翻白草總黃酮提取工藝及化學(xué)成分分析

付立明

（北京衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，北京 101149）

翻白草總黃酮提取工藝及化學(xué)成分分析

付立明

（北京衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，北京 101149）

目的 分析翻白草總黃酮的提取工藝及化學(xué)成分。方法 利用三種不同方法提取翻白草總黃酮，觀察提取結(jié)果；使用乙醇、丙酮及水測量翻白草總黃酮的含量，記錄測量結(jié)果；提取分析藥材，檢測不同萃取物的減壓回收后的量；萃取分離乙酸乙酯萃取物，觀察分離出來的化學(xué)成分。結(jié)果 提取總黃酮時，如使用乙醇溶劑，獲得最多粗提物量的濃度為70%；如使用丙酮溶劑，粗提物量與濃度成反比；提取總黃酮時，含量最高的為70%乙醇，最低的為水；石油醚、乙酸乙酯、正丁醇的萃取物量分別為9.25 g、15.34 g、20.23 g；經(jīng)鑒定，化合物包含烏蘇烷型三萜化合物、β-谷甾醇、齊墩果酸、十四烷酸、十六四烷酸、3′，4′，3，5，7-五羥基黃酮。結(jié)論 提取翻白草總黃酮時，溶劑提取-醚萃取的方法簡便易用，且具有較高的準確度，通分析出的化合物看，多數(shù)的作用為降血脂、消炎。

翻白草；總黃酮；提取工藝；化學(xué)成分

黃酮類化合物為翻白草中的成分之一，具有藥理活性，在糖尿病及其并發(fā)癥治療中具有良好的作用，可將自由基清除，對β細胞功能產(chǎn)生影響，增強免疫功能等。國內(nèi)外多位學(xué)者表明，糖尿病治療中，翻白草安全有效，且不會產(chǎn)生毒副作用，而黃酮類化合物作為其藥效發(fā)揮的有效成分，如何提取及其化學(xué)成分成為研究的重點，本研究即分析了翻白草總黃酮的提取工藝及化學(xué)成分?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

實驗時采用的儀器包含精密顯微熔點測定儀、電子天平、水浴鍋、紅外光譜儀、層次用硅膠等；材料為翻白草，在銅佛寺中采集，經(jīng)實驗室專業(yè)人員鑒定確定，泥沙洗去后晾干，粉碎。

1.2 方法

1.2.1 總黃酮提取方法（1）乙醇提取-醚萃取法：在3個錐形瓶中分別加入25 g翻白草，再分別將50%、70%、90%濃度乙醇溶劑加入到錐形瓶中，重量均為原料的15倍，經(jīng)24 h浸泡后，于水浴鍋內(nèi)放置，進行2、2、1 h的回流，溫度均80℃，過濾，濾液合并，溶劑收回時利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，浸膏獲取后，去離子水加入其中，冷凍，渣去除，3次后，清液合并，利用乙醚萃取，乙醚層與水層合并，回收乙醚，干燥后的粉末即為粗提物，記錄粗提物量。（2）丙酮提取-醚萃取法：提取與萃取方法均與第一種相同，不同的為浸泡溶劑為丙酮。（3）水提-醚萃取法：提取與萃取方法均與第一種相同，不同的為浸泡溶劑為水，且不設(shè)置不同的濃度。

1.2.2 測定總黃酮含量：樣品液稱取適量，堿性條件（存在15%亞硝酸鈉0.3 mL）下，利用硝酸鋁顯色后，空白比選擇試劑，螯合物吸收度檢測時，波長范圍為420～700 nm，最大吸收出現(xiàn)在510 nm處，以此作為測定波長；亞硝酸鈉溶液的濃度為50g/l，吸光度趨勢為增大；硝酸鋁溶液的濃度為100 g/L，具有相對穩(wěn)定的吸光度；氫氧化鈉溶液的濃度為40 g/L，具有相對穩(wěn)定的吸光度。在105℃條件下，精準稱取10每個蘆丁標準品，定容時利用70%乙醇，達到100ml時停止，于6支試管中分別置入0.0 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL的蘆丁標準液，之后將不同量的水加入試管中，保證試管內(nèi)溶液量為5.0 mL，再加入0.3 mL 0.5%亞硝酸鈉溶液，搖勻，靜置6 min，接著加入0.3 mL 10%硝酸鋁溶液，靜置6 min，最后加入4 mL 4%氫氧化鈉溶液、0.4 mL水，搖勻，靜置15 min后，進行吸光度測試。測定樣品液總黃酮含量時，方法與上述相同。

1.2.3 藥材的提取分離：稱取2.5 kg翻白草全草粗粉，加熱回流時利用95%乙醇，時間為2 h，進行2次提取，趁熱過濾提取液，濾液合并，乙醇減壓回收，得到浸膏，于水中溶解浸泡，制成混懸液，萃取先后利用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進行，減壓回收各萃取液。

1.2.4 乙醇乙酯萃取物的分離：柱層析反復(fù)進行后，化合物共得到6個，分別為白色無定形粉末、白色針狀晶體、白色粉末、白色蠟狀固體、無色針狀結(jié)晶、黃色粉末。

2 結(jié) 果

2.1 總黃酮提取結(jié)果

第一種提取方法提取后，粗提物量分別為5.25 g、6.45 g、2.47 g；第二種提取方法提取的粗提物量分別為6.41 g、4.96 g、3.29 g；第三種方法提取后的粗提物量為6.08 g。以上結(jié)果說明，提取總黃酮時，如使用乙醇溶劑，獲得最多粗提物量的濃度為70%；如使用丙酮溶劑，粗提物量與濃度成反比。

2.2 總黃酮含量測定結(jié)果

提取總黃酮時，含量最高的為70%乙醇，最低的為水，具體測定結(jié)果。見表1。

表1 總黃酮含量測定結(jié)果（n，%）

2.3 藥材提取分離結(jié)果

經(jīng)測定，石油醚、乙酸乙酯、正丁醇的萃取物量分別為9.25 g、15.34 g、20.23 g。

2.4 乙醇乙酯分離結(jié)果

萃取分離的6個化合物中，經(jīng)鑒定，白色無定形粉末為烏蘇烷型三萜化合物、白色針狀晶體為β-谷甾醇、白色粉末為齊墩果酸、白色蠟狀固體為十四烷酸、無色針狀結(jié)晶十六四烷酸、黃色粉末為3′，4′，3，5，7-五羥基黃酮。

3 討 論

翻白草屬于藥用植物，總黃酮屬于其成分中具有藥理作用的有效成分。本文在提取總黃酮時，采取了三種不同的方法，結(jié)果顯示，濃縮乙醇提取液并將等量水加入其中后，能夠沉淀雜質(zhì)，使干擾排除，再利用乙醚萃取后，提取液變得澄清，證明有效的去除了葉綠素等雜質(zhì)[1]。提取工藝中，溶劑分別選用不同濃度乙醇、丙酮、水，獲得不同的提取率，最高的為70%乙醇，可見，提物總黃酮時，最佳溶劑為70%乙醇[2]。在70%乙醇溶劑條件下，總黃酮提取效果還會受到回流時間、固液比等因素的影響，實驗顯示，工藝條件優(yōu)化后，經(jīng)2次提取，總黃酮含量約為19%[3]。乙醇乙酯萃取物分離時，采用方法為硅膠柱層次分離，分析后獲得的化合物共6種，經(jīng)鑒定后，屬于烏蘇酸、β-谷甾醇、齊墩果酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸與槲皮素，這6種化合物中，槲皮素屬于黃酮類化合物，在糖尿病中有著較高的價值[4]。此外，齊墩果酸可對腫瘤生長發(fā)揮抑制作用，保護化學(xué)性損傷的肝細胞。

綜上，提取翻白草總黃酮時，可利用70%乙醇提取-醚萃取方法，具有較高的總黃酮收率；翻白草中鑒定出的化合物中，多數(shù)在糖尿病中有著使用價值及藥用價值。

[1] 彭 飛,楊越冬,程才紅,等.安梨總黃酮微波輔助提取工藝的優(yōu)化及其成分初步分析[J].食品科技,2015,10(11):196-203.

[2] 張 野,楊世海.酸棗仁總黃酮成分的提取工藝及其含量分析[J].人參研究,2012,21(02):28-30.

[3] 包怡紅,段偉麗,王 芳,等.響應(yīng)面法優(yōu)化艾葉精油的提取工藝及其化學(xué)成分分析[J].食品工業(yè)科技,2015,8(14):287-292+298.

[4] 李 翔,王 衛(wèi),劉達玉,等.麻竹葉揮發(fā)油提取工藝及化學(xué)成分的GC-MS分析[J].中國食品添加劑,2013,15(06):92-98.

本文編輯：趙小龍

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ISSN.2095-8242.2017.24.4713.02