨床不常見菌、苛養(yǎng)菌和新發(fā)現(xiàn)的細菌鑒定中[6]。16S rRNA基因測序鑒定是在細菌進化和親緣關(guān)系基礎(chǔ)上對已有菌種進行的一種序列相似性分析,其相對于傳統(tǒng)表型分析方法而言更具客觀性和準確性。目前,針對臨床細菌和真菌的基因測序鑒定,美國臨床實驗室和標準化協(xié)會(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)已制定了相應的指南文件[7]。隨著國內(nèi)16S rRNA基因測序技術(shù)的迅速開展和普及,國內(nèi)臨床微生物室人員亦應認真對待少見的觸酶陰性革蘭陽性球菌,并結(jié)合16S rRNA基因測序技術(shù)做出正確的分類鑒定。

      [1]陳東科, 孫長貴. 實用臨床微生物學檢驗圖譜[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2011: 194-208.

      [2]Woo PC, Tam DM, Leung KW,etal.Streptococcussinensissp. nov., a novel species isolated from a patient with infective endocarditis[J]. J Clin Microbiol, 2002, 40(3): 805-810.

      [3]Lau SK, Curreem SO, Lin CC,etal.Streptococcushongkongensissp. nov.isolated from a patient with an infected puncture wound and from a marine flatfish[J]. Int J Syst Evol Microbiol, 2013, 63(Pt 7): 2570-2576.

      [4]屈平華, 趙紅波, 黃彬, 等. 衛(wèi)生部微生物室間質(zhì)評1012菌的鑒定與放線菌屬的系統(tǒng)發(fā)生分析[J].中華檢驗醫(yī)學雜志, 2011, 34(9): 814-819.

      [5]Stackebrandt E, Ebers J. Taxonomic parameters revisited: tarnished gold standards[J]. Microbiol Tod, 2006, 33(4): 152-155.

      [6]陳茶, 屈平華, 顧全, 等. 基于細菌16S rRNA 基因的PCR 擴增與測序分析在臨床不常見菌鑒定中的應用[J]. 中華檢驗醫(yī)學雜志, 2012, 35(7): 612-619.

      [7]Clinical and Laboratory Standards Institute. Interpretive criteria for identification of bacteria and fungi by DNA target sequencing. CLSI document MM18-A[S]. Wayne, PA: CLSI, 2008.

      (本文編輯:周萬青,劉群)

      10.13602/j.cnki.jcls.2017.07.21

      楊銳,1972年生,男,副主任技師,大學本科,主要從事臨床微生物檢驗工作。

      R446.5

      B

      2017-03-17)

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