黑果腺肋花楸不定芽誘導(dǎo)與增殖研究

趙健竹，孫曉澤*，辛廣，張文穎，劉影

（1.鞍山師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，遼寧鞍山114007；2.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，遼寧沈陽110866）

黑果腺肋花楸不定芽誘導(dǎo)與增殖研究

趙健竹1，孫曉澤1*，辛廣2，張文穎1，劉影1

（1.鞍山師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，遼寧鞍山114007；2.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，遼寧沈陽110866）

本研究以黑果腺肋花楸為試驗(yàn)材料，分別選取莖尖、莖段及葉片作為外植體，接種到不同植物激素種類及濃度配比的培養(yǎng)基上，進(jìn)行誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)。結(jié)果表明：莖尖誘導(dǎo)不定芽效率最高，效果最好，莖段和葉片作為外植體誘導(dǎo)率很低，確定莖尖是不定芽誘導(dǎo)的最理想材料；莖尖誘導(dǎo)的最適培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0毫克/升+NAA 0.5毫克/升，誘導(dǎo)率達(dá)96.7%；不定芽增殖的最適培養(yǎng)基為MS+6-BA 3毫克/升+NAA 0.5毫克/升，平均增殖倍數(shù)為10.89。

黑果腺肋花楸；外植體；培養(yǎng)基；誘導(dǎo)；增殖

黑果腺肋花楸，是集食用、藥用、園林綠化和生態(tài)價(jià)值于一體的珍貴樹種，適應(yīng)性強(qiáng)、結(jié)果早、經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，市場(chǎng)前景巨大[1]。20世紀(jì)90年代，黑果腺肋花楸被引入我國，并定植于遼西地區(qū)[2]。因其傳統(tǒng)的播種、扦插繁殖困難，野生資源破壞嚴(yán)重，目前綠化需求量大，應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)可以獲取大量組培苗，促進(jìn)規(guī)?；a(chǎn)，供應(yīng)市場(chǎng)。

藥用價(jià)值：果實(shí)及其提取物具有保健作用，對(duì)心臟病、高血壓等疾病的治療有顯著效果，普遍應(yīng)用于功能食品和醫(yī)藥工業(yè)[3]；觀賞價(jià)值：由于樹形優(yōu)美、觀賞期長(zhǎng)，是春天觀葉、夏天看花、秋天看果的優(yōu)質(zhì)綠化樹種，可單獨(dú)種植，或者大量種植在草坪、庭院、路旁等地方[4]；生態(tài)價(jià)值：黑果腺肋花楸抗旱性較強(qiáng)，生長(zhǎng)所需水分很少，在干旱地區(qū)完全可以存活，淺根系發(fā)達(dá)，吸枝萌蘗力強(qiáng)，對(duì)表層土壤固持力強(qiáng)，病蟲害少，抗風(fēng)害和冰雹災(zāi)害，生命周期較長(zhǎng)，具有良好的保持水土效果，生態(tài)穩(wěn)定能力強(qiáng)[5]。

1 材料與方法

本研究以莖尖、莖段、葉片三種外植體為基本材料，對(duì)黑果腺肋花楸不定芽進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。再以莖尖為外植體，分別接種到9種不同的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，利用莖尖為外植體，直接誘導(dǎo)獲得不定芽，將不定芽進(jìn)行增殖培養(yǎng)，提高增殖系數(shù)，從而獲得大量組培苗。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同外植體對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響

將黑果腺肋花楸莖尖、葉片及莖段分別接種到M S+ 6-B A2.0毫克/升+N AA0.5毫克/升培養(yǎng)基中，經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)30天后，觀察并統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)成活的外植體個(gè)數(shù)，計(jì)算出不同外植體的誘導(dǎo)率，見表1。

表1 不同外植體對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響

從表1可以看出：莖尖對(duì)不定芽的誘導(dǎo)率最高，為93.30%，莖段對(duì)不定芽的誘導(dǎo)率較低，為43.33%，而葉片對(duì)不定芽的誘導(dǎo)率為0。

三種外植體接種后，堅(jiān)持每天觀察外植體的變化情況，莖尖在接種9天后可見接種的莖尖向上生長(zhǎng)，在基部有小的凸起為萌動(dòng)的不定芽，13天后可明顯地觀察到小的不定芽；莖段在接種20天后，可見部分莖段出現(xiàn)變化；葉片接種后一直進(jìn)行觀察，無明顯變化，其不定芽誘導(dǎo)率最低。由此得出，莖尖對(duì)不定芽的誘導(dǎo)率最高，為93.30%，莖尖是不定芽誘導(dǎo)的最理想材料。

2.2 不同培養(yǎng)基對(duì)莖尖誘導(dǎo)成活的影響

將莖尖分別接種到9種以M S為基本培養(yǎng)附加不同植物激素種類及濃度的完全培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，優(yōu)選莖尖誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基，觀察并記錄得到誘導(dǎo)成活率，見表2。

表2 不同外源激素組合對(duì)莖尖誘導(dǎo)成活情況

從表2看出，莖尖最佳的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為M S+6-B A 2.0毫克/升+N AA 0.5毫克/升，誘導(dǎo)率為93.30%，誘導(dǎo)率最高，誘導(dǎo)效果最好。

2.3 不同培養(yǎng)基對(duì)不定芽增殖的影響

經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得的不定芽，再分別接種到以M S為基本培養(yǎng)基附加不同濃度6-B A和N AA配比制成的6種培養(yǎng)基上，接種情況及增殖結(jié)果，見表3。

表3 不同外源激素組合對(duì)不定芽增殖的影響

經(jīng)增殖培養(yǎng)17天后，可觀察到不定芽增殖分化出叢生芽，培養(yǎng)至25天，繼續(xù)分苗，統(tǒng)計(jì)每個(gè)不定芽分化出的苗數(shù)，并轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上，進(jìn)行繼2代培養(yǎng)。將誘導(dǎo)獲得的不定芽轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基情況，見圖1；不定芽轉(zhuǎn)接后，經(jīng)增殖培養(yǎng)25天分化出叢生芽情況，見圖2。

結(jié)合表3、圖1和圖2，不定芽分別轉(zhuǎn)接到6種由不同外源激素組合的M S培養(yǎng)基中，不定芽增殖的最適培養(yǎng)基為M S+6-B A 3毫克/升+N AA 0.5毫克/升，增殖倍數(shù)為10.89。

圖1 黑果腺肋花楸不定芽轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基情況

圖2 黑果腺肋花楸不定芽轉(zhuǎn)接后分化出叢生芽情況

3 討論

本試驗(yàn)分別采取黑果腺肋花楸莖尖、葉片及莖段為外植體進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)，莖尖誘導(dǎo)率最高，而葉片誘導(dǎo)不定芽無變化，結(jié)果表示不同外植體對(duì)不同激素的選擇性很大；在相同的基本培養(yǎng)基條件下，6-B A和N AA的濃度對(duì)芽增殖效果影響很大，對(duì)于黑果腺肋花楸不定芽增殖的最佳培養(yǎng)基為M S+6-B A 3毫克/升+N AA 0.5毫克/升。

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1.3 不易產(chǎn)生耐藥性及藥物殘留

目前，養(yǎng)殖業(yè)普遍存在添加抗生素和化學(xué)合成藥物濫用的現(xiàn)象，尤其在飼料中長(zhǎng)期微量添加抗生素的情況下，更易導(dǎo)致耐藥性和藥物殘留的產(chǎn)生。而中草藥添加劑是通過“扶正驅(qū)邪”提高動(dòng)物機(jī)體自身的抵抗力，從而達(dá)到消除病菌的效果，因此，不易產(chǎn)生耐藥性，也不會(huì)導(dǎo)致藥物殘留。

1.4 中草藥功能齊全

中草藥具有營(yíng)養(yǎng)作用，牛為草食動(dòng)物，中草藥中所含的纖維素、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、礦物質(zhì)、維生素等可以為肉牛生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)；能夠提高免疫力，如常用的補(bǔ)益方劑四君子湯、六味地黃湯和四物湯等，對(duì)機(jī)體體液免疫和細(xì)胞免疫都有促進(jìn)作用；中草藥具有類激素作用，可調(diào)節(jié)機(jī)體新陳代謝，如黃芪可增強(qiáng)細(xì)胞的生理代謝活動(dòng)，桂皮、胡椒、茴香等中草藥可提高育肥豬的食欲、增強(qiáng)其抗病能力、促進(jìn)生長(zhǎng)。有些中草藥還具有抑菌、抗菌、驅(qū)蟲等作用，是極好的抗生素替代品，如板藍(lán)根、黃柏、黃芩、大蒜等，對(duì)大多細(xì)菌、真菌等都具有抑制或殺滅作用。如青蒿、檳榔、南瓜子亦是天然的驅(qū)蟲藥。

2 中草藥添加劑可提高肉牛生產(chǎn)性能

常見用于肉牛飼料添加劑的中草藥方劑有健胃散、溫脾散、扶正解毒散、清瘟敗毒散等，其組方絕大多數(shù)都具有健脾、開胃、消食下氣、補(bǔ)益氣血、提高免疫力等功效。常見使用于中草藥飼料添加劑的組方藥物有山楂、麥芽、神曲、厚樸、白術(shù)、黃芪、當(dāng)歸、肉桂、魚腥草、檳榔等。將該類中草藥添加于肉牛的日糧中可增進(jìn)食欲、促進(jìn)生長(zhǎng)，增加屠宰率，明顯提高肉牛的生產(chǎn)性能。同時(shí)，中草藥添加劑由于其天然性、無毒副作用及對(duì)免疫機(jī)能的提升，將其應(yīng)用于肉牛飼料中，可以減少肉牛生長(zhǎng)及養(yǎng)殖過程中，因疾病和抗生素濫用而導(dǎo)致的生長(zhǎng)發(fā)育遲緩。

3 中草藥添加劑可提高牛肉品質(zhì)

首先，中草藥添加劑能提高動(dòng)物胴體的瘦肉率。中草藥中含有的蛋白質(zhì)、脂肪、微量元素、甜菜堿及膽堿等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，能促進(jìn)蛋白質(zhì)的消化吸收和沉積，從而使動(dòng)物機(jī)體增“瘦”減“肥”；其次，中草藥可通過降低牛肉中的膽固醇含量，提高牛肉的品質(zhì)。如大黃、決明子、虎杖、刺五加等，可通過促進(jìn)脂類轉(zhuǎn)動(dòng)和排泄，增加脂肪的排出，減少外源性膽固醇的吸收。澤瀉、絞股藍(lán)、大蒜等，可通過減少內(nèi)源性脂類的合成，降低膽固醇的合成。另外，中草藥添加劑可增加肉產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。中草藥中富含動(dòng)物機(jī)體所需的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，作為添加劑可補(bǔ)充、完善和平衡飼料的營(yíng)養(yǎng)成分，其中部分有益成分可在肌肉組織中沉積，提高牛肉的品質(zhì)，如茶葉可成倍提高肉中的維生素E含量，杜仲可提高肌肉中肌原蛋白的含量，改善牛肉品質(zhì)。

4 中草藥添加劑可增加肉牛的免疫機(jī)能

中草藥的滋補(bǔ)類藥物和部分扶正祛邪類藥物，能提高動(dòng)物機(jī)體特異性和非特異性免疫系統(tǒng)功能，增強(qiáng)免疫力，利用中草藥對(duì)動(dòng)物機(jī)體的陰陽整體狀況進(jìn)行調(diào)節(jié)，使之趨于平衡，可達(dá)到“正氣存內(nèi)，邪不可干”的效果。同時(shí)，該類中草藥還可影響機(jī)體血液生化指標(biāo)，改善機(jī)體整體生理機(jī)能狀況。實(shí)踐中，常見的增強(qiáng)機(jī)體免疫力的中草藥有黃芪、黨參、金銀花、當(dāng)歸、白術(shù)、甘草、淫羊霍、穿心蓮、板藍(lán)根、魚腥草等。高輝等人采用不同的補(bǔ)益混合方劑添加到犢牛的日糧中，研究中草藥添加劑對(duì)犢牛免疫功能及血液生化指標(biāo)的影響，結(jié)果表明，試驗(yàn)組血清中I g G、I g A水平顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），試驗(yàn)組血清總膽固醇顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），同時(shí)低密度脂蛋白水平低于對(duì)照組、高密度脂蛋白高于對(duì)照組，表明中草藥添加劑能顯著提高犢牛的免疫機(jī)能，改善肝功能。周學(xué)輝等人采用不同劑量的中草藥添加劑飼喂河西肉牛，觀測(cè)中草藥添加劑對(duì)血液生化指標(biāo)的影響，結(jié)果也同樣表明中草藥飼料添加劑對(duì)肉牛營(yíng)養(yǎng)狀況、血液生化指標(biāo)有良好影響，且高劑量組肉牛效果更為明顯。

5 中草藥添加劑防治牛病

5.1 中草藥的抑菌、驅(qū)蟲、抗病毒作用

許多中草藥具有抗菌、抗病毒、驅(qū)寄生蟲等作用，其作用機(jī)制主要包括兩個(gè)方面：一是藥物有直接抑菌、殺菌作用，能直接有效抑制或殺滅侵入體內(nèi)的微生物或寄生蟲；二是通過“扶正祛邪”機(jī)理，中草藥通過扶植機(jī)體正氣，提高機(jī)體防御機(jī)能、免疫功能、抗氧化水平等，祛除病邪，達(dá)到抵御疾病的效果。常見的抗菌、抗病毒的中草藥有板藍(lán)根、蒲公英、黃連、黃柏、黃芪、金銀花、野菊花、魚腥草、大蒜、苦參、穿心蓮等；常見的抗驅(qū)蟲劑有檳榔、大蒜、青蒿、檳榔、石榴皮等。將這些純天然的中草藥作為添加劑飼喂，可以有效替代抗生素的使用，既保障了對(duì)牛的瘤胃零傷害，也減少了耐藥性和藥物殘留的產(chǎn)生。

5.2 中草藥對(duì)牛普通病的防治作用

系統(tǒng)考慮肉牛飼養(yǎng)管理環(huán)境，綜合運(yùn)用中醫(yī)及中藥理論體系，辨明癥候后合理利用方劑，并配伍成特殊需要的飼料添加劑，可以有效預(yù)防和治療肉牛各種常見疾病。如肉牛消化系統(tǒng)常見前胃遲緩、瘤胃積食等病癥，可通過添加神曲、麥芽、陳皮等消食、理氣、行滯的中草藥進(jìn)行防治；夏天通過添加薄荷、荷葉、淡竹葉、金銀花等疏散風(fēng)熱、清熱解暑的中草藥，可有效防治風(fēng)熱感冒并減少熱應(yīng)激；母牛產(chǎn)后乏情可采用淫羊藿、當(dāng)歸、益母草、陽起石、香附、菟絲子等中草藥組成的催情散方劑進(jìn)行調(diào)理。只要結(jié)合整體觀念、辨明癥候，并合理選用中草藥組方，便可做到“未病先防”和“既病防變”的作用。

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作者簡(jiǎn)介：鄒振興，碩士，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，研究方向：臨床獸醫(yī)學(xué)。

鞍山市科學(xué)技術(shù)局項(xiàng)目（2013SY09）；遼寧省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃資助項(xiàng)目（2015101690019）

R284

A

10.14025/j.cnki.jlny.2017.13.020

趙健竹，在讀本科生，研究方向：生物學(xué)。

孫曉澤，碩士，講師，研究方向：植物栽培與繁育。分中草藥都無毒副作用，是良好的“綠色”飼料添加劑。