德惠地區(qū)雞新城疫血清學(xué)調(diào)查

竇海艷 李建華 李鑫 張春媛 丁國杰/哈藥集團生物疫苗有限公司

德惠地區(qū)雞新城疫血清學(xué)調(diào)查

竇海艷 李建華 李鑫 張春媛 丁國杰/哈藥集團生物疫苗有限公司

雞新城疫（New Castle disease）又稱亞洲雞瘟或偽雞瘟，是由副黏病毒科的新城疫病毒引起的急性高度接觸性傳染病，傳播迅速，對雞養(yǎng)殖業(yè)造成嚴重危害和巨大的經(jīng)濟損失。對該病的防治目前沒有特別有效的手段，主要通過接種疫苗來進行預(yù)防。最近的研究表明，新城疫的流行表現(xiàn)出一些新的趨勢，即在目前普遍采用疫苗免疫的情況下，ND 在部分地區(qū)流行依然嚴重， 且表現(xiàn)出新的流行病學(xué)特點，如高免雞群發(fā)病等。為了解德惠地區(qū)雞場新城疫免疫抗體的水平，更好地預(yù)防和控制其發(fā)生和流行，本研究于2015 年對該地區(qū)7個養(yǎng)雞場新城免疫抗體抽樣檢測，現(xiàn)將檢測結(jié)果報道如下。

一、材料與方法

（一）材料

1.被檢血清。2015年4月份至2015年5月份，選擇德惠部分地區(qū)7個養(yǎng)雞場，分別用A、B、C、D、E、F 和G表示，每個雞場的采樣比例為5‰左右，每個樣品采血量2 ml用于制備待檢血清。抽樣禽場均已按照農(nóng)業(yè)部新城疫免疫技術(shù)規(guī)范進行免疫。

2.診斷試劑。雞新城疫血凝抑制試驗（HI）標準抗原、陰性血清和陽性血清，購自哈爾濱獸醫(yī)研究所。

3. 1%紅細胞的制備。按照《中國獸藥典》（三部，2010版）附錄制備。

（二）檢測方法

測定標準抗原的血凝價，制備4HAU抗原并進行驗證，采用血凝抑制試驗檢測血清樣品中雞新城疫抗體的效價，操作方法按《新城疫診斷技術(shù)》（GBT/16550-2008）進行。血凝抑制試驗具體操作如下：（1）根據(jù)血凝試驗的結(jié)果配制4個血凝單位（4HUA）抗原。以能引起100%血凝的病毒最高稀釋倍數(shù)代表1個血凝單位，4HUA的配制方法如下：假設(shè)抗原的血凝滴度為1∶256，則4HUA抗原的稀釋倍數(shù)應(yīng)是1∶64（256除以4），稀釋時，將1 ml的抗原加入到63 ml PBS中即為4HUA抗原；（2）在96孔V型血凝板上的第1孔至11孔，用移液器每孔加入0.025 ml PBS，第12孔加入0.050 ml PBS；（3）在第1孔加入0.025 ml新城疫標準陽性血清，充分混勻后移出0.025 ml至第2孔，依次類推，倍比稀釋至第10孔，第10孔棄去0.025 ml，第11孔為陽性對照，第12孔為PBS對照；（4）在第1～11孔各加入0.025 ml含4HAU抗原，輕叩反應(yīng)板，使反應(yīng)物混合均勻，室溫下（約20℃～25℃）靜置不少于30 min。（5）每孔加入0.025 ml體積分數(shù)為1%的紅細胞懸液。輕晃混勻后，室溫（約20℃～25℃）靜置約40 min，若環(huán)境溫度太高，放4℃靜置60 min。當PBS對照孔紅細胞呈明顯紐扣狀沉到孔底時判定結(jié)果。

（三）判定標準

以完全抑制4 HAU抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI 滴度。只有當陰性血清與標準抗原對照的HI滴度不大于2log2，陽性血清與標準抗原對照的HI滴度與已知滴度相差在1個稀釋度范圍內(nèi)，并且所用陰、陽性血清都不發(fā)生自凝的情況下，HI試驗結(jié)果方判定有效。根據(jù)農(nóng)業(yè)部《國家動物疫病監(jiān)測計劃》要求，抗體效價≥25為免疫合格，免疫抗體監(jiān)測合格數(shù)達到抽檢總數(shù)70%判定為群體合格。計算各養(yǎng)殖場雞群抗體效價的平均值和標準差以及抗體的變異系數(shù)（ 變異系數(shù)=標準差與平均值的比值）。

二、結(jié)果與分析

檢測結(jié)果表明，德惠地區(qū)7個雞場雞新城疫免疫抗體合格率均達90%以上，達到國家標準；7個雞場抗體的變異系數(shù)值均在10 %以上，離散度均相對較高；不同雞場抗體水平存在一定的差距。具體結(jié)果見表1。

表1　檢測雞場新城疫HI抗體效價平均值、變異系數(shù)及雞群合格率

三、討論

1.德惠地區(qū)雞場的數(shù)量和規(guī)模都較大，因此對于雞新城疫的防控就顯得尤為重要。隨著本地區(qū)養(yǎng)殖戶疫苗免疫意識的提高，基本上普及了雞新城疫等禽重要傳染病的接種，有效的控制了新城疫疫情的暴發(fā)，減少了經(jīng)濟損失。本研究的7個雞場雞群的新城疫合格率均在90%以上，但新城疫HI抗體效價平均值卻差異顯著，以B雞場最高，以G雞場最低，其原因可能與養(yǎng)殖環(huán)境與管理方式、疫苗生產(chǎn)企業(yè)、免疫程序、免疫方法和劑量以及母源抗體水平等有關(guān)。為了取得良好的免疫效果，建議改善養(yǎng)殖環(huán)境，學(xué)習(xí)先進的管理方法、選擇質(zhì)量好的疫苗、監(jiān)測新城疫母源抗體并據(jù)此制定科學(xué)的免疫程序。

2.以往的研究表明，疫苗免疫接種能有效預(yù)防新城疫，但免疫雞群仍可攜帶vNDV（新城疫強毒），無論采用哪種免疫程序，都不能阻止vNDV在雞群中增殖及傳播，而從抗體效價在3～10的個體檢出vNDV，說明無論體內(nèi)HI抗體水平的高低都不能阻止病毒的感染與增殖。新城疫強毒感染與否和雞群HI抗體離散度密切相關(guān)，可能與自身HI抗體水平無關(guān)。在本研究中，B雞場、G雞場和D雞場的標準差和變異系數(shù)分別居所檢測雞場的前3位，推測這3個雞場中雞群攜帶vNDV的概率最大。為了降低風(fēng)險，建議這3個雞場進行雞新城疫病原方面的檢測。

（略）