肝龍膠囊聯(lián)合水飛薊賓膠囊在體外對大鼠肝星狀細(xì)胞增殖活性的影響研究*

楊強(qiáng)麗，李輝，賴泳

（大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院藥理學(xué)教研室，云南 大理 671000）

肝龍膠囊聯(lián)合水飛薊賓膠囊在體外對大鼠肝星狀細(xì)胞增殖活性的影響研究*

楊強(qiáng)麗，李輝，賴泳

（大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院藥理學(xué)教研室，云南 大理 671000）

目的研究臨床常用抗肝纖維化藥物水飛薊賓膠囊單用及聯(lián)合肝龍膠囊對大鼠肝星狀細(xì)胞（HSC）增殖活性的影響，評價肝龍膠囊在體外對水飛薊賓抗肝纖維化作用的影響。方法采用2因素5水平完全實(shí)驗，單獨(dú)或聯(lián)合使用不同劑量水飛薊賓膠囊和肝龍膠囊在不同時間作用于HSC，并用MTT比色法測定HSC增殖影響。結(jié)果水飛薊賓膠囊與肝龍膠囊合用增強(qiáng)水飛薊賓膠囊對HSC的抑制作用，尤其是0.063、0.125和0.250 mg/ml濃度的水飛薊賓膠囊與不同濃度肝龍膠囊合用后，水飛薊賓膠囊的作用明顯增加，與單用水飛薊賓膠囊組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（<0.05）。水飛薊賓膠囊聯(lián)合不同濃度肝龍膠囊的IC50值與單用水飛薊賓膠囊的IC50值相比較，在24、48和72 h時均有降低，且水飛薊賓膠囊與不同濃度肝龍膠囊聯(lián)合后，其合用指數(shù)CI<1.0，呈現(xiàn)出協(xié)同作用，增強(qiáng)了水飛薊賓膠囊對HSC細(xì)胞的抑制作用。結(jié)論肝龍膠囊在體外能增強(qiáng)水飛薊賓膠囊的抗肝纖維化作用。

肝星狀細(xì)胞；水飛薊賓膠囊；肝龍膠囊；細(xì)胞活性

肝纖維化（hepatic fibrosis，HF）是一種慢性損傷的反應(yīng)，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的積累，最終可導(dǎo)致肝硬化和肝癌，嚴(yán)重威脅著肝慢性疾病患者的健康和生活，但目前沒有有效的藥物或治療方法。肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cell，HSC）是正常肝臟引起肝纖維化的中心環(huán)節(jié)，HSC被激活后可轉(zhuǎn)化成肌纖維母細(xì)胞，誘發(fā)促纖維化細(xì)胞因子的分泌，膠原合成增加[1-2]。肝纖維化與肝硬化不同的是，肝纖維化為可逆性病變，因此，抑制肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展，對預(yù)防和治療慢性肝病和肝硬化具有重要意義。

水飛薊素是從菊科草本植物水飛薊果實(shí)提取的活性成分，主要治療肝膽系統(tǒng)疾病。水飛薊素包括水飛薊寧、異水飛薊賓及水飛薊賓等，其中，水飛薊賓的保肝活性最強(qiáng)，量也最高。水飛薊賓膠囊應(yīng)用廣泛，療效確切，臨床上主要用于治療急慢性肝炎和肝纖維化。根據(jù)以往的研究，水飛薊賓膠囊具有抗纖維化、抗炎、免疫調(diào)節(jié)促進(jìn)蛋白合成、抗氧化、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、細(xì)胞再生及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等作用。在膽管結(jié)扎的肝纖維化模型中發(fā)現(xiàn)，水飛薊賓膠囊可降低35%的總膠原蛋白量，抑制肝臟TIMp1、TGF-β1及I型膠原的mRNA表達(dá)水平[3-4]。水飛薊賓膠囊能改善大鼠酒精性肝組織損傷[5]，減輕肝纖維化。美洲大蠊（periplaneta mericana），為昆蟲綱有翅亞綱蜚蠊目蜚蠊科大蠊屬昆蟲。在民間，人們用蟑螂來治療肝炎或肝硬化等疾病者[6]。藥理作用主要包括抗病毒作用、組織修復(fù)作用、消炎等。肝龍膠囊作為肝細(xì)胞膜穩(wěn)定劑，主要用于抗肝炎的中藥新藥[7]，具有療效較好、給藥方便、無不良反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)。肝龍膠囊對大鼠慢性酒精性肝損傷也有顯著的防治作用[8]。肝龍膠囊可保護(hù)CCl4所致的小鼠肝損傷，此外肝龍膠囊有顯著的抗乙型肝炎作用并對各種刺激因素導(dǎo)致的肝損傷具有修復(fù)作用[9]。有研究表明[10]，美洲大蠊提取物對大鼠HSC有抑制作用。但肝龍膠囊單獨(dú)用藥治療肝纖維化的臨床效果不理想，聯(lián)合用藥可能會有較好的治療效果，且肝龍膠囊與水飛薊賓膠囊聯(lián)合使用作用于HSC進(jìn)行體外抗肝纖維化的研究并未見報道。因此，本研究選用大鼠HSC，給予肝龍膠囊和水飛薊賓膠囊聯(lián)合處理，觀察藥物對細(xì)胞增殖抑制作用，來探討肝龍膠囊在體外對水飛薊賓膠囊抗肝纖維化的影響。本文采用MTT法檢測肝龍膠囊與水飛薊賓膠囊聯(lián)合對大鼠HSC細(xì)胞的體外增殖抑制作用，為尋找治療肝纖維化的藥物提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

細(xì)胞株：大鼠肝星狀細(xì)胞（HSCT6）購自中國科學(xué)院昆明細(xì)胞庫（No：KCB200703YJ）。試劑：DMEM培養(yǎng)基粉末（美國Gibco公司Lot：1710802），Hepes（北京索萊寶公司），碳酸氫鈉（分析純，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司），胎牛血清（FBS，美國Gibco公司Lot：1618862），噻唑藍(lán)（MTT，北京索萊寶公司Lot：1028D056）。藥品：水飛薊賓膠囊（天津天士力圣特制藥有限公司，批號：16041601）；肝龍膠囊（昆明賽諾制藥有限公司，批號：550706087）。

1.2 儀器與設(shè)備

Thermo Scientific Series二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱（美國Thermo公司），CKX41型倒置顯微鏡（日本Olympus公司），Synergy HT多功能酶標(biāo)儀（美國BIO Tek公司），80-2型臺式點(diǎn)的離心機(jī)（江蘇省金壇市科析儀器有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 MTT的配制（5 mg/ml）精密稱取500 mg MTT粉，將其溶于100 ml滅菌水中，超聲30 min，待MTT粉完全溶解后，避光，-20℃冰箱內(nèi)保存。DMEM培養(yǎng)基的配制[1%青鏈霉素抗生素（10 000 IU/ml的青霉素，10 000μg/ml的鏈霉素）+10%胎牛血清]：先將DMEM溶于1L滅菌水中攪拌15 min，溶解完畢加入4.766 g Hepes并攪拌15 min后加入碳酸氫鈉2.0 g，同樣繼續(xù)攪拌15 min。在超凈臺內(nèi)用0.22μm濾膜進(jìn)行過濾，4℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩Ｊ褂们?，在超凈臺內(nèi)分別加入10%的胎牛血清和1%青鏈霉素抗生素，4℃冰箱保存。

1.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)將細(xì)胞從-80℃超低溫冰箱取出，在37℃內(nèi)搖晃至融化，將細(xì)胞凍存液吸入裝有10 ml培養(yǎng)基的15 ml離心管內(nèi)，2 000 r/min；遺棄上清液，加入7～8 ml的DMEM培養(yǎng)基對細(xì)胞吹打均勻，再吸入裝有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶內(nèi)吹打均勻。并放37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)；當(dāng)細(xì)胞長到80%左右時，就對其進(jìn)行傳代。

1.3.3 藥物濃度篩選種板：將HSC細(xì)胞經(jīng)過消化離心后，用新的培養(yǎng)基吹打均勻，其種板密度為6×104個/ml，并設(shè)空白對照組和陰性組對照。并置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)細(xì)胞12 h，使其完成貼壁。分組：吸棄培養(yǎng)基上清液，加入培養(yǎng)基和藥物溶液：肝龍膠囊（A）3.750、1.880、0.938、0.469和0.235 mg/ml，水飛薊賓膠囊（B）以1.000、0.500、0.250和0.125和0.063 mg/ml濃度進(jìn)行2因素5水平完全實(shí)驗設(shè)計，并設(shè)立單獨(dú)用藥組。并置37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)分別培養(yǎng)24、48和72 h。遺棄培養(yǎng)基，用PBS清洗2次，每孔加入MTT溶液20μl，繼續(xù)孵育4 h后，加入150μl DMSO，使用酶標(biāo)儀490 nm處檢測光密度（OD）值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)處理用SPSS 17.0軟件。所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用檢驗，多組數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗，<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。抑制率（fa）=（實(shí)驗組OD值-空白組OD組）（/陰性組OD值-空白組OD值）×100%；IC50值根據(jù)細(xì)胞生長抑制率-藥物濃度繪制生長曲線。聯(lián)合指數(shù)CI=AB（聯(lián)合組OD值/陰性O(shè)D值）/A（單用A藥組OD值/陰性O(shè)D值）×B（單用B藥組OD值/陰性O(shè)D值）。

2 結(jié)果

2.1 HSC細(xì)胞的形態(tài)

HSC被不同濃度處理不同時間后，倒置顯微鏡下放大4倍觀察細(xì)胞的形態(tài)特征，陰性對照組細(xì)胞狀態(tài)良好，緊貼板底，細(xì)胞呈纖維樣。用0.469 mg/ml肝龍膠囊處理24 h后HSC細(xì)胞狀態(tài)良好，細(xì)胞形態(tài)未出現(xiàn)太多改變。而單用0.125 mg/ml水飛薊賓膠囊處理24 h后HSC細(xì)胞狀態(tài)與陰性對照組的HSC細(xì)胞相比，細(xì)胞數(shù)有一定程度的減少，且細(xì)胞形態(tài)縮短或呈球狀。而0.469 mg/ml肝龍膠囊聯(lián)合0.125 mg/ml水飛薊賓膠囊處理24 h后HSC細(xì)胞數(shù)明顯減少，細(xì)胞形態(tài)基本上呈球狀。見圖1～6。

2.2 HSC細(xì)胞的生長抑制情況

圖1 陰性對照組24 h（倒置顯微鏡×4）

圖2 單用0.469 mg/ml肝龍膠囊24 h（倒置顯微鏡×4）

圖3 單用0.125 mg/ml水飛薊賓膠囊24 h（倒置顯微鏡×4）

圖40 .125 mg/ml水飛薊賓膠囊+0.469 mg/ml肝龍膠囊24 h（倒置顯微鏡×4）

圖5 單用1.000mg/ml水飛薊賓膠囊24 h（倒置顯微鏡×4）

2.2.1 水飛薊賓膠囊與不同濃度肝龍膠囊聯(lián)合24 h后對HSC細(xì)胞的生長抑制作用水飛薊賓膠囊濃度為0.063、0.125、0.250、0.500和1.000 mg/ml時對HSC細(xì)胞的抑制率分別為26.1%、27.3%、44.8%、47.3%和80.7%。0.063 mg/ml水飛薊賓膠囊分別與3.750、1.875、0.938、0.469和0.235 mg/ml濃度的肝龍膠囊聯(lián)合后，其中與3.750 mg/ml肝龍膠囊聯(lián)合后的抑制率與單用水飛薊賓膠囊相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（=-29.475，=0.001），聯(lián)合后的抑制率增大。0.125 mg/ml水飛薊賓膠囊與不同濃度肝龍膠囊聯(lián)合后，其中與0.938 mg/ml肝龍膠囊聯(lián)合后的抑制率與單用水飛薊賓膠囊相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（=-16.667，=0.000），聯(lián)合后抑制率增大。0.250 mg/ml水飛薊賓與不同濃度的肝龍膠囊聯(lián)合，其中與1.875、0.938、0.469、0.235 mg/ml肝龍膠囊聯(lián)合后的抑制率與單用水飛薊賓膠囊相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（=-3.198、-6.672、-8.751和-12.421=0.033、0.011、0.005和0.000），聯(lián)合后抑制率增大。見表1。

2.2.2 水飛薊賓膠囊與不同濃度肝龍膠囊聯(lián)合48 h后對HSC細(xì)胞的生長抑制作用水飛薊賓膠囊濃度為0.063、0.125、0.250、0.500和1.000 mg/ml時對HSC細(xì)胞的抑制率分別為36.4%、52.3%、88.7%、87.3%和77.1%。0.063及0.125 mg/ml濃度水飛薊賓膠囊分別與3.750、1.875、0.938、0.469和0.235 mg/ml肝龍膠囊聯(lián)合后的抑制率與單用水飛薊賓膠囊相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（=-4.434、-3.423、-4.434、-4.596和-5.192，=0.020、0.039、0.020、0.017和0.011），聯(lián)合后的抑制率增大。1.000 mg/ml濃度水飛薊賓膠囊與不同濃度肝龍膠囊聯(lián)合后，其中與3.750和0.938 mg/ml肝龍膠囊聯(lián)合后的抑制率與單用水飛薊賓膠囊相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（=-5.365和-2.863，=0.006和0.046），聯(lián)合后抑制率增大。見表2。

圖61 .000 mg/ml水飛薊賓膠囊+0.469 mg/ml肝龍膠囊24 h（倒置顯微鏡×4）

表1 水飛薊賓膠囊單用及合用肝龍膠囊24 h對HSC增殖的影響（%±s）

表1 水飛薊賓膠囊單用及合用肝龍膠囊24 h對HSC增殖的影響（%±s）

注：?與單獨(dú)用藥比較，<0.05

肝龍膠囊0.235mg/ml 0.063 mg/ml0.556±0.048?-0.071±0.161-0.413±0.018-0.739±0.058?-0.265±0.120抑制率水飛薊賓膠囊肝龍膠囊3.750mg/ml肝龍膠囊1.875mg/ml肝龍膠囊0.938mg/ml肝龍膠囊0.469mg/ml肝龍膠囊0.000 mg/ml-0.261±0.00171.2080.000值值0.125 mg/ml 0.250 mg/ml 0.337±0.104?0.521±0.045 0.397±0.029 0.699±0.028?0.464±0.015 0.722±0.050?0.299±0.024 0.682±0.057?0.359±0.037 0.713±0.142?0.273±0.0135.4790.007 0.448±0.0218.6880.0010.500 mg/ml0.532±0.0020.611±0.0860.730±0.0050.581±0.0740.694±0.001 1.000 mg/ml0.835±0.0740.874±0.0180.793±0.1480.803±0.1200.874±0.018 0.473±0.0866.0900.005 0.807±0.0330.5390.743

表2 水飛薊賓膠囊單用及合用肝龍膠囊48 h對HSC增殖的影響（%±s）

表2 水飛薊賓膠囊單用及合用肝龍膠囊48 h對HSC增殖的影響（%±s）

注：?與單獨(dú)用藥比較，<0.05

抑制率水飛薊賓膠囊肝龍膠囊0.235 mg/ml 0.063 mg/ml0.875±0.088?0.811±0.084?0.789±0.079?0.694±0.081?0.754±0.066?肝龍膠囊3.750 mg/ml肝龍膠囊1.875 mg/ml肝龍膠囊0.938 mg/ml肝龍膠囊0.469 mg/ml肝龍膠囊0.000 mg/ml0.364±0.14611.1810.000 0.523±0.1533.5720.033 0.887±0.0073.3590.040 0.873±0.0133.5750.033 0.771±0.0663.1060.050值值0.125 mg/ml 0.250 mg/ml 0.913±0.000?0.970±0.059?0.903±0.015?0.956±0.059 0.862±0.013?0.919±0.043 0.824±0.037?0.905±0.025 0.811±0.016?0.857±0.0090.500 mg/ml0.967±0.0790.984±0.0250.984±0.0250.931±0.1080.764±0.134 1.000 mg/ml0.976±0.105?0.966±0.125?0.980±0.014?0.846±0.1030.889±0.002

2.2.3 水飛薊賓膠囊與不同濃度肝龍膠囊聯(lián)合72 h后對HSC細(xì)胞的生長抑制作用水飛薊賓膠囊濃度為0.063、0.125、0.250、0.500和1.000 mg/ml時對HSC細(xì)胞的抑制率分別為63.2%、95.0%、98.6%、96.7%和89.3%。0.063 mg/ml水飛薊賓膠囊與不同濃度肝龍膠囊聯(lián)合后，其中與3.750和1.875 mg/ml濃度肝龍膠囊聯(lián)合后的抑制率與單用水飛薊賓膠囊相比均增大，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（=-2.907和-2.774，=0.044和0.050）。見表3。

2.3 HSC細(xì)胞IC50值的影響

2.3.1 水飛薊賓膠囊與不同濃度肝龍膠囊聯(lián)合24 h后對HSC細(xì)胞IC50值的影響0.063、0.125、0.250、0.500和1.000 mg/ml水飛薊賓膠囊與3.750、1.875、0.938、0.469和0.235 mg/ml肝龍膠囊合用24 h均可使IC50值降低，與單用水飛薊賓膠囊的IC50值0.585 mg/ml比較，分別降低到0.440、0.429、0.478、0.582和0.581 mg/ml。其下降幅度分別為24.79%、26.67%、18.29%、0.50%和0.68%。見表4。

2.3.2 水飛薊賓膠囊與不同濃度肝龍膠囊聯(lián)合48 h后對HSC細(xì)胞IC50值的影響0.063、0.125、0.250、0.500和1.000 mg/ml水飛薊賓膠囊與1.875、0.938、0.469和0.235 mg/ml肝龍膠囊合用48 h后可使IC50值降低，其中與單用水飛薊賓膠囊的IC50值0.808 mg/ml比較，分別降低到0.752、0.709、0.015和0.496 mg/ml。其下降幅度分別為6.93%、12.25%、98.14%和38.61%。見表4。

2.3.3 水飛薊賓膠囊與不同濃度肝龍膠囊聯(lián)合72 h后對HSC細(xì)胞IC50值的影響0.063、0.125、0.250、0.500和1.000 mg/ml水飛薊賓膠囊與3.750、1.875、0.938和0.469 mg/ml肝龍膠囊合用72 h后可使IC50值降低，其中與單用水飛薊賓膠囊的IC50值1.017 mg/ml比較，分別降低到0.988、0.971、0.810和0.387 mg/ml。其下降幅度分別為2.85%、4.52%、20.35%和61.90%。見表4。

2.4 水飛薊賓膠囊聯(lián)合不同肝龍膠囊濃度時的聯(lián)合指數(shù)

水飛薊賓膠囊與不同濃度肝龍膠囊聯(lián)合后，其聯(lián)合指數(shù)CI<1.0，呈現(xiàn)出協(xié)同作用，見表5。

表3 水飛薊賓膠囊單用及合用肝龍膠囊72 h對HSC增殖的影響（%±s）

表3 水飛薊賓膠囊單用及合用肝龍膠囊72 h對HSC增殖的影響（%±s）

注：?與單獨(dú)用藥比較，<0.05

抑制率水飛薊賓膠囊肝龍膠囊0.235 mg/ml 0.063 mg/ml0.987±0.088?0.922±0.084?0.790±0.078?0.648±0.0160.508±0.016肝龍膠囊3.750 mg/ml肝龍膠囊1.875 mg/ml肝龍膠囊0.938 mg/ml肝龍膠囊0.469 mg/ml肝龍膠囊0.000 mg/ml0.632±0.15110.2860.000值值0.125 mg/ml 0.250 mg/ml 0.931±0.050 0.967±0.013 0.931±0.015 0.961±0.020 0.967±0.013 0.936±0.0430.976±0.037 1.009±0.0520.991±0.083 1.006±0.1160.950±0.1090.6400.670 0.986±0.0250.8230.5560.500 mg/ml0.979±0.0070.997±0.0010.976±0.0590.989±0.1080.936±0.102 1.000 mg/ml0.977±0.0900.959±0.0300.758±0.1000.763±0.1500.831±0.111 0.967±0.0510.2910.909 0.893±0.1022.5310.087

表4 單用水飛薊賓膠囊及合用肝龍膠囊HSC的IC50值變化

表5 水飛薊賓膠囊聯(lián)合不同肝龍膠囊濃度時的聯(lián)合指數(shù)（CI）

3 討論

肝纖維化是指由各種致病因子所致肝內(nèi)結(jié)締組織異常增生，導(dǎo)致肝內(nèi)彌漫性細(xì)胞外基質(zhì)過度沉淀的病理過程。其肝纖維化的藥物治療沒有實(shí)質(zhì)性的進(jìn)展，雖然目前有許多藥物被應(yīng)用于肝纖維化的治療，但臨床上的應(yīng)用效果卻不樂觀或者具有較大的毒副作用。其中，水飛薊賓膠囊作為治療肝慢性疾病的傳統(tǒng)藥物，在臨床上被廣泛應(yīng)用。據(jù)估計，約33%的丙型肝炎患者和肝硬化患者正在使用或曾經(jīng)使用過水飛薊賓膠囊相關(guān)產(chǎn)品[11]；在德國，水飛薊賓膠囊相關(guān)藥物的年治療費(fèi)用就達(dá)到1.8億美元[12]；在我國，水飛薊賓膠囊的臨床應(yīng)用也在逐年增加。因此本研究以聯(lián)合用藥的角度出發(fā)，旨在探索肝龍膠囊與水飛薊賓膠囊聯(lián)合對HSC增殖的影響，從而為臨床抗肝纖維化應(yīng)用肝龍膠囊與水飛薊賓膠囊提供新的思路。

本實(shí)驗研究結(jié)果表明，不同濃度水飛薊賓膠囊對大鼠HSC細(xì)胞有不同程度的抑制作用。水飛薊賓膠囊聯(lián)合肝龍膠囊對HSC細(xì)胞的抑制作用與單用水飛薊賓膠囊組比較，作用更強(qiáng)，尤其48 h時0.063、0.125及0.250 mg/ml水飛薊賓膠囊與其不同濃度肝龍膠囊聯(lián)合后，與單用水飛薊賓膠囊組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。水飛薊賓膠囊聯(lián)合不同濃度肝龍膠囊的IC50值與單用水飛薊賓膠囊的IC50值相比較，在24、48、72 h時均有下降，因此，水飛薊賓膠囊與肝龍膠囊合用可在一定程度上降低水飛薊賓膠囊的毒性，而且水飛薊賓膠囊與不同濃度肝龍膠囊聯(lián)合后，其聯(lián)合指數(shù)CI<1.0，呈現(xiàn)出協(xié)同作用，增強(qiáng)了水飛薊賓膠囊對HSC細(xì)胞的抑制作用。本實(shí)驗發(fā)現(xiàn)同一個濃度沒有時間依賴性，用高濃度水飛薊賓膠囊處理HSC后，其會產(chǎn)生黑色物質(zhì)，從而影響其吸光度值，但與肝龍膠囊聯(lián)合后這種黑色物質(zhì)會消失。因此，可以用較低劑量的水飛薊賓膠囊與肝龍膠囊聯(lián)合達(dá)到和高劑量水飛薊賓膠囊相同或更好的療效。該結(jié)果將為肝纖維化藥物的研發(fā)提供一定的理論依據(jù)。綜上所述，水飛薊賓膠囊與肝龍膠囊合用在體外抗肝纖維化具有協(xié)同作用，此作用是通過抑制HSC細(xì)胞達(dá)到的，其作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。但目前觀察結(jié)果僅為體外實(shí)驗，體內(nèi)實(shí)驗是否有相同結(jié)果尚需更多研究加以證實(shí)，下一步將繼續(xù)進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗的研究，為臨床提供更多的依據(jù)。

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（張蕾編輯）

Effect of Ganlong Capsules combined with Silibinin Capsules onproliferative activity of rat hepatic stellate cells*

Qiang-li Yang,Hui Li,Yong Lai
(Department of Pharmacology,College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China)

ObjectiveTo investigate the effect of anti-liver fibrosis agent Silibinin Capsules alone or combined with Ganlong Capsules on proliferative activity of rat hepatic stellate cells(HSC),and to evaluate the effect of Ganlong Capsules on theanti-liver fibrosis activity of Silibinin.Methods Two-factors and five-levels full experiment was applied for single use or combined use of Silibinin Capsules with different dosages of Ganlong Capsules in HSC at different time points.Tetrazolium salt colorimetric assay(MTT)was utilized to determine the effect of Ganlong Capsules on HSC proliferation.ResultsCombination of Silibinin Capsules and Ganlong Capsules enhanced the suppression effect of Silibinin Capsules on HSC proliferation.The effect of Silibinin Capsules was obviously increased especially at a dosage of 0.063 mg/ml,0.125 mg/ml or 0.250 mg/ml and in combination with Ganlong Capsules,and the differences were significant when compared with the Silibinin Capsule single drug groups.Compared with the IC50value of Silibinin Capsules alone,the IC50values of Silibinin Capsules combined with Ganlong Capsules at different dosages decreased at 24,48 and 72 h.Moreover,the combination indexes(CI)of the combined drug therapies were all less than 1.0,which illustrated synergistic effect and enhanced the suppression effect of Silibinin Capsules on HSC.ConclusionsGanlong Capsules can enhance theanti-liver fibrosis effect of Silibinin Capsules.

hepatic stellate cell(HSC);Silibinin capsule;Ganlong capsule;cell activity

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.16.005

1005-8982（2017）16-0024-06

R-332

A

2017-01-15

云南省教育廳科學(xué)研究基金項目（No：2016YJS120）；云南省教育廳科學(xué)研究基金重大專項項目（No：ZD2014013）

賴泳，E-mail：laiyong8879@163.com