Veriflow DNA簽名捕獲技術(shù)：創(chuàng)新性的食品致病菌、腐敗菌快速檢測(cè)方法

隨著食品加工業(yè)的飛速發(fā)展，國(guó)內(nèi)外因致病菌、腐敗菌引起的食品安全和質(zhì)量問題層出不窮，食品安全問題不斷挑戰(zhàn)著政府和百姓的底線，各個(gè)國(guó)家都將食源性病原微生物的檢測(cè)作為國(guó)家食品安全的焦點(diǎn)問題。新的法規(guī)、更嚴(yán)厲的懲罰、對(duì)品牌帶來風(fēng)險(xiǎn)的召回等都對(duì)食品生產(chǎn)者施加了巨大的壓力，同時(shí)也給監(jiān)管人員和檢驗(yàn)人員帶來了挑戰(zhàn)。所以市場(chǎng)環(huán)境需要食品安全、質(zhì)量監(jiān)控流程和模式作出轉(zhuǎn)變。

食源性病原體診斷與檢測(cè)技術(shù)的研發(fā)和應(yīng)用已成為預(yù)防和減少食源性疾病傳播的關(guān)鍵，因此對(duì)食品中復(fù)雜的混合微生物種屬進(jìn)行及時(shí)監(jiān)測(cè)和鑒定越發(fā)重要。但是傳統(tǒng)的檢測(cè)方法，如革蘭氏染色、菌落培養(yǎng)形態(tài)、生理生化特性等都是基于微生物及其生長(zhǎng)代謝所表現(xiàn)的性狀來識(shí)別微生物，通常需要復(fù)雜的樣品前處理、多步增菌等步驟，這些步驟耗時(shí)長(zhǎng)，受環(huán)境和微生物活性影響大，結(jié)果不可靠、不準(zhǔn)確。而以PCR技術(shù)為主的分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)雖然具有快速、敏感和特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，但是仍然存在高成本、潛在的設(shè)備交叉污染、高假陽性率、操作繁瑣等問題。以上這些制約因素可能導(dǎo)致一系列重大問題，如生產(chǎn)效率低下、庫存積壓、將有風(fēng)險(xiǎn)的產(chǎn)品放貨、損失品牌價(jià)值等。

上海美凱純生物科技有限公司引進(jìn)了美國(guó)Veriflow DNA簽名捕獲技術(shù)，其致病菌和腐敗菌檢測(cè)系統(tǒng)（圖1所示）在各種PCR檢測(cè)技術(shù)中脫穎而出、獨(dú)樹一幟，是具有開創(chuàng)性的分子檢測(cè)技術(shù)。這一強(qiáng)大的平臺(tái)即使在最具有挑戰(zhàn)性的樣品基質(zhì)中也能憑借簡(jiǎn)單的樣品準(zhǔn)備實(shí)現(xiàn)最高水平的檢測(cè)精確性。

Veriflow專利的DNA簽名捕獲技術(shù)能將實(shí)時(shí)PCR測(cè)試的靈敏度和基于垂直層析的診斷測(cè)試技術(shù)的易用性結(jié)合，使之能夠從復(fù)雜的樣品基質(zhì)和環(huán)境中快速檢測(cè)目標(biāo)分析物的DNA，這項(xiàng)專利被美國(guó)第三方檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室執(zhí)行經(jīng)理評(píng)價(jià)為“分子診斷領(lǐng)域十年來的第一項(xiàng)突破性新技術(shù)”。Veriflow分子層析檢測(cè)具有靈敏度高和簡(jiǎn)便易用的特點(diǎn)，通過簡(jiǎn)化樣本準(zhǔn)備流程、縮短檢測(cè)時(shí)間和直觀的結(jié)果判斷，為用戶提供了各種致病菌、飲料生產(chǎn)和釀酒過程中產(chǎn)生的腐敗菌檢測(cè)的新路徑。

高性價(jià)比的Veriflow檢測(cè)系統(tǒng)的組成

Veriflow致病菌和腐敗菌檢測(cè)系統(tǒng)由三部分組成：支持快速反應(yīng)、可等溫亦可變溫?cái)U(kuò)增的小型、客戶化的96孔PCR儀、Veriflow全套獨(dú)立分裝試劑盒（包括預(yù)處理試劑、PCR試劑管和掌上型的層析卡盒）和Veriflow多光源定量讀數(shù)儀（僅定量檢測(cè)時(shí)選配）。

簡(jiǎn)便易用的系統(tǒng)，可現(xiàn)場(chǎng)測(cè)試并獲得穩(wěn)定準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果

DNA簽名具有物種特性，且物種越近，簽名越相似。同時(shí)，簽名有局部相似性，物種在某方面也具有相似性，即簽名可以表征物種的分類和進(jìn)化關(guān)系。因此，基于PCR檢測(cè)技術(shù)的Veriflow DNA簽名捕獲技術(shù)因其獨(dú)特的專利試劑不需要純化樣品和提取DNA，也不需要進(jìn)行離心操作就能檢測(cè)目標(biāo)微生物，具有高特異性和靈敏度的優(yōu)勢(shì)，可用于各種食品和環(huán)境樣品中致病菌的定性或定量檢測(cè)。對(duì)于限量為25g不得檢出的致病菌一步增菌即可定性；對(duì)高污染樣品無需增菌即可進(jìn)行初始菌含量的定量檢測(cè)。

Veriflow系統(tǒng)僅需簡(jiǎn)單的樣品制備和極簡(jiǎn)的手工操作，就可以使原本需要2～3天完成的致病菌、腐敗菌檢測(cè)工作縮短至3～24小時(shí)內(nèi)完成，并在縮短檢測(cè)時(shí)間的同時(shí)保證準(zhǔn)確率，為用戶節(jié)約了大量實(shí)驗(yàn)和培訓(xùn)的時(shí)間和費(fèi)用。

Veriflow分子層析檢測(cè)套裝是美國(guó)IS（隱形哨兵）公司專利性、革新性的設(shè)計(jì)，無需用戶自配PCR反應(yīng)體系，并對(duì)抑制劑有抵抗作用，消除了敏感性酶對(duì)樣品凈化的需要，而且擴(kuò)增不受樣品本身自帶的環(huán)境抑制劑的影響。

Veriflow檢測(cè)系統(tǒng)不需要進(jìn)行以凝膠電泳或熒光定量檢測(cè)為基礎(chǔ)的靶擴(kuò)增，也無需進(jìn)行復(fù)雜的數(shù)據(jù)分析。掌上型分子層析卡是首個(gè)基于垂直流的分子生物學(xué)技術(shù)，采用DNA簽名捕獲技術(shù)，確保高特異性；垂直流的設(shè)計(jì)，使無損DNA流經(jīng)毛細(xì)管并成功到達(dá)檢測(cè)線，使檢測(cè)具有更高靈敏度和更低檢測(cè)限；消除樣液回流造成的假陽性，結(jié)果準(zhǔn)確可靠；只需要3分鐘，檢測(cè)結(jié)果便一目了然：一條線表示陰性，兩條線表示陽性（圖3所示），無需使用有內(nèi)在缺陷的光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)，無須清除樣品來避免其對(duì)光學(xué)傳感器的干擾。

AOAC認(rèn)證和中檢報(bào)告證實(shí)Veriflow更高準(zhǔn)確度，更高特異性和更低檢測(cè)限

Veriflow系統(tǒng)對(duì)多達(dá)70多種食品的基質(zhì)、環(huán)境采樣和各項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目包括沙門氏菌屬、單核增生李斯特菌、彎曲桿菌屬和大腸桿菌O157：H7、產(chǎn)志和氏毒素大腸桿菌、李斯特菌屬等測(cè)試都進(jìn)行了大量不同菌株的驗(yàn)證，并獲得了美國(guó)公職分析化學(xué)家協(xié)會(huì)AOAC的認(rèn)證，證實(shí)了Veriflow具有100%的包容性、100%的排他性（表1所示）。

在AOAC的包容性和排他性實(shí)驗(yàn)中，也驗(yàn)證了其具有更高的特異性和更低的檢測(cè)限（表2所示）。例如，在沙門氏菌屬的排他性實(shí)驗(yàn)中，準(zhǔn)確地排除了枸櫞酸桿菌和陰溝腸桿菌這兩種在沙門氏菌常規(guī)檢測(cè)中難以區(qū)分的菌。

Veriflow獲得中國(guó)檢科院綜合檢測(cè)中心（以下簡(jiǎn)稱“中檢”）全面證實(shí)的致病菌快速檢測(cè)系統(tǒng)。中檢對(duì)豬肉、雞肉和牛肉、雞蛋、牛奶、沙拉等多種食品基質(zhì)中的沙門氏菌屬、彎曲菌屬、單核細(xì)胞增生李斯特菌屬和大腸埃希氏菌O157：H7進(jìn)行了自然樣本、添加干擾菌的樣本和添加目標(biāo)菌的樣本進(jìn)行了檢測(cè)和評(píng)估，證實(shí)這些檢測(cè)項(xiàng)目在不同樣本基質(zhì)中的準(zhǔn)確度，特異性和靈敏度都達(dá)到了100%（表3所示）。

Veriflow系統(tǒng)的用途和應(yīng)用

Veriflow這一創(chuàng)新性的食源性致病菌檢測(cè)系統(tǒng)是建立在具有顛覆性意義的新技術(shù)基礎(chǔ)上，即將經(jīng)過證實(shí)的微生物檢驗(yàn)診斷原則和一流的創(chuàng)新科學(xué)方法相結(jié)合，可以進(jìn)行沙門氏菌、單核增生李斯特菌、李斯特菌屬、彎曲桿菌、大腸桿菌菌O157：H7、產(chǎn)志賀氏毒素大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌和副溶血弧菌等多種食源性致病菌的檢測(cè)，也可以進(jìn)行脂環(huán)酸芽孢桿菌定量，乳酸菌、小球菌、布魯塞爾酒香酵母菌、德克拉酒香酵母菌的快速定量檢測(cè)，廣泛適用于食品、飲料、保健品、釀酒和化工業(yè)的原材料、中間產(chǎn)品、生產(chǎn)過程中的關(guān)鍵控制點(diǎn)和終產(chǎn)品的快速檢測(cè)，并已被食品生產(chǎn)企業(yè)、全球第三方檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室和全球各地的優(yōu)質(zhì)酒莊和啤酒廠廣泛采用。

Veriflow系統(tǒng)帶來了一種新型、超靈敏和用戶友好的診斷測(cè)試方法，為政府監(jiān)督部門和企業(yè)提供了一種全新的、有效保障食品安全的檢測(cè)工具。