干熱和藥劑處理對瓠瓜種子CGMMV的抑制效果

韋海忠，吳新義，吳曉花，楊新琴，徐 沛，魯忠富，余曉虹，李國景*

(1.臺州科技職業(yè)學(xué)院，浙江 臺州 318000； 2.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 蔬菜研究所，浙江 杭州 310021；3.浙江省種植業(yè)管理局，浙江 杭州 310020)

干熱和藥劑處理對瓠瓜種子CGMMV的抑制效果

韋海忠1，吳新義2，吳曉花2，楊新琴3，徐 沛2，魯忠富2，余曉虹2，李國景2*

(1.臺州科技職業(yè)學(xué)院，浙江 臺州 318000； 2.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 蔬菜研究所，浙江 杭州 310021；3.浙江省種植業(yè)管理局，浙江 杭州 310020)

CGMMV是瓠瓜上的一種重要病害，對瓠瓜種子進行消毒是防治的關(guān)鍵。本研究利用ELISA檢測技術(shù)，分析比較干熱處理和藥劑處理對鈍化種子中CGMMV的效果，發(fā)現(xiàn)兩者均能有效鈍化種子中的CGMMV。但干熱處理后的種子隨著放置時間的延長，發(fā)芽率會急劇下降，而藥劑處理對種子發(fā)芽率的影響較小。

瓠瓜； CGMMV； 干熱處理； 藥劑處理

黃瓜綠斑駁花葉病毒(Cucumber green mottle mosaic virus，CGMMV)屬于蕪菁花葉病毒科煙草花葉病毒屬的一種，主要侵染黃瓜、西瓜、甜瓜、瓠瓜、南瓜等葫蘆科作物，引起葉片斑駁褪綠、花葉，果實出現(xiàn)水漬、纖維化[1]。CGMMV最早于1935年在英國黃瓜上發(fā)現(xiàn)，隨后在德國、芬蘭等許多國家都有報道[2-3]。CGMMV曾在日本和韓國大面積爆發(fā)，對兩國的西瓜和甜瓜生產(chǎn)造成毀滅性打擊，至今仍是生產(chǎn)中的嚴(yán)重問題[4-5]。2003年，該病在我國東北地區(qū)的西瓜和黃瓜田間首次發(fā)現(xiàn)，2005年在遼寧省爆發(fā)，造成西瓜產(chǎn)量大面積減產(chǎn)[6]，截至目前在我國十多個省份的葫蘆科作物上都檢測到CGMMV病毒[7]。CGMMV傳播迅速、危害嚴(yán)重，世界上許多國家和地區(qū)將其列為重要的檢疫性病毒，我國于2006年將之確定為全國農(nóng)業(yè)植物檢疫性有害生物，屬國家三類檢疫性病害[8]。

瓠瓜[Lagenariasiceraria(Molina) Standl.]又名瓠子、長瓜、蒲瓜、夜開花、葫蘆等，隸屬葫蘆科葫蘆屬，主食其嫩果，是我國南方地區(qū)夏季重要的瓜類蔬菜，也是嫁接黃瓜、西瓜等首選的砧木[9]。在我國，瓠瓜栽培已經(jīng)有7 000多年的歷史，目前全國栽培總面積超過20萬hm2。近年來，在江蘇的露地瓠瓜、湖南的砧木瓠瓜上相繼發(fā)現(xiàn)CGMMV癥狀的病株，且已經(jīng)證實為CGMMV病毒[10-11]。帶毒種子是CGMMV遠(yuǎn)距離傳播定殖的重要途徑，加強種子檢測是防治該病害的關(guān)鍵措施之一。本研究采用干熱處理和藥劑處理方法對瓠瓜種子進行消毒，對其消毒效果和種子發(fā)芽率進行比較研究，進而選擇適合瓠瓜種子大規(guī)模處理、簡單有效的消毒方法。

1 材料與方法

1.1 供試材料

從農(nóng)戶田間出現(xiàn)CGMMV典型癥狀的植株上采摘瓠瓜成熟果實，剖取種子后備用。

1.2 干熱處理

將病毒瓜中剖取的種子清洗、晾干后，平鋪于恒溫恒濕試驗箱中(深圳歐朗，OL-THS-200T)，參照馬凱慧等[12]建議的程序進行干熱處理。種子加熱至35 ℃恒溫處理24 h，加熱升溫至50 ℃處理24 h，再加熱至72 ℃處理72 h，最后自然降溫至室溫后結(jié)束處理。

1.3 藥劑處理

將剖取出的濕種子直接用蘇納米100(藝康化工有限公司)稀釋80倍的工作液浸泡40～60 min，期間攪動數(shù)次，保證種子能充分的浸透，最后用清水漂洗2遍，自然曬干。

1.4 CGMMV專化的ELISA檢測

利用雙抗體夾心ELISA方法檢測未處理、經(jīng)干熱處理和藥劑處理的種子中CGMMV病毒，每處理檢測5份樣品，每份樣品稱取1 g種子，研磨碎后加10 mL提取液，按試劑盒(安德珍(ADGEN)生物技術(shù)有限公司)說明逐步操作，最后利用Molecular Devices酶標(biāo)儀檢測405 nm光波下的吸光值。若樣本吸光值超過陰性對照吸光值的2倍以上，即確定為CGMMV陽性。此外，將未處理、經(jīng)干熱處理和藥劑處理的種子播于穴盤中發(fā)苗，設(shè)置光周期為16∶8，溫度控制在25～30 ℃，待長至一葉一心期后從根部剪下，用ELISA方法檢測其CGMMV病毒含量。

1.5 種子發(fā)芽試驗

取干熱處理和藥劑處理后的種子，每處理重復(fù)2次，每個重復(fù)50粒種子，置于濕潤的細(xì)沙中28 ℃恒溫培育，4 d后統(tǒng)計發(fā)芽率。按相同方法分別對經(jīng)干熱處理和藥劑處理后常溫放置1、2、3、4個月后的種子作發(fā)芽試驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 干熱處理和藥劑處理的效果

從圖1可以看出，在未處理、經(jīng)干熱處理和藥劑處理情況下，從病毒瓜中剖出的種子中均能檢測到CGMMV病毒，說明處理后的種子依然攜帶CGMMV病毒殘體。隨機檢測182株經(jīng)干熱處理種子獲得的實生苗，除1株表現(xiàn)為陽性外(405 nm下吸光值為陰性對照的3.73倍)，其他單株的CGMMV均為陰性；在經(jīng)藥劑處理后獲得的193株實生苗中，除1株為陽性外(405 nm下吸光值為陰性對照的2.9倍)，其他均為陰性；隨機檢測的63株未處理的實生苗，其中34株為陽性(405 nm下吸光值為陰性對照的2倍以上)。未處理、干熱處理和藥劑處理后植株的傳毒率為53.97%，0.55%和0.52%，這說明干熱處理和藥劑處理均能有效抑制種子中CGMMV病毒，二者對病毒的鈍化效果基本一致。

圖1 不同處理種子中CGMMV病毒在405 nm波長下的吸光值

2.2 種子芽率檢測

如圖2所示，干熱處理后的種子，在1個月內(nèi)其芽率無明顯變化，但隨著時間的推移，芽率快速下降，在4個月后芽率下降幅度達(dá)到12%。放置1～4個月，藥劑處理的種子芽率無明顯變化，說明干熱處理對種子的芽率影響較大。

圖2 種子經(jīng)干熱和藥劑處理后的芽率隨時間的變化

3 討論

瓠瓜是浙江省的特色優(yōu)勢作物，提供干凈無毒的瓠瓜種子是當(dāng)前防治瓠瓜CGMMV的主要措施。本研究采用干熱處理和藥劑處理兩種方法對瓠瓜種子進行消毒，并結(jié)合實生苗的DAS-ELISA檢測發(fā)現(xiàn)，CGMMV在種子中的帶毒率較高，但消毒后在實生苗中的傳毒率很低(0.55%和0.52%)，這與西瓜、甜瓜中的研究結(jié)果一致，說明CGMMV以種子表面帶毒為主[13]。國外研究表明，干熱處理可大大減輕發(fā)病程度，是鈍化CGMMV最有效的方法[14]。一般干熱處理的周期為1周時間，1臺機器1次只能處理150 kg左右，而且不同品種、不同成熟度的種子經(jīng)干熱處理后，其發(fā)芽率會受到不同程度的影響[15]。

本研究結(jié)果也表明，雖然干熱處理1個月內(nèi)種子芽率基本不受影響，但處理3個月后種子發(fā)芽率會急劇降低。因此，干熱處理后的種子應(yīng)盡快播種。鑒于干熱處理的諸多局限，根據(jù)CGMMV以種子表面帶毒為主的特點，本研究探索了藥劑處理對CGMMV的鈍化效果。研究發(fā)現(xiàn)，從種子消毒到最后的實生苗檢測，可達(dá)到與干熱處理完全一致的效果。此外，藥劑處理不受機器的限制，可大批量連續(xù)處理，而且對種子發(fā)芽率的影響較小。因此，在生產(chǎn)中利用藥劑處理代替干熱處理對種子進行消毒是可行的。

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(責(zé)任編輯：張瑞麟)

2017-04-07

高等學(xué)校訪問工程師校企合作項目和公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(201403032)；浙江省農(nóng)科院青年人才培養(yǎng)項目(2016R23R08E04)

韋海忠(1968—)，男，浙江東陽人，碩士，副教授，研究方向為蔬菜栽培，E-mail:hzwei910@126.com。

李國景(1966—)，男，浙江東陽人，研究員，博士，研究方向為蔬菜育種與栽培技術(shù)研究，E-mail:ligj@mail.zaas.ac.cn。

10.16178/j.issn.0528-9017.20170611

S436

B

0528-9017(2017)06-0942-03

文獻(xiàn)著錄格式：韋海忠，吳新義，吳曉花，等. 干熱和藥劑處理對瓠瓜種子CGMMV的抑制效果[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，58(6)：942-944.