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      孤立性纖維性腫瘤/腦膜血管周細(xì)胞瘤中STAT6、PAX8和CD34的表達及意義

      2017-07-31 02:20:27魏建國岑紅兵袁曉露夏丹萍敖啟林
      臨床與實驗病理學(xué)雜志 2017年6期
      關(guān)鍵詞:細(xì)胞核腦膜克隆

      曹 鐘,魏建國,岑紅兵,袁曉露,夏丹萍,敖啟林

      ·短篇論著·

      孤立性纖維性腫瘤/腦膜血管周細(xì)胞瘤中STAT6、PAX8和CD34的表達及意義

      曹 鐘1,魏建國2,岑紅兵1,袁曉露3,夏丹萍1,敖啟林4

      目的 探討STAT6、PAX8和CD34在孤立性纖維性腫瘤(solitary fibrous tumor, SFT)/腦膜血管周細(xì)胞瘤(meningeal hemangiopericytoma, M-HPC)中的表達及意義。方法 采用免疫組化法檢測26例M-HPC、22例神經(jīng)鞘瘤、25例腦膜瘤以及10例腫瘤旁正常腦膜組織中STAT6(單/多克隆)、PAX8及CD34的表達。比較STAT6、PAX8和CD34在診斷M-HPC及其相似腫瘤中的價值。結(jié)果 不論單/多克隆抗體,26例M-HPC中STAT6均呈彌漫核強陽性,陽性率為100%(26/26);57.7%(15/26)的SFT/腦膜HPC中PAX8呈核陽性;92.3%(24/26) 的M-HPC中CD34呈膜陽性;而在其他類型腫瘤及腦膜組織中所有抗體均陰性。相比PAX8和CD34,STAT6抗體具有較高的敏感性。結(jié)論 M-HPC是一種罕見的纖維母細(xì)胞軟組織腫瘤。特別是不典型病例,其形態(tài)學(xué)譜容易與其他間充質(zhì)腫瘤混淆。相比PAX8和CD34,STAT6單/多克隆抗體免疫組化染色能夠更好地闡明M-HPC的免疫表型特征。

      孤立性纖維性腫瘤/腦膜血管周細(xì)胞瘤;單克隆/多克隆抗體;STAT6;PAX8;CD34

      孤立性纖維性腫瘤(solitary fibrous tumor, SFT)是一種少見的纖維母細(xì)胞軟組織腫瘤,WHO(2013)軟組織腫瘤分類認(rèn)為其常發(fā)生于中年人,男女比例相當(dāng)[1]。最初于1931年描述為發(fā)生在胸膜表面的來源于胸膜的纖維性腫瘤,隨后發(fā)現(xiàn)在全身許多部位均可發(fā)生。發(fā)生在腦膜的血管周細(xì)胞瘤(meningeal hemangiopericytoma, M-HPC)形態(tài)與SFT結(jié)構(gòu)類似,具有相同的免疫表型。近年來,利用新一代的基因檢測技術(shù)表明:絕大多數(shù)SFT病例在12q13號染色體發(fā)生NAB2和STAT6基因融合,部分惡性和脂肪瘤樣SFT的腫瘤樣本中也可以檢測到NAB2-STAT6融合轉(zhuǎn)錄本[2]。PAX8基因是成對盒(paired box, PAX)轉(zhuǎn)錄因子家族成員,最近有報道提示部分SFT檢測出PAX8高表達。為此,本文檢測26例M-HPC中STAT6(單克隆/多克隆抗體)、PAX8以及CD34的表達,同時亦對22例神經(jīng)鞘瘤、25例腦膜瘤及10例腫瘤旁正常的腦膜組織中的4種抗體進行檢測。比較4者對診斷M-HPC的敏感性。

      1 材料與方法

      1.1 材料 收集湖北省黃岡市中心醫(yī)院和浙江省紹興市人民醫(yī)院2004年8月~2014年6月期間手術(shù)切除的26例M-HPC、22例神經(jīng)鞘瘤、25例腦膜瘤及10例腫瘤旁正常腦膜組織。26例M-HPC中,男性12例,女性14例,年齡27~70歲,中位數(shù)為45歲,腫瘤直徑4.2~12.5 cm,其中2例有復(fù)發(fā)病史,2例具有惡性特征。

      1.2 方法 標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定,常規(guī)脫水透明浸蠟切片,HE染色,同時行免疫組化染色。對所有標(biāo)本進行免疫組化EnVision兩步法檢測,采用一抗包括:STAT6兔單克隆抗體(稀釋度1 ∶500,Abcam公司,)、STAT6兔多克隆抗體(稀釋度1 ∶1 000,購自美國Santa Crus公司),PAX8兔單克隆抗體、CD34、vimentin、BCL-2、CD99均為工作液,購自北京中杉金橋公司,試劑盒購自福州邁新公司。STAT6、PAX8單克隆抗體經(jīng)1 mmol/L EDTA(pH 9.0)緩沖液,STAT6多克隆抗體經(jīng)10 mmol/L枸櫞酸(pH 6.0)緩沖液高壓抗原修復(fù)后,按照使用說明書進行操作,用已知的PAX8陽性的腎細(xì)胞癌作為陽性對照,用PBS代替一抗作為陰性對照。

      1.3 結(jié)果判定 依據(jù)Schweizer等[3]對STAT6染色結(jié)果判定:染色強度進行半定量分級,根據(jù)腫瘤細(xì)胞核/質(zhì)或膜中出現(xiàn)黃色或棕黃色信號,觀察每張切片中10個具有代表性的高倍視野,計算腫瘤細(xì)胞數(shù),陽性結(jié)果評分分為3類,陰性:0~5%(-);局部陽性:6%~50%(+);彌漫陽性:≥51%()。PAX8、CD34、vimentin、BCL-2和CD99染色結(jié)果的判定也依據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)。

      2 結(jié)果

      2.1 鏡檢 鏡下見22例良性M-HPC腫瘤界限清,部分見假包膜。細(xì)胞形態(tài)善良,呈圓形、卵圓形或短梭形;組織呈隨意性生長模式,出現(xiàn)細(xì)胞密集區(qū)和疏松區(qū),顯著的膠原間質(zhì),“血管外皮瘤”樣血管腔隙(圖1),核分裂罕見。2例復(fù)發(fā)性M-HPC與良性者形態(tài)學(xué)相似,Ki-67增殖指數(shù)10%~20%。2例惡性M-HPC呈浸潤性生長,典型的“血管外皮瘤”樣外觀突然過渡到惡性區(qū)域,細(xì)胞核非典型性,核分裂象>4/10 HPF,部分區(qū)域可見凝固性壞死,細(xì)胞增殖指數(shù)均>20%。

      2.2 免疫表型 26例M-HPC中,CD34陽性率為92.3%(24/26)、BCL-2陽性率為84.6%(22/26)、CD99陽性率為76.9%(20/26)、vimentin陽性率為100%(26/26);上述標(biāo)志物的陽性信號均位于細(xì)胞膜(圖2);CD34在所有22例神經(jīng)鞘瘤、25例腦膜瘤及10例正常腦膜組織中均不表達。26例M-HPC中,STAT6單/多克隆抗體的陽性信號均限于細(xì)胞核(圖3、4),呈彌漫強陽性,其陽性率均為100%(26/26),與患者年齡、性別、腫瘤大小、復(fù)發(fā)與否以及良惡性無關(guān);所有其他類型的腫瘤及腦膜組織均未顯示STAT6陽性信號;其具有100%敏感性。在26例M-HPC中,PAX8陽性信號位于細(xì)胞核(圖5),陽性信號強弱不等,其陽性率為57.7%(15/26);所有其他類型的腫瘤及腦膜組織均未顯示PAX8陽性信號;其具有57.7%的敏感性。

      3 討論

      血管周細(xì)胞瘤,又稱血管外皮瘤。該病變包括了真性周細(xì)胞腫瘤、肌周細(xì)胞瘤和細(xì)胞變異型SFT?,F(xiàn)今,SFT還包括了脂肪變異型、巨細(xì)胞血管纖維瘤型以及去分化/惡性變異型。SFT發(fā)病年齡譜系廣泛,無性別優(yōu)勢,不僅可以發(fā)生在胸膜,是一種解剖學(xué)無處不在的成纖維細(xì)胞腫瘤,78%~88%歸為良性,12%~22%歸為惡性,其復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率為5%~34%。良性SFT組織呈隨意性生長模式、出現(xiàn)細(xì)胞密集區(qū)和疏松區(qū)、顯著的膠原間質(zhì)、“血管外皮瘤”樣的血管腔隙。在脂肪形成的SFT變異型(以前稱為脂肪瘤樣血管外皮瘤)中混雜有成熟的脂肪細(xì)胞,與經(jīng)典的SFT免疫表型相同,但是需與梭形細(xì)胞脂肪瘤鑒別。當(dāng)SFT出現(xiàn)散在的多核巨細(xì)胞時,與巨細(xì)胞血管纖維瘤在形態(tài)學(xué)上發(fā)生重疊,兩者免疫反應(yīng)相似。極少數(shù)情況下,SFT發(fā)生大片的黏液樣變伴顯著的血管和隨機分布的一致性細(xì)胞的圖像與黏液樣/圓形細(xì)胞型脂肪肉瘤非常類似。細(xì)胞性SFT包含一致性小圓細(xì)胞需與尤因肉瘤鑒別。去分化變異型/惡性SFT呈現(xiàn)出經(jīng)典的“血管外皮瘤”區(qū)域突然過渡到高級別肉瘤,細(xì)胞核分裂象>4/10 HPF伴細(xì)胞核非典型性、凝固性壞死、細(xì)胞增殖指數(shù)較高[4]。惡性SFT與單相型滑膜肉瘤、隆突皮膚纖維肉瘤、胃腸間質(zhì)瘤、纖維肉瘤、多形性肉瘤等在形態(tài)上無法區(qū)分。M-HPC與纖維型腦膜瘤、神經(jīng)鞘瘤的形態(tài)也極為類似。因此,對于SFT和上述相似病變的鑒別診斷顯得尤為重要。

      以往認(rèn)為CD34彌漫性細(xì)胞膜強陽性是SFT最重要的特征,但是后來發(fā)現(xiàn)其陽性率僅為81%~95%,少數(shù)病例可以是陰性或者局部陽性;BCL-2和CD99也是診斷SFT的重要標(biāo)志物,陽性率分別為100%和75%;而且在許多與SFT形態(tài)相似的軟組織腫瘤中也可以檢測到上述標(biāo)志物呈陽性[5]。在極少數(shù)情況下,SFT也可以表達EMA、SMA、S-100、CK、desmin。本組26例M-HPC中,CD34的陽性率為92.3%(24/26)、BCL-2的陽性率為84.6%(22/26)、CD99的陽性率為76.9%(20/26)、vimentin的陽性率為100%(26/26)。由于上述指標(biāo)在許多與SFT相似的軟組織腫瘤中也有表達,因此CD34對于診斷M-HPC的特異性和敏感性不強。

      近年來研究發(fā)現(xiàn)在良性和惡性SFT中普遍發(fā)生NAB2-STAT6基因融合,融合的部位位于NAB2中的與早期生長反應(yīng)因子結(jié)合阻遏結(jié)構(gòu)域的C-端和STAT6反式激活結(jié)構(gòu)域,激活了EGR介導(dǎo)的前饋方式轉(zhuǎn)錄,導(dǎo)致其失平衡,從而發(fā)揮致瘤效應(yīng)。NAB2-STAT6基因被認(rèn)為是SFT的特異性基因,在部分SFT/M-HPC和胸腔內(nèi)SFT中可以檢測到NAB2-STAT6基因融合[6-7]。NAB2-STAT6基因融合有多種變異型,最常發(fā)生融合的部位位于NAB2外顯子4與STAT6外顯子2/3之間,其次位于NAB2外顯子6與STAT6外顯子16/17之間[8]。但是,基因檢測價格比較昂貴并且效果不穩(wěn)定。Schweizer等[3]提出利用免疫組化法檢測STAT6蛋白代替融合基因的檢測,NAB2與STAT6基因融合后使細(xì)胞質(zhì)中的STAT6蛋白進入到細(xì)胞核中。因此通過免疫組化法檢測STAT6蛋白能反映出NAB2-STAT6融合基因的信息[9]。STAT6彌漫強陽性細(xì)胞核的表達對于診斷SFT和鑒別其他的軟組織腫瘤具有較高的敏感性和特異性。目前,STAT6有單克隆和多克隆兩種抗體,兩者對于診斷SFT具有不同的敏感性和特異性。對于STAT6多克隆抗體,研究顯示89%~98%的SFT和所謂的“M-HPC”中STAT6在細(xì)胞核免疫反應(yīng)陽性[3,10]。Yoshida等[9]采用STAT6多克隆抗體檢測49例SFT及其159例相似腫瘤發(fā)現(xiàn):在SFT中,不論其發(fā)生部位以及組織學(xué)形態(tài),STAT6呈100%(49/49)核強陽性表達;相比而言,僅有(4/159)2.5%的非SFT腫瘤顯示核/質(zhì)為弱陽性,其余155例未表達。Demicco等[11]檢測2 366例間充質(zhì)腫瘤后發(fā)現(xiàn):除了240例SFT中的206例檢測出STAT6表達外,還檢測出在高分化/去分化脂肪肉瘤(49/408)、未分類肉瘤(8/65)和纖維瘤病(14/184)中核/質(zhì)呈陽性表達。在其他的軟組織腫瘤也會有STAT6核/質(zhì)陽性表達的具體機制還不甚明了。相比多克隆抗體,STAT6單克隆抗體的特異性和敏感性更高。Cheah等[12]利用STAT6單克隆抗體檢測54例SFT及其他相似病變發(fā)現(xiàn):在SFT中,STAT6呈100%陽性,而在細(xì)胞性血管纖維瘤、肌纖維母細(xì)胞瘤、梭形細(xì)胞脂肪瘤等其他腫瘤均未見表達,顯示100%特異性和100%敏感性,是一種強有力的診斷標(biāo)志物。本組26例M-HPC中,不論單/多克隆抗體,STAT6的陽性信號均位于細(xì)胞核,呈彌漫強陽性,其陽性率為100%(26/26);STAT6在所有其他類型的腫瘤和正常腦膜中均不表達,顯示出100%的敏感性。

      ①②③④⑤圖1 鏡下腫瘤呈“血管外皮瘤”樣外觀圖2 腫瘤細(xì)胞CD34呈細(xì)胞膜彌漫陽性,EnVision法 圖3 腫瘤細(xì)胞STAT6呈細(xì)胞核彌漫強陽性,EnVision法 圖4 惡性腫瘤細(xì)胞STAT6呈細(xì)胞核陽性,EnVision法 圖5 腫瘤細(xì)胞PAX8呈細(xì)胞核彌漫強陽性,EnVision法

      PAX8蛋白屬于配對盒成員轉(zhuǎn)錄因子家族成員,該蛋白在甲狀腺、腎臟及米勒管形成過程中起重要作用?,F(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)PAX8在卵巢、腎臟、膀胱、甲狀腺及胸腺等上皮性腫瘤中呈過表達,而在乳腺、肺及間皮腫瘤則不表達,因此對于判斷轉(zhuǎn)移癌的原發(fā)部位和鑒別診斷是很好的標(biāo)志物,在軟組織腫瘤中的表達情況鮮有相關(guān)研究。McDaniel等[13]檢測了41例已經(jīng)證實CD34陽性的SFT中PAX8的表達,結(jié)果顯示26.8%和45.6%的SFT分別呈局部和彌漫陽性,其陽性率與患者年齡、腫瘤大小、部位、惡性與否以及復(fù)發(fā)無關(guān)。在NAB2-STAT6基因融合的腎臟SFT中也發(fā)現(xiàn)了PAX8呈彌漫強陽性[14]。本實驗結(jié)果顯示,在26例M-HPC中,PAX8陽性信號位于細(xì)胞核,其陽性率為57.7%(15/26),而其他類型的腫瘤均未見其信號,顯示出57.7%的敏感性,其敏感性低于STAT6(100%)和CD34(92.3%)。雖然對于PAX8在SFT中的表達機制還不清楚,但是容易造成診斷陷阱,因此必須排除轉(zhuǎn)移性伴有肉瘤樣或梭形細(xì)胞形態(tài)的癌。

      綜上所述,免疫組化檢測STAT6、PAX8和CD34在診斷和鑒別診斷SFT/M-HPC上有幫助。相比PAX8和CD34,利用STAT6單/多克隆抗體具有更高的敏感性,是一種理想的生物學(xué)標(biāo)志物。

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      1湖北省黃岡市中心醫(yī)院病理科,黃岡 4380002浙江省紹興市人民醫(yī)院病理科,紹興 3120003湖北省孝感市中心醫(yī)院病理科,孝感 4320004華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬同濟醫(yī)院病理研究所/同濟醫(yī)學(xué)院病理學(xué)系,武漢 430030

      曹 鐘,男,碩士,副主任醫(yī)師。Tel: (0713)8625273, E-mail: caozhong1980@sina.om 敖啟林,男,副教授,碩士生導(dǎo)師,通訊作者。E-mail: aoqilin@263.net

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      1001-7399(2017)06-0669-03

      10.13315/j.cnki.cjcep.2017.06.017

      接受日期:2017-02-07

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