吡唑醚菌酯及其復(fù)配藥劑對(duì)馬鈴薯晚疫病的毒力測(cè)定及藥效試驗(yàn)

張子易，周 倩

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院/植物病蟲害生物學(xué)與防控湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長(zhǎng)沙 410128）

吡唑醚菌酯及其復(fù)配藥劑對(duì)馬鈴薯晚疫病的毒力測(cè)定及藥效試驗(yàn)

張子易，周 倩

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院/植物病蟲害生物學(xué)與防控湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長(zhǎng)沙 410128）

為了篩選出吡唑醚菌酯與其他藥劑混配對(duì)防治馬鈴薯晚疫病的較好配方，延緩抗藥性的產(chǎn)生，采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了吡唑醚菌酯與氟吡菌胺復(fù)配，以及吡唑醚菌酯與百菌清復(fù)配對(duì)馬鈴薯晚疫病菌的聯(lián)合毒力，從中篩選出具有較好抑制作用的配方，并通過(guò)田間藥效試驗(yàn)評(píng)價(jià)了復(fù)配藥劑對(duì)馬鈴薯晚疫病的防治效果。試驗(yàn)結(jié)果表明：在離體條件下所有復(fù)配組合均對(duì)抑制馬鈴薯晚疫病菌表現(xiàn)相加作用，當(dāng)吡唑醚菌酯與氟吡菌胺的混配比例為1∶5時(shí)，增效系數(shù)最大，為1.29；當(dāng)吡唑醚菌酯與百菌清的混配比例為9∶1時(shí)，增效系數(shù)最大，為1.26。在田間藥效試驗(yàn)中，兩種復(fù)配藥劑對(duì)馬鈴薯晚疫病具有良好的防治效果，田間防效分別達(dá)到86.50%和87.40%。

吡唑醚菌酯；馬鈴薯晚疫病；抗藥性；生長(zhǎng)速率法；防治效果；藥效試驗(yàn)

馬鈴薯晚疫病是由致病疫霉Phytophthora infestans（Mont.） de Bary引起的，可導(dǎo)致馬鈴薯莖葉死亡和塊莖腐爛，造成馬鈴薯產(chǎn)量和品質(zhì)的大幅度下降，嚴(yán)重時(shí)引起絕收，是阻礙馬鈴薯產(chǎn)業(yè)發(fā)展的頭號(hào)病害［1-2］。當(dāng)前，培育抗病品種與采用化學(xué)藥劑防治是世界各國(guó)防治馬鈴薯晚疫病的主要方法，研究者在馬鈴薯抗晚疫病的抗病育種研究、遺傳工程研究及馬鈴薯晚疫病菌互作的生物化學(xué)研究等方面取得了突破性進(jìn)展，但還未在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)用推廣，因此，采取有效的化學(xué)防治仍是生產(chǎn)上防治馬鈴薯晚疫病的主要手段，也是確保馬鈴薯高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)的重要措施［3］。

在化學(xué)防治過(guò)程中，由于長(zhǎng)期的大量使用單一藥劑進(jìn)行防治，馬鈴薯晚疫病菌的抗藥性問(wèn)題隨之顯現(xiàn)并日趨嚴(yán)重，主要體現(xiàn)在以甲霜靈為代表的苯基酰胺類殺菌劑上，其他具有單一作用位點(diǎn)的內(nèi)吸性殺菌劑也存在較高的抗性風(fēng)險(xiǎn)［4-5］。2016年王騰等對(duì)采自黑龍江的143株馬鈴薯晚疫病菌進(jìn)行甲霜靈敏感性測(cè)定，結(jié)果顯示僅有7.69%的菌株對(duì)甲霜靈表現(xiàn)敏感［6］。病原菌的抗藥性影響了藥劑的防治效果，同時(shí)由于被迫加大用藥次數(shù)與用藥量也使得作物藥劑殘留明顯增加，這已成為當(dāng)前馬鈴薯晚疫病化學(xué)防治面臨的突出問(wèn)題之一。

將不同作用機(jī)理的藥劑合理混配使用，是目前延緩病菌抗藥性產(chǎn)生、延長(zhǎng)藥劑使用壽命的主要手段［7］，主要是由于病原菌對(duì)混合藥劑產(chǎn)生抗藥性需要滿足兩個(gè)以上抗性基因的控制，減少了病原菌的選擇壓力，所以大大降低了抗藥性產(chǎn)生的風(fēng)險(xiǎn)。

吡唑醚菌酯兼具保護(hù)、治療、內(nèi)吸傳導(dǎo)及耐雨水沖刷的作用，應(yīng)用范圍較廣且抗菌性強(qiáng)。目前尚沒(méi)有出現(xiàn)馬鈴薯晚疫病對(duì)吡唑醚菌酯產(chǎn)生抗藥性的報(bào)道，但由于其作用位點(diǎn)單一，馬鈴薯晚疫病菌對(duì)其產(chǎn)生抗性的風(fēng)險(xiǎn)較高［8-9］。為確保吡唑醚菌酯對(duì)馬鈴薯晚疫病的防治效果穩(wěn)定，延緩抗藥性產(chǎn)生，一是要避免連續(xù)單一的使用吡唑醚菌酯，二是要與其他類型的殺菌劑混合使用。本研究選取具有不同作用機(jī)理的殺菌劑氟吡菌胺和百菌清［10-11］，將吡唑醚菌酯分別與這兩種藥劑以不同比例進(jìn)行混配，通過(guò)室內(nèi)毒力測(cè)定篩選出對(duì)馬鈴薯晚疫病菌具有較好抑制效果的配方，并進(jìn)行田間藥效評(píng)價(jià)，為生產(chǎn)中藥劑的聯(lián)合防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試菌種：致病疫霉菌〔Phytophthora infestans（ Mont.） de Bary〕從田間罹病馬鈴薯葉片上經(jīng)常規(guī)組織分離法分離獲得，按照柯赫氏法則進(jìn)行驗(yàn)證。

供試藥劑：98%吡唑醚菌酯原藥、97%氟吡菌胺原藥、97%百菌清原藥，由廣東茂名綠銀農(nóng)化有限公司提供，田間試驗(yàn)所用的可濕性粉劑由實(shí)驗(yàn)室制備。

黑麥培養(yǎng)基：黑麥50 g，瓊脂20 g，去離子水1 000 mL，經(jīng)蒸煮、碾壓、過(guò)濾去渣后，于121℃下高壓蒸汽滅菌20 min，待冷卻后貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 室內(nèi)毒力測(cè)定 采用NY/T1156.6-2006平皿菌絲生長(zhǎng)抑制法，計(jì)算吡唑醚菌酯與氟吡菌胺混配，以及吡唑醚菌酯與百菌清混配對(duì)馬鈴薯晚疫病菌的抑制中濃度（EC50）。在無(wú)菌操作條件下，將不同單劑按質(zhì)量比1∶9、1∶7、1∶5、1∶3、1∶1、3∶1、5∶1、7∶1、9∶1、1∶0、0∶1分別混合，得到不同配比的混配藥劑，再根據(jù)預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果，將混配藥劑稀釋成一系列濃度梯度，并加入黑麥培養(yǎng)基中，制成不同濃度的帶毒平板。用直徑為6 mm的打孔器從接有馬鈴薯晚疫病菌的黑麥培養(yǎng)基（已18℃預(yù)培養(yǎng)7 d）上靠近菌落邊緣的同一圓周上打取菌餅（保證同一重復(fù)的供試病菌菌齡相同），并用接種針在無(wú)菌條件下將菌餅接種到帶毒平板中央，并設(shè)不加藥黑麥平板作對(duì)照，置于18℃培養(yǎng)，每個(gè)處理3次重復(fù)［12］。

待對(duì)照的菌落邊緣接近皿壁時(shí)，用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，求出3次重復(fù)的平均值，得出各處理的平均菌落增長(zhǎng)直徑（=平均菌落直徑-6 mm），計(jì)算不同濃度處理的菌絲生長(zhǎng)抑制率。采用DPS軟件計(jì)算單劑及各配比混劑的抑制中濃度EC50值及95%置信限，并根據(jù)Wadley（1945）方法計(jì)算出不同配比下的增效系數(shù)SR，以SR值判斷藥劑混配后的聯(lián)合作用方式：SR＜0.5為拮抗作用；SR≤0.5為拮抗作用；0.5＜SR＜1.5為相加作用；SR≥1.5為增效作用［9］。

菌絲生長(zhǎng)抑制率（%）=（對(duì)照菌落增長(zhǎng)直徑-處理菌落增長(zhǎng)直徑） /對(duì)照菌落增長(zhǎng)直徑× 100

EC50理論值=（A的質(zhì)量分?jǐn)?shù)+B的質(zhì)量分?jǐn)?shù)）/（A的質(zhì)量分?jǐn)?shù)/A的EC50+B的質(zhì)量分?jǐn)?shù)/B的EC50）

增效系數(shù)（SR）=EC50理論值/EC50實(shí)際值

1.2.2 田間藥效試驗(yàn) 田間藥效試驗(yàn)地點(diǎn)設(shè)在湖南省瀏陽(yáng)市北盛鎮(zhèn)，供試馬鈴薯品種為費(fèi)烏瑞它，于2016年12月種植。試驗(yàn)設(shè)吡唑醚菌酯∶氟吡菌胺=1∶5、吡唑醚菌酯∶百菌清=9∶1、50%吡唑醚菌酯、50%氟吡菌胺、50%百菌清和清水對(duì)照6個(gè)處理，每個(gè)處理3次重復(fù)，小區(qū)面積約 15 m2，各小區(qū)之間設(shè)保護(hù)行，各小區(qū)栽培條件均勻一致。試驗(yàn)共施藥3次，每次間隔7 d，采用手動(dòng)噴霧器均勻噴藥，整個(gè)試驗(yàn)期間沒(méi)有出現(xiàn)惡劣天氣。最后一次用藥后7 d進(jìn)行調(diào)查。

采用五點(diǎn)取樣法進(jìn)行調(diào)查，觀察發(fā)病情況，按葉片上病斑面積占整個(gè)葉面積的百分率分級(jí)。0 級(jí)：無(wú)?。? 級(jí)：5%以下；3 級(jí)：6%～10%；5級(jí)：11%～25%；7 級(jí)：26%～50%；9 級(jí)：50%以上。根據(jù)葉片病情計(jì)算病情指數(shù)與防效。

2 結(jié)果與分析

2.1 室內(nèi)聯(lián)合毒力測(cè)定結(jié)果

菌絲生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)的測(cè)定結(jié)果見表1、表2。根據(jù)兩組試驗(yàn)測(cè)得的EC50值可知，單劑吡唑醚菌酯對(duì)馬鈴薯晚疫病菌的抑制效果高于氟吡菌胺與百菌清單劑。當(dāng)吡唑醚菌酯與氟吡菌胺混配時(shí)，各配比對(duì)馬鈴薯晚疫病菌的增效系數(shù)（SR）從大到小依次為1∶5＞1∶3＞5∶1＞7∶1＞1∶9＞1∶7＞1∶1＞9∶1＞3∶1，增效系數(shù)在0.71～1.29之間，表明各配比對(duì)抑制晚疫病菌均表現(xiàn)為相加作用；吡唑醚菌酯與百菌清混配時(shí)，增效系數(shù)（SR）從大到小依次為9∶1＞7∶1＞5∶1＞1∶3＞3∶1＞1∶1＞1∶5＞1∶7＞1∶9，增效系數(shù)在0.62～1.26之間，所有配比均表現(xiàn)為相加作用。

表1 吡唑醚菌酯、氟吡菌胺及其9個(gè)不同配比對(duì)馬鈴薯晚疫病菌毒力測(cè)定結(jié)果

表2 吡唑醚菌酯、百菌清及其9個(gè)不同配比對(duì)馬鈴薯晚疫病菌毒力測(cè)定結(jié)果

2.2 田間藥效評(píng)價(jià)

根據(jù)室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果，選取吡唑醚菌酯∶氟吡菌胺=1∶5、吡唑醚菌酯∶百菌清=9∶1兩種最佳配比進(jìn)行田間防效驗(yàn)證，同時(shí)選取單劑作為對(duì)照。3次藥物噴施后田間馬鈴薯晚疫病發(fā)病情況見表3。從表3可以看出，各單劑及復(fù)配藥劑對(duì)馬鈴薯晚疫病均具有較好的防治效果，防效均在75%以上。其中，吡唑醚菌酯·百菌清（9∶1）250 g/hm2處理的防治效果最佳，為87.40%，其次是吡唑醚菌酯·氟吡菌胺（1∶5）500 g/hm2處理，防效為86.50%，表明吡唑醚菌酯兩種復(fù)配藥劑的防治效果均不差于單劑，能夠有效控制馬鈴薯晚疫病的發(fā)生危害。

表3 田間藥效試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論與討論

目前，對(duì)于抗藥性問(wèn)題的治理對(duì)策包括：將不同殺菌劑混用與交替使用、限制用藥次數(shù)、間斷用藥、按照推薦劑量用藥等。其中，將不同的殺菌劑混用是解決殺菌劑抗藥性的主要策略，合理的混用藥劑不僅能夠擴(kuò)大殺菌譜，提高防治效果，也可以適當(dāng)降低用藥成本［13］。研究者經(jīng)過(guò)對(duì)殺菌劑篩選發(fā)現(xiàn)，氟吡菌胺·霜霉威（銀法利）、霜脲·錳鋅（克露）、惡霜·錳鋅（殺毒礬）等復(fù)配藥劑對(duì)馬鈴薯晚疫病具有較強(qiáng)的防治效果［14-16］。在藥劑混用時(shí)除了要考慮聯(lián)合毒力以外，更重要的是確保混用藥劑能起到延緩病原菌抗藥性發(fā)展的作用，如果混用藥劑的作用機(jī)制相同或相近，則不僅無(wú)法達(dá)到延緩抗藥性的目的，還會(huì)導(dǎo)致混合藥劑中的有效成分之間出現(xiàn)交互抗性，加快病原菌抗藥性的產(chǎn)生和發(fā)展；如果混合藥劑中各有效成分的降解速度與殘效期不一致，混合藥劑中降解速度較快的組分被首先降解以后就只有一種藥劑在發(fā)揮作用，失去了混用藥劑的意義［17］。綜合考慮，農(nóng)藥混用應(yīng)遵循以下原則：一是各組分混配后對(duì)病原菌呈現(xiàn)增效或相加作用；二是混用藥劑中的各有效成分具有不同的作用機(jī)制；三是混劑中各藥物的降解速度與持效期基本吻合或差別不大；四是混劑中各組分在混配時(shí)不發(fā)生其他物理和化學(xué)作用。

本研究中，混用藥劑各組分的作用機(jī)理無(wú)相關(guān)性。其中吡唑醚菌酯是一種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，通過(guò)阻止線粒體呼吸鏈中細(xì)胞色素b與細(xì)胞色素c1間的電子傳遞，使線粒體無(wú)法合成ATP，從而抑制真菌孢子萌發(fā)或菌絲生長(zhǎng)［8］；氟吡菌胺的作用機(jī)理是通過(guò)使細(xì)胞膜上的類血影蛋白發(fā)生由細(xì)胞膜到細(xì)胞質(zhì)的離域，影響細(xì)胞的有絲分裂過(guò)程，破壞病原菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)，表現(xiàn)殺菌活性［10］；百菌清的作用機(jī)理是通過(guò)破壞細(xì)胞中三磷酸甘油醛脫氫酶的活性，使細(xì)胞的新陳代謝過(guò)程受阻而發(fā)揮藥效［18］。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，吡唑醚菌酯與氟吡菌胺、百菌清兩種藥劑分別混配，均對(duì)抑制馬鈴薯晚疫病菌菌絲生長(zhǎng)表現(xiàn)相加作用。吡唑醚菌酯與氟吡菌胺混配、吡唑醚菌酯與百菌清混配，均對(duì)抑制馬鈴薯晚疫病菌菌絲生長(zhǎng)表現(xiàn)相加作用，將復(fù)配藥劑運(yùn)用于田間對(duì)防治晚疫病同樣具有較好的防治效果，能夠有效控制病害。張鵬等通過(guò)葉盤法測(cè)得氟吡菌胺與吡唑醚菌酯以多數(shù)比例混合對(duì)馬鈴薯晚疫病菌有相加作用，當(dāng)氟吡菌胺與吡唑醚菌酯以10∶1和1∶4混配時(shí)表現(xiàn)增效［10］。本研究通過(guò)設(shè)置與之不同的混合比例，進(jìn)一步證實(shí)了兩種藥劑不產(chǎn)生拮抗作用。

可考慮研發(fā)氟吡菌胺和吡唑醚菌酯的混劑，或?qū)⒎辆放c霜霉威的混劑（銀法利）與吡唑醚菌酯進(jìn)行桶混使用，目前尚沒(méi)有出現(xiàn)馬鈴薯晚疫病對(duì)吡唑醚菌酯產(chǎn)生抗藥性的報(bào)道，但由于其作用位點(diǎn)單一，病菌對(duì)其產(chǎn)生抗性的風(fēng)險(xiǎn)較高。氟吡菌胺和百菌清對(duì)馬鈴薯晚疫病都具有良好的防治效果，在實(shí)際生產(chǎn)中可依照本研究的這兩種配比，將吡唑醚菌酯與銀法利（氟吡菌胺與霜霉威的混劑）、百菌清組合或輪換使用，以擴(kuò)大藥劑殺菌譜，延緩抗藥性產(chǎn)生，提高防治效果。

［1］ 肖春芳，田恒林，張舒，等. 45%霜霉威·咪唑菌酮懸浮劑對(duì)馬鈴薯晚疫病的防治效果［J］. 植物保護(hù)，2014，40（2）：171-174，183.

［2］ 先丹，李丹，郭國(guó)雄，等. 五種不同藥劑防控馬鈴薯晚疫病田間效果研究［J］. 農(nóng)技服務(wù)，2014，31（8）：72，74.

［3］ 高雪，趙冬梅，朱杰華，等. 5種殺菌劑對(duì)馬鈴薯晚疫病田間防效比較［J］. 中國(guó)植保導(dǎo)刊，2016，36（5）：51-53，28.

［4］ 張利杰，劉霞，馮蕊，等. 云南省部分馬鈴薯產(chǎn)區(qū)晚疫病菌抗藥性測(cè)定［J］. 中國(guó)馬鈴薯，2016，30（6）：362-366.

［5］ 文橋，王麗，韓秀英，等. 北方五省（區(qū)）馬鈴薯晚疫病菌對(duì)甲霜靈和精甲霜靈的敏感性檢測(cè)［J］. 植物保護(hù)，2012，38（3）：116-121.

［6］ 王騰，閔凡祥，郭梅，等. 黑龍江省馬鈴薯晚疫病菌交配型及對(duì)甲霜靈敏感性測(cè)定［J］. 植物保護(hù)，2016，42（1）：180-183.

［7］ 李洪浩，雷高，徐成勇，等. 9種殺菌劑對(duì)馬鈴薯晚疫病的田間防效［J］. 中國(guó)植保導(dǎo)刊，2013，33（8）：56-57，58.

［8］ 楊麗娟，柏亞羅. 甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑—— 吡唑醚菌酯［J］. 現(xiàn)代農(nóng)藥，2012，11（4）：46-50，56.

［9］ 范子耀，王文橋，孟潤(rùn)杰，等. 吡唑醚菌酯與苯醚甲環(huán)唑混合物對(duì)茄鏈格孢的聯(lián)合毒力及其對(duì)馬鈴薯產(chǎn)量的影響［J］. 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2011，13（6）：591-596.

［10］ 張鵬，王文橋，黃啟良，等. 40%氟菌·唑醚懸浮劑的研制及其對(duì)馬鈴薯晚疫病田間防治效果［J］. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，46（15）：3142-3150.

［11］ 鄧歡，王玉軍. 殺菌劑百菌清的研究進(jìn)展［J］.輕工科技，2012（4）：26-27.

［12］ 劉潤(rùn)強(qiáng)，王清峻，曹前輝，等. 氟吡菌酰胺與噁霉靈混劑對(duì)五種果樹病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定［J］. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016（13）：3352-3355.

［13］ 文橋，王麗，韓秀英，等. 北方五?。▍^(qū)）馬鈴薯晚疫病菌對(duì)甲霜靈和精甲霜靈的敏感性檢測(cè)［J］. 植物保護(hù)，2012，38（3）：116-121.

［14］ 王麗，王文橋，孟潤(rùn)杰，等. 幾種新殺菌劑對(duì)馬鈴薯晚疫病的控制作用［J］. 農(nóng)藥，2010，49（4）：300-302，305.

［15］ 羅建軍，李志斌，劉瓊光，等. 7種殺菌劑對(duì)馬鈴薯晚疫病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定及田間防控效果［J］. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，41（20）：91-95.

［16］ 馬光恕，徐曉東，廉華，等. 銀法利對(duì)馬鈴薯晚疫病的防治效果研究［J］. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（13）：6745- 6746，6749.

［17］ 楊向黎，林愛軍，王軍. 我國(guó)農(nóng)藥混劑的開發(fā)與應(yīng)用現(xiàn)狀［J］. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， 2001，32（4）：544-548.

［18］ 楊光亮. 百菌清市場(chǎng)簡(jiǎn)析［J］. 農(nóng)化市場(chǎng)十日訊，2014（13）：24-25.

（責(zé)任編輯 楊賢智）

Toxicity and efficacy test of pyraclostrobin and its compound agents against potato late blight

ZHANG Zi-yi，ZHOU Qian
（College of Plant Protection，Hunan Agricultural University/Hunan Provincial Key Laboratory for Biology and Control of Plant Diseases and Insect Pests，Changsha 410128，China）

To screen effective chemical mixtures of pyraclostrobin with other fungicide against Phytophthora infestans，and delay the onset of fungicide resistance，the toxicities of mixtures of pyraclostrobin with flupicolide and chlorothalonil on Phytophthora infestans were determined by measuring the growth rate of mycelium in laboratory. The ratios of mixtures that had the best efffect on controlling the mycelium growth were screened out， and the control efficacy on potato late blight was assessed through field trial. The results showed that all mixtures exhibited additive effects on Phytophthora infestans in vitro. When the mass ratio of mixture of pyraclostrobin and flupicolide was 1∶5，the synergistic ratio （SR） was 1.29. When the mass ratio of mixture of pyraclostrobin and chlorothalonil was 9∶1，the synergistic ratio （SR） was 1.26. Field trial demonstrated that the two mixtures both had higher control efficacy，and their control effects were 86.5% and 87.4% respectively on potato late blight.

pyraclostrobin；potato late blight；resistance；mycelial growth rate；control efficiency；efficacy test

S482.2

A

1004-874X（2017）04-0108-05

張子易，周倩. 吡唑醚菌酯及其復(fù)配藥劑對(duì)馬鈴薯晚疫病的毒力測(cè)定及藥效試驗(yàn)［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，44（4）：108-112.

2017-03-10

國(guó)家馬鈴薯產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系（CARS-10-P19）

張子易（1991-），男，在讀碩士生，E-mail：335974581@qq.com

周倩（1977-），女，博士，副教授，E-mail：zhouqian2617@hunau.edu.cn