羔羊小反芻獸疫母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律

張子榮，馬長(zhǎng)賓，崔 蕾，魯立柱

（1.新疆建設(shè)兵團(tuán)第六師五家渠市畜牧獸醫(yī)工作站，五家渠 831300；2.天康生物股份有限責(zé)任公司，新疆 烏魯木齊 830032）

羔羊小反芻獸疫母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律

張子榮1，馬長(zhǎng)賓1，崔 蕾1，魯立柱2

（1.新疆建設(shè)兵團(tuán)第六師五家渠市畜牧獸醫(yī)工作站，五家渠 831300；2.天康生物股份有限責(zé)任公司，新疆 烏魯木齊 830032）

為合理制定羔羊小反芻獸疫（PPR）的免疫程序，采用中和試驗(yàn)研究了羔羊母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律。結(jié)果表明：羔羊出生后7～45 d血清抗體水平較高（抗體效價(jià)≥1∶40血清比例均大于80%），抗體保護(hù)率達(dá)90%以上，其中7～14 d血清抗體水平最高（抗體效價(jià)≥1∶40血清比例均大于90%），抗體保護(hù)率達(dá)100%。14 d以后血清抗體水平開(kāi)始降低，90 d時(shí)血清抗體保護(hù)率降到了60%。對(duì)于經(jīng)免場(chǎng)PPR的最佳免疫時(shí)間應(yīng)選擇在斷奶后30日齡左右，即60日齡斷奶，90日齡免疫；90日齡斷奶，120日齡免疫。

羔羊；PPR；母源抗體；消長(zhǎng)規(guī)律

小反芻獸疫（PPR），又稱(chēng)羊瘟，是由PPR病毒（PPRV）引起的山羊、綿羊、野生小反芻獸的高度接觸性傳染病，以發(fā)熱、口炎、腹瀉、肺炎為特征［1］。易感羊群發(fā)病率可高達(dá)90%～100%，在嚴(yán)重情況下病死率高達(dá)100%［2］。目前，PPR無(wú)特效治療藥物，疫苗免疫接種是最有效的防控措施［3］。羔羊出生后通過(guò)吮吸母乳可以獲得母源抗體。母源抗體的存在，可使羔羊在一定時(shí)間內(nèi)被動(dòng)地得到保護(hù)，但又給免疫接種帶來(lái)影響。羔羊母源抗體水平過(guò)高，接種PPR疫苗，則疫苗會(huì)被母源抗體所中和，使羔羊不產(chǎn)生抗體或產(chǎn)生的抗體水平較低，得不到應(yīng)有的保護(hù)；母源抗體過(guò)低時(shí)接種疫苗，則羔羊在免疫空白期易受環(huán)境中PPRV的侵襲。因此，研究羔羊小反芻獸疫母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律就顯得很有必要。鑒此，本研究通過(guò)中和試驗(yàn)對(duì)羔羊血清PPR抗體水平進(jìn)行了監(jiān)測(cè)，分析羔羊PPRV母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律，以確定最佳首免時(shí)機(jī)，為合理制訂小反芻獸疫免疫程序提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試羊 供試羊?yàn)榈诹鶐?02團(tuán)某羊場(chǎng)同期分娩的20只經(jīng)產(chǎn)湖羊（配種前皮下注射1頭份小反芻獸疫活疫苗）所產(chǎn)的22只羔羊，在48 d時(shí)，由于2只羔羊出現(xiàn)腹瀉癥狀，將其移出試驗(yàn)羊群。

1.1.2 檢測(cè)試劑 檢驗(yàn)用抗原（抗原批號(hào)：20161000）由天康生物股份有限責(zé)任公司生產(chǎn)部生產(chǎn)，質(zhì)檢部標(biāo)定；檢驗(yàn)用陰、陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)血清由質(zhì)檢部制作、標(biāo)定；Vero傳代細(xì)胞，購(gòu)自中國(guó)獸藥監(jiān)察所，由質(zhì)檢部保存。

1.2 方法

（1）將小反芻獸疫Clone9株病毒液用無(wú)血清MEM細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋成102.0 TCID50/0.1mL。

（2）將被檢羊血清、陽(yáng)性對(duì)照血清、陰性對(duì)照血清在56℃水浴滅能30min。

（3）將陰性血清用無(wú)血清MEM細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行1∶2、1∶4、1∶8稀釋?zhuān)瑢⒈粰z羊血清和陽(yáng)性對(duì)照血清先進(jìn)行1∶5稀釋?zhuān)龠M(jìn)行2倍系列稀釋?zhuān)瑢⒏飨♂尪缺粰z血清及陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清分別加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每個(gè)稀釋度接種5孔，每孔0.1mL。

（4）同時(shí)設(shè)立病毒回歸對(duì)照，即將100 TCID50/0.1mL病毒工作液用無(wú)血清MEM細(xì)胞培養(yǎng)液10倍系列稀釋成10TCID50/0.1mL、1TCID50/0.1mL、0.1TCID50/0.1mL，取病毒工作液和3個(gè)稀釋度病毒液，每個(gè)病毒液接種5孔，每孔0.1mL。

（5）向所有血清孔加入100 TCID50/0.1mL病毒工作液0.1mL，向細(xì)胞對(duì)照孔加入0.2mL無(wú)血清MEM細(xì)胞培養(yǎng)液，向病毒對(duì)照孔中加入0.1mL無(wú)血清MEM細(xì)胞培養(yǎng)液，37℃作用1 h。

（6）向所有孔加入濃度為20萬(wàn)～30萬(wàn)/mL的Vero細(xì)胞懸液0.1mL，置37℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)6 d，期間每日觀察細(xì)胞病變。

（7）試驗(yàn)結(jié)果判定：10 TCID50以上病毒對(duì)照及陰性血清對(duì)照孔均應(yīng)出現(xiàn)小反芻獸疫病毒特有的細(xì)胞融合等細(xì)胞病變，1 TCID50病毒對(duì)照部分孔出現(xiàn)細(xì)胞病變，0.1 TCID50病毒對(duì)照、陽(yáng)性血清對(duì)照1∶160稀釋度以下細(xì)胞孔和細(xì)胞對(duì)照孔應(yīng)不出現(xiàn)細(xì)胞病變。記錄被檢血清各稀釋度細(xì)胞病變孔數(shù)，以5個(gè)試驗(yàn)孔均未出現(xiàn)細(xì)胞病變的血清最高稀釋度為中和抗體效價(jià)。血清效價(jià)≥1∶10，判為抗體陽(yáng)性。

2 結(jié)果與分析

2.1 羔羊小反芻獸疫母源抗體效價(jià)檢測(cè)結(jié)果

從表1可以看出，羔羊出生后7～45 d血清抗體水平較高（抗體效價(jià)≥1∶40血清比例均大于80%），抗體保護(hù)率達(dá)90%以上，其中7～14 d血清抗體水平最高（抗體效價(jià)≥1∶40血清比例均大于90%），抗體保護(hù)率達(dá)100%。14 d以后血清抗體水平開(kāi)始降低，90 d時(shí)血清抗體保護(hù)率降到了60%，特別是60 d后羔羊血清抗體水平下降較快，可能與該羊場(chǎng)羔羊在60日齡斷奶有關(guān)。

表1 羔羊中和試驗(yàn)血清檢測(cè)結(jié)果

2.2 羔羊小反芻獸疫母源抗體水平動(dòng)態(tài)變化

如圖1所示，羔羊吮乳后母源抗體平均效價(jià)逐漸升高，在14日齡時(shí)達(dá)到高峰，以后逐漸下降。如圖2所示，羔羊母源抗體保護(hù)率7日齡時(shí)達(dá)到峰值（100%），14日齡以后開(kāi)始緩慢下降，60日齡以后下降幅度較大，90日齡時(shí)已降至60%。

圖1 羔羊小反芻獸疫母源抗體平均效價(jià)變化圖

圖2 羔羊小反芻獸疫母源抗體保護(hù)率變化圖

3 討論

OIE將PPR列為法定報(bào)告動(dòng)物疫病，我國(guó)將其列為一類(lèi)動(dòng)物疫病，《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》將其列為重點(diǎn)防范的13種外來(lái)動(dòng)物疫病之一。PPR作為一種重大動(dòng)物疫病，嚴(yán)重威脅我國(guó)的動(dòng)物衛(wèi)生安全和畜牧業(yè)的發(fā)展，為了有效預(yù)防、控制和消滅PPR，我國(guó)采用了大規(guī)模的免疫策略，而免疫方案及免疫評(píng)估的完善則是當(dāng)前防控PPR的重要手段。

首免日齡的選擇對(duì)免疫效果有著重要影響。徐雅萍等［4］的研究結(jié)果表明，湖羊在90日齡以后免疫PPR的效果明顯優(yōu)于90日齡之前。本研究結(jié)果顯示，60日齡（斷奶）后羔羊血清母源抗體水平下降較快，90日齡時(shí)血清抗體保護(hù)率降到了60%，說(shuō)明斷奶時(shí)間與母源抗體水平下降快慢有關(guān)。國(guó)內(nèi)外相關(guān)報(bào)道顯示，PPR母源抗體在羔羊3～4月齡下降到保護(hù)水平以下［5-6］。因此，本試驗(yàn)分析認(rèn)為90日齡以前羔羊受母源抗體影響，母源抗體對(duì)疫苗抗原有部分中和作用，如果在羔羊PPR母源抗體水平較高的時(shí)候接種活疫苗，不但不能激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)抗體，反而會(huì)使機(jī)體內(nèi)抗體水平更低。所以，對(duì)于經(jīng)免場(chǎng)PPR的最佳免疫時(shí)間應(yīng)選擇在斷奶后30日齡（60日齡斷奶，90日齡免疫；90日齡斷奶，120日齡免疫）左右，過(guò)早很有可能會(huì)造成免疫失敗，過(guò)晚則抗體空檔期太長(zhǎng)，增加感染風(fēng)險(xiǎn)。

評(píng)價(jià)PPR抗體保護(hù)力分群體和個(gè)體，群體用抗體保護(hù)率（≥70%）表示，個(gè)體用抗體效價(jià)（≥1∶10）表示。本試驗(yàn)結(jié)果表明，羔羊出生后7～45 d血清抗體水平較高（抗體效價(jià)≥1∶40血清比例均大于80%），抗體保護(hù)率達(dá)90%以上；羔羊出生后60 d時(shí)，抗體效價(jià)≥1∶40血清比例僅為50%（10/20），抗體保護(hù)率85%；羔羊出生后90 d時(shí)，抗體效價(jià)≤1∶10血清比例上升為40%（8/20），而抗體效價(jià)≥1∶40血清比例降為0%，抗體保護(hù)率降至60%。說(shuō)明中和試驗(yàn)抗體效價(jià)高低與群體抗體保護(hù)率呈正比。

綜上所述，羔羊PPR免疫日齡應(yīng)根據(jù)羔羊母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律及抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果確定。在羔羊母源抗體降低到保護(hù)的最低臨界值（抗體效價(jià)在1∶10時(shí);群體保護(hù)率在70%以下）時(shí)進(jìn)行首免是合理的，這樣，既能避免母源抗體的干擾，又能避免出現(xiàn)免疫空白期。

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［2］ 宋建德，袁麗萍，劉陸世，等.全球小反芻獸疫流行狀況和防控策略［J］.中國(guó)動(dòng)物檢疫，2015，32（7）：8-12.

［3］ 信愛(ài)國(guó)，楊仁標(biāo)，向文彬.小反芻獸疫研究進(jìn)展［J］.中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2003，25（2）：152-154.

［4］ 徐雅萍，邱寒峰，俞乾挺，等.小反芻獸疫疫苗對(duì)不同日齡湖羊的免疫效果研究［J］.中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2016，38（8）：646-648.

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S826.7

A

2095-3887（2017）04-0043-03

10.3969/j.issn.2095-3887.2017.04.012

2017-04-19

2015年農(nóng)六師五家渠市科技計(jì)劃和重大科技專(zhuān)項(xiàng)計(jì)劃項(xiàng)目（1515號(hào)）

張子榮（1980-），男，獸醫(yī)師，本科，主要從事動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與防治研究。

馬長(zhǎng)賓（1982-），男，獸醫(yī)師，碩士，主要從事動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與防治研究。