春石斛雜交種與藥用金釵石斛3種活性成分的比較研究

章金輝，王再花，旦真次仁，李 杰，朱根發(fā)

（1. 廣東省農(nóng)科院環(huán)境園藝研究所/廣東省園林花卉種質(zhì)創(chuàng)新綜合利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510640；2. 林芝地區(qū)科技開發(fā)交流服務(wù)中心，西藏 林芝 860000）

春石斛雜交種與藥用金釵石斛3種活性成分的比較研究

章金輝1，王再花1，旦真次仁2，李 杰1，朱根發(fā)1

（1. 廣東省農(nóng)科院環(huán)境園藝研究所/廣東省園林花卉種質(zhì)創(chuàng)新綜合利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510640；2. 林芝地區(qū)科技開發(fā)交流服務(wù)中心，西藏 林芝 860000）

比較分析了春石斛雜交種Dendrobium Second Love‘Tokimeki’與傳統(tǒng)藥用石斛金釵石斛活性成分，結(jié)果顯示，D. Second Love‘Tokimeki’9月至翌年1月的莖多糖含量均值高于金釵石斛；多糖DHPP-Ⅰ數(shù)均分子量和重均分子量均低于金釵石斛多糖DNPP-Ⅰ；兩種石斛莖都含有所檢測(cè)的19種氨基酸，金釵石斛所測(cè)的氨基酸總量高于D. Second Love‘Tokimeki’，但D. Second Love‘Tokimeki’的8種必需氨基酸總量高于金釵石斛；金釵石斛的Fe和B元素含量顯著高于D. Second Love‘Tokimeki’，而D. Second Love‘Tokimeki’的Mn、Zn、Cu元素含量顯著高于金釵石斛。通過兩種石斛3種活性成分比較可知，D. Second Love‘Tokimeki’ 多糖含量較高，但多糖DHPP-Ⅰ數(shù)均分子量和重均分子量均低于金釵石斛多糖DNPP-Ⅰ；D. Second Love‘Tokimeki’的氨基酸、礦質(zhì)元素與金釵石斛組成相同，但含量有所差異。

石斛；多糖；氨基酸；礦質(zhì)元素

石斛為蘭科石斛屬多年生草本植物，是一類重要的觀賞兼藥用植物，全世界約有1 500余種，主要分布于亞洲熱帶和亞熱帶地區(qū)至大洋州，我國(guó)共分布有74個(gè)種、2個(gè)變種。石斛的莖是名貴的中藥材，具有滋陰清熱、益胃生津、清肺明目和提高機(jī)體免疫力的功效。《本草綱目》中，李時(shí)珍認(rèn)為石斛能“治發(fā)熱自汗，癰疽排膿內(nèi)塞”。清代《藥性論》評(píng)稱石斛有補(bǔ)腎積精、益氣力、養(yǎng)胃陰等功效。

金釵石斛又名扁黃草等，盛產(chǎn)于云南、貴州等地，多糖和生物堿是金釵石斛的主要活性成分，同時(shí)氨基酸和微量元素也較豐富。春石斛雜交種的始祖源于中國(guó)的金釵石斛（Dendrobium nobile Lindl.）等名貴藥用石斛，經(jīng)過多年的遺傳改良和選育，目前已達(dá)上萬個(gè)品種。當(dāng)前關(guān)于金釵石斛的活性成分、多糖結(jié)構(gòu)、藥理活性等方面的報(bào)道較多，而關(guān)于春石斛雜交種的報(bào)道較少，主要集中在組培增殖、試管開花［1］、花期調(diào)控［2］及不同器官多糖、生物堿含量研究［3］等方面，關(guān)于春石斛雜交種D. Second Love‘Tokimeki’的氨基酸、微量元素及分子量的研究還未見報(bào)道。現(xiàn)代研究證明，石斛具有降血糖［4］、抗氧化［5］、抗腫瘤［6-7］、祛痰鎮(zhèn)咳及增強(qiáng)免疫力［8-10］等作用，具有較高的藥用價(jià)值。春石斛雜交種一直作為觀賞性花卉進(jìn)入市場(chǎng)，由于其始祖源于金釵石斛，因此，為了進(jìn)一步開拓春石斛雜交種在藥用方面的潛在價(jià)值，本研究以比較春石斛雜交種與金釵石斛3種活性成分的異同為切入點(diǎn)，通過在活性成分上的比較為春石斛雜交種在藥用開發(fā)利用方面提供一定的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試材料金釵石斛（Dendrobium nobile Lindl.）和春石斛雜交種（Dendrobium Second Love ‘Tokimeki’），栽培于廣東省農(nóng)科院環(huán)境園藝研究所溫室大棚內(nèi)，為獨(dú)立盆栽，基質(zhì)配方、光、溫、水肥管理一致。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 多糖含量測(cè)定 （1）標(biāo)準(zhǔn)曲線制作。設(shè)置10個(gè)濃度梯度，分別吸取0.05 mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、2.0 mL，各加蒸餾水補(bǔ)至2.0 mL，然后各加6%重蒸苯酚1.0 mL，搖勻，再加入98%濃硫酸5.0 mL，搖勻，靜置5 min，再置于沸水浴中加熱20 min，冷卻至室溫，于490 nm處測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程為：y=0.0586x+0.0338 （R2=0.997）。

（2）多糖提取。取2.5 年生、9月至翌年1月兩種石斛的成熟莖，切成小段，105℃殺青15 min，以60℃烘干至恒重，再制成粉末，過0.25 mm篩。分別稱取兩種石斛干燥粉末各50 g置于1 000 mL圓底燒瓶中，然后加入石油醚（沸點(diǎn)60～90℃）500 mL，80℃回流提取1 h，抽濾、揮干、溶媒，再加石油醚，相同條件下重復(fù)1次；所得兩種石斛濾渣分別加入80%乙醇水溶液500 mL，再加入80%乙醇水溶液，相同條件下重復(fù)1次，得到兩種石斛脫脂干粉；兩種石斛脫脂干粉再分別加入蒸餾水500 mL，80℃浸提1 h，抽濾，收集濾液，重復(fù)索氏提取提1次；合并兩次濾液，減壓濃縮，加入預(yù)冷無水乙醇使溶液含醇量至80%，4℃靜置過夜，離心，收集沉淀，冷凍干燥得到兩種石斛粗多糖。將兩種石斛粗多糖配制成40 mg/mL的水溶液，以胰酶液和粗多糖溶液的體積比為0.4∶1，加入1 mg/mL的胰蛋白酶，37℃恒溫5 h后升溫滅酶，然后添加1/3體積的Sevag溶液，劇烈搖蕩5 min，離心，棄下層有機(jī)相。上層水相繼續(xù)加入1/3體積的Sevag溶液，按相同條件重復(fù)2次，合并上層水相，采用截留分子量為7 500 Da透析袋蒸餾水透析3 d；然后，加入預(yù)冷無水乙醇使溶液含醇量至80%，4℃靜置過夜，離心，收集沉淀，無水乙醇、丙酮各洗2遍，冷凍干燥后得到兩種石斛精多糖，分別命名為金釵石斛DNPP和春石斛雜交種DHPP。

（3）多糖與葡萄糖換算因子的測(cè)定。稱取金釵石斛精多糖10 mg溶于10 mL蒸餾水，配制濃度為50 μg/mL的多糖溶液，吸取樣品溶液0.1 mL，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制作的方法測(cè)定吸光度，計(jì)算樣品中葡萄糖的濃度，由下列公式計(jì)算換算因子f：

式中，Cs為石斛精多糖溶液的實(shí)際濃度，C為回歸方程計(jì)算石斛精多糖溶液中葡萄糖的濃度，f為校正系數(shù)。依公式計(jì)算可得金釵石斛多糖與葡萄糖換算因子f = 2.41，春石斛雜交種多糖換算因子參照金釵石斛。

（4）樣品溶液的測(cè)定。分別稱取3份金釵石斛和春石斛雜交種9月至翌年1月的石斛莖的干燥粉末各1 g，分別加入80%乙醇100 mL，80℃回流提取1 h，抽濾、揮干、溶媒，重復(fù)上述操作1次，所得濾渣加入純水100 mL，80℃回流提取1 h后抽濾，重復(fù)上述操作1次，合并濾液，蒸餾水定容至250 mL，搖勻，得到樣品溶液。采用改良的苯酚-硫酸比色法測(cè)定樣品溶液的石斛多糖含量X，計(jì)算公式為：

式中，f為石斛多糖與葡萄糖的換算因子，C為各石斛樣品溶液中葡萄糖含量，D為樣品稀釋倍數(shù)，W為石斛干粉重量。

1.2.2 多糖分子量測(cè)定 取2.5年生、9月至翌年1月兩種石斛的成熟莖，用蒸餾水洗凈，切成小段，以60℃烘干至恒重，再制成粉末，過0.25 mm篩，用于氨基酸、微量元素測(cè)定。

精多糖分級(jí)。預(yù)處理：取DEAE-52 100 g加入蒸餾水500 mL，浸泡24 h，使纖維素顆粒充分膨脹；去除懸浮的細(xì)顆粒后，再加4倍量的0.5 mo1/L HC1浸泡、攪拌4 h；濾去酸液，蒸餾水洗至中性，再加4倍量的0.5 mo1/L NaOH浸泡、攪拌4 h；濾去堿液，蒸餾水洗至中性。如此酸堿反復(fù)輪洗，直至洗出液無色澄清為止。最后再用0.5 mo1/L HCL洗滌，即制成Cl-型柱，脫氣，備用。將層析柱2.6 cm×50 cm垂直放置，倒入適量pH 8.0的0.05 mo1/L Tris-HCl緩沖液，將DEAE-52懸濁液緩慢傾入柱中，待其自然沉降至柱高的1/4～1/3時(shí)打開柱下端出口，讓溶液慢慢流出，保持吸附劑表面浸沒在溶液中，嚴(yán)防氣泡產(chǎn)生，以緩沖液平衡24 h。取多糖樣品100 mg溶于5 mL Tirs-HCl緩沖液（pH 8.0），4 000 r/min離心5 min，上清液用于上樣。先用適量蒸餾水洗脫后，再用0.3 mo1/L NaCl進(jìn)行階段洗脫，洗脫速度控制在1 mL/min，部分收集器的轉(zhuǎn)速為8 mL/管，間隔每管取適量多糖溶液加蒸餾水補(bǔ)足2 mL，苯酚-硫酸法測(cè)定490 nm處吸光度。以洗脫液的管數(shù)為橫坐標(biāo)，490 nm處吸光度為縱坐標(biāo)作圖，得到洗脫曲線，合并主峰，凍干得到金釵石斛和春石斛雜交種D. Second Love‘Tokimeki’水溶性多糖，分別記為DNPP-I和DHPP-I；用0.3 mo1/L NaCl洗脫所得多糖分別記為DNPP-II和DHPP-II。

GPC條件：色譜柱：TSK SWXL 4000-3000（2柱串聯(lián)），300 mm（柱長(zhǎng)）×7.8 mm（內(nèi)徑），柱溫35℃；流動(dòng)相：0.05 mol/L NaH2PO4-Na2HPO4緩沖液（pH 6.7，加0.05% NaN3）；體積流量：0.5 mL/min；示差折光檢測(cè)器，恒溫35℃；進(jìn)樣量20 μL。GPC校正曲線：取已知相對(duì)分子質(zhì)量分別為738、5 800、1.22×104、2.37 ×104、4.8×104、1.0×105、1.86×105、3.8×105的多糖標(biāo)樣，用0.05 mol/L NaH2PO4-Na2HPO4緩沖液（pH 6.7，加0.05% NaN3）溶解，經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，進(jìn)行GPC分析。取10 mg/mLDNPP-I和DHPP-I的樣品溶液，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線中的條件操作，根據(jù)樣品的出峰時(shí)間在校正曲線上求得多糖峰的平均相對(duì)分子質(zhì)量及其分布。

1.2.3 氨基酸含量測(cè)定 標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品制備：準(zhǔn)確稱取10 mg 氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品，蒸餾水定容至50 mL，得到200 mg/L的游離氨基酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，臨用時(shí)用空白溶劑稀釋得到1.0、5.0、10.0 mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確稱取0.25 g樣品3份，分別置于250 mL容量瓶中，加入0.1 mol/L鹽酸后超聲處理30 min，過濾，再取2 mL水解處理，取水解前后的溶液各100 μL于液相色譜樣品小瓶中，60℃加熱并氮?dú)獯蹈?，取出后，加?.5 mol/L鹽酸正丁醇100 μL，密封樣品瓶，60℃衍生化反應(yīng)30 min。然后60℃加熱，氮?dú)獯蹈桑瑲堅(jiān)?0%乙腈1 mL，振蕩1 min，溶解，0.45 μm 針筒式濾器過濾，于LC-MS/MS測(cè)定。

色譜及質(zhì)譜條件：色譜柱為BDS HYPERSIL C18（2.1 mm×150 mm，2.4 μm） ，流動(dòng)相為乙腈-水（0.2%甲酸，10 mmol/L甲酸銨）梯度洗脫，梯度洗脫程序：乙腈比例變化為0 min，0%；5min，40%；7 min，80%；8～12 min，0%。流速為0.2 mL/min，進(jìn)樣量1 μL。離子源：電噴霧（ESI），正離子電離模式，干燥氣（N2）流量為9.0 L/min，溫度為350℃，霧化氣（N2）壓力為275.8 kPa，電噴霧電壓為4 000 V，掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式。

1.2.4 礦質(zhì)元素含量測(cè)定 準(zhǔn)確稱取0.50 g樣品3份，分置于50 mL三角瓶中，然后加入10 mL混合酸（9 mL硝酸+1 mL高氯酸）。密封浸泡過夜后，于電熱板上消煮（不超180℃），直至冒白煙，消化液呈無色透明為止，再于25 mL容量瓶中超純水定容，混勻，得測(cè)試液。采用石墨爐原子吸收分光光度計(jì)測(cè)定礦質(zhì)元素含量。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel和SPSS 13.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 多糖含量比較

從圖1可以看出，不同月份的石斛莖的多糖含量是不同的，其中金釵石斛莖的多糖含量呈現(xiàn)10月（16.8%）＞11月（14.2%）≈9月（13.7%） ＞12月（10.0%） ＞翌年1月（4.1%）的趨勢(shì)；春石斛雜交種D. Second Love‘Tokimeki’則表現(xiàn)為12月（23.7%）＞9月（20.8%）＞11月（17.8%）≈10月（16.4%）＞翌年1月（9.5%）。金釵石斛莖多糖含量除10月份與D. Second Love ‘Tokimeki’無顯著差異外，其他月份多糖含量均顯著低于D. Second Love ‘Tokimeki’。

圖1 不同月份金釵石斛和春石斛雜交種莖多糖含量比較

2.2 多糖分子量比較

從圖2可以看出，用蒸餾水洗脫時(shí)，兩種石斛都會(huì)有大量的多糖被洗脫下來，而0.3 mol/L NaCl洗脫時(shí)兩種石斛只有一個(gè)較小的多糖洗脫峰；兩種石斛的水洗多糖DNPP-Ⅰ和DHPP-Ⅰ占絕大部分，而0.3 mol/L NaCl洗脫多糖DNPP-Ⅱ和DHPP-Ⅱ只有很少一部分。

多糖分子量的大小與其活性存在較大關(guān)系。從表1可以看出，數(shù)均分子量、重均分子量均是DHPP大于DNPP，而DHPP-Ⅰ的數(shù)均分子量和重均分子量均低于DNPP-Ⅰ，在分布寬度方面則呈現(xiàn)DHPP-Ⅰ＞DNPP＞DNPP-Ⅰ＞DHPP。

2.3 氨基酸含量比較

從表2可以看出，兩種石斛均含有所檢測(cè)的19種氨基酸，且兩種石斛均含有人體所必需的8種氨基酸，其中以苯丙氨酸含量最高。從必需氨基酸總量來看，金釵石斛、D. SecondLove‘Tokimeki’莖的含量分別為0.423%和0.454%，而游離氨基酸總量為金釵石斛高于D. Second Love‘Tokimeki’。

圖2 兩種石斛莖多糖DEAE-Cellulose-52 離子交換層析

表1 兩種石斛的多糖分子量及其分布

表2 兩種石斛莖中19種游離氨基酸含量比較

2.3 礦質(zhì)元素含量比較

從表3可以看出，在所測(cè)的礦質(zhì)元素中，兩種石斛均以Ca元素的含量最高，且D. Second Love‘Tokimeki’高于金釵石斛；其次是Mg和 K，金釵石斛的Mg和K元素含量高于D. Second Love‘Tokimeki’；微量元素表現(xiàn)為金釵石斛、D. Second Love‘Tokimeki’的Mn、Fe元素含量均較高。由于微量元素在維持生命活動(dòng)中起著重要作用，因此通過微量元素含量的差異可推斷石斛的功效各有側(cè)重點(diǎn)。

表3 兩種石斛莖中8種礦質(zhì)元素含量比較

3 結(jié)論與討論

多糖是石斛的主要藥效成分之一，李滿飛等［11］通過測(cè)定25種石斛36個(gè)樣品的多糖含量，發(fā)現(xiàn)石斛生理活性強(qiáng)弱與其多糖的含量有關(guān)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，不同月份之間，兩種石斛莖多糖含量高低沒有呈現(xiàn)一致的規(guī)律性，其中金釵石斛莖多糖含量最高為10月份，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于多數(shù)文獻(xiàn)所報(bào)道的水平［12］，這可能是試驗(yàn)材料的差異和取材時(shí)間不同所致；D. Second Love‘Tokimeki’莖多糖含量以12月份最高，且顯著高于金釵石斛。若以多糖含量為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，金釵石斛以10月為最佳采收季節(jié)，D. Second Love‘Tokimeki’以12月為最佳采收季節(jié)。

關(guān)于石斛多糖的分離、純化、分級(jí)已有一些報(bào)道，與本研究結(jié)果類似，王軍輝［13］將金釵石斛水提粗多糖用DEAE-纖維素分級(jí)分離，蒸餾水、NaCl梯度洗脫，Sephadex G-100、Sephacryl S-200進(jìn)一步純化，分別得到2個(gè)水洗脫組分和5個(gè)鹽洗脫組分，其中蒸餾水洗脫組分的量最多。在眾多藥用石斛多糖的提取研究中，水溶性多糖均為主要組分，如霍山石斛［14］、細(xì)莖石斛［15］等。多糖分子量的大小與其活性存在較大關(guān)系，郝杰等［16］發(fā)現(xiàn)相對(duì)分子量最大的霍山石斛多糖S（平均分子量為14.79×105Da）對(duì)H2O2、·OH的清除作用強(qiáng)于其他多糖組分；鮑素華等［17］發(fā)現(xiàn)鐵皮石斛多糖分子質(zhì)量小于3.53 ×104Da或大于7.44×104Da時(shí)抗氧化活性較高。本試驗(yàn)所測(cè)兩種石斛莖多糖的重均分子量與前人報(bào)道的石斛多糖重均分子量的檢測(cè)范圍接近，多數(shù)在1×104～105Da之間［18］?？梢?，多糖分子量大小可能取決于多糖種類、純度和結(jié)構(gòu)等。

氨基酸是人體的生理活性所需物質(zhì)，近年來研究表明氨基酸與藥效存在著一定的關(guān)系［19］。何鐵光等［20］測(cè)定了鐵皮石斛原球莖17種氨基酸，其中7種是人體必需氨基酸，而本試驗(yàn)測(cè)定了兩種石斛莖的19種游離氨基酸，均含有人體所必需的8種氨基酸。在所測(cè)氨基酸中，金釵石斛和D.Second Love‘Tokimeki’均以精氨酸（Arg）含量最高。精氨酸具有重要的生理，營(yíng)養(yǎng)代謝功能如合成細(xì)胞漿蛋白和核蛋白，促進(jìn)傷口復(fù)原，肌肉蛋白合成［21］分泌激素，以及改善性欲等作用。精氨酸也有改善腸道的機(jī)械屏障和損傷后的黏膜屏障功能［22-23］及促進(jìn)小腸黏膜生長(zhǎng)、發(fā)育、適應(yīng)及恢復(fù)創(chuàng)傷等作用［24-25］，還具有提高機(jī)體免疫力［26］等作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，金釵石斛莖的Arg、Lys和GABA含量均顯著高于D. Second Love‘Tokimeki’，而D.Second Love ‘Tokimeki’中有10種氨基酸含量顯著高于金釵石斛；從必需氨基酸總量來看，D. Second Love‘Tokimeki’要高于金釵石斛。

人體雖然對(duì)微量元素的需求量低，但其在維持人體正常生理功能和生長(zhǎng)發(fā)育方面起著非常重要的作用［27］。研究發(fā)現(xiàn)，鐵、錳、鉻、鋅、鈣、鎂、銅等元素在造血、保持人體機(jī)體免疫力、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、生長(zhǎng)、生殖發(fā)育方面起著重要作用，也對(duì)糖尿病、尿毒癥等疾病的發(fā)生發(fā)展發(fā)揮著一定的影響［28-29］。金釵石斛莖的Fe和B含量顯著高于D. Second Love‘Tokimeki’，說明金釵石斛可能在預(yù)防貧血和維持機(jī)體免疫力和抗感染能力方面較強(qiáng)；而D. Second Love‘Tokimeki’的Mn、Zn、Cu含量顯著高于金釵石斛，說明D. Second Love‘Tokimeki’可能在促進(jìn)骨骼發(fā)育和繁殖性能方面的功效更強(qiáng)。

綜上所述，D. Second Love‘Tokimeki’與傳統(tǒng)藥用石斛金釵石斛相比，在多糖含量方面要優(yōu)于金釵石斛，春石斛雜交種DHPP-Ⅰ數(shù)均分子量和重均分子量均低于金釵石斛DNPP-Ⅰ。在總氨基酸總量方面雖低于金釵石斛，但有達(dá)10種氨基酸顯著高于金釵石斛，且從必需氨基酸總量來看，D. Second Love‘Tokimeki’的8種必需氨基酸總量高于金釵石斛。礦質(zhì)元素方面，春石斛品種D. Second Love‘Tokimeki’的Ca、Mn、Zn和Cu含量較多，具有一定的優(yōu)勢(shì)。通過春石斛雜交種D. Second Love‘Tokimeki’與傳統(tǒng)藥用石斛金釵石斛活性成分比較分析，為春石斛雜交種作為金釵石斛的替代品進(jìn)行開發(fā)提供了理論依據(jù)。

［1］ 張新平. 春石斛蘭組培增殖及蘭花試管開花研究［D］. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2008.

［2］ 王再花，朱根發(fā)，歐孟昌，等. 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑促進(jìn)春石斛提前開花效果研究［J］. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（10）：37-39.

［3］ 章金輝，操君喜，朱根發(fā)，等. 春石斛雜交種多糖及生物堿含量比較研究［J］. 熱帶作物學(xué)報(bào)，2013（4）：727-731.

［4］ Pan L H，Li X F，Wang M N，et al. Comparision of hypoglycemic and antioxidative effects of polysaccharides from four different Dendrobium species［J］.Int J Biol Macromol，2014（64）：420-427.

［5］ 嚴(yán)慕賢，周雅亮，藍(lán)義琨，等.兩種石斛的水溶性多糖和堿溶性多糖體外抗氧化活性的研究［J］. 廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2016（1）：88-91.

［6］ 張丹丹，黃森，查學(xué)強(qiáng)，等.霍山石斛多糖對(duì)人胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用［J］. 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2014，33（2）：542-547.

［7］ Zhang C X，Huang K X. Mechanism of apoptosis induced by a polysaccharide，from the loach Misgurnus Anguillicaudatus（MAP）in human hepatocellular carcinoma cells［J］. Toxicol Appl Pharm，2006，210（30）：236-245.

［8］ 宋燕華，蔡德雷，傅劍云，等.鐵皮石斛葉對(duì)二代繁殖雌性大鼠免疫水平影響的研究［J］. 浙江預(yù)防醫(yī)學(xué)，2016（2）：109-112.

［9］ Xia L J，Liu X F，Guo H Y，et al. Partial characterization and immunomodulatory activity of polysaccharides from the stem of Dendrobiumofficinale（Tiepishihu）in vitro［J］. J Funct Foods，2012，4（1）：294-301.

［10］ Meng L Z，Lyu G P，Hu D J，et al. Effects of polysaccharides from different species of Dendrobium（Shihu）on macrophage function［J］. Molecules，2013，18：5779-5791.

［11］ 李滿飛，徐國(guó)鈞. 中藥石斛類多糖的含量測(cè)定［J］.中草藥，1990，10 （21）：10-12.

［12］ 安鳳娟，何宇新. 金釵石斛多糖的研究進(jìn)展［J］. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（13）：3857-3862.

［13］ 王軍輝. 金釵石斛多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗白內(nèi)障活性研究［D］. 合肥：合肥工業(yè)大學(xué)，2011.

［14］ 鄧媛元. 霍山石斛多糖抗糖尿病性白內(nèi)障的研究［D］. 合肥：合肥工業(yè)大學(xué)，2007.

［15］ 陳云龍. 細(xì)莖石斛多糖的一級(jí)結(jié)構(gòu)表征及生物活性［D］. 杭州：浙江大學(xué)，2003.

［16］ 郝杰，查學(xué)強(qiáng)，鮑素華，等. 霍山石斛不同分子量多糖體外抗氧化研究［J］. 食品科學(xué)，2009，30（15）：94-98.

［17］ 鮑素華，查學(xué)強(qiáng)，郝杰，等. 不同分子量鐵皮石斛多糖體外抗氧化活性研究［J］. 食品科學(xué)，2009，30（21）：123-127.

［18］ Xu J，Han Q B，Li L S，et al. Chemistry，bioactivity and quality control ofDendrobium，a commonly used tonic herb in traditional Chinese medicine［J］. Phytochem Rev，2013，12：341-367.

［19］ 于秀軍，楯林義孝，郭力. 氨基酸對(duì)NG2 蛋白聚糖陽(yáng)性神經(jīng)祖細(xì)胞增殖的影響［J］.腦與神經(jīng)疾病雜志，2010（6）：413 -416.

［20］ 何鐵光，蘇江，王燦琴，等. 鐵皮石斛不同來源材料多糖和氨基酸含量的比較［J］. 廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007（1）：32-34.

［21］ Yao K，Yin Y L，Chu W，et al. Dietary arginine supplementation increases mTOR signaling activity in skeletal muscle of neonatal pigs［J］. J Nutr，2008，138（5）：867-872.

［22］ 聶新志，蔣宗勇，鄭春田，等.精氨酸對(duì)仔豬腸道黏膜發(fā)育的調(diào)控［J］.飼料研究，2009（12）：6-7，10.

［23］ 陳斌，付晉鳳，袁衛(wèi)紅.喂飼左旋精氨酸對(duì)燙傷大鼠腸道保護(hù)作用機(jī)制的研究［J］.中華燒傷雜志，2005，21（4）：259-261

［24］ Zhao Y J，Xu C Q，Zhang W H，et al. Role of polyamines in myocardial ischemia/reper fusion injury and their interactions with nitric oxide［J］. Eur J Pharmacol，2007，562（3）：236-246.

［25］ 彭瑛，蔡力創(chuàng).精氨酸和精氨酸生素對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、器官重及生化指標(biāo)的影響［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2011（8）：23-26.

［26］ 丁洛陽(yáng)，梁祥煥，王夢(mèng)芝，等.頸靜脈灌注精氨酸對(duì)泌乳中期奶牛血清生化和免疫指標(biāo)的影響［J］. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2016（6）：1899-1906.

［27］ 黃潔興. 微量元素在兒童生長(zhǎng)發(fā)育中的作用［J］. 中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2013（23）：219-220.

［28］ Cem E，Christian P，Katerin P，et al. Concentrations of seven trace elements in different hematological matrices in patients with type 2 diabetes as compared to healthy controls［J］. Biol Trace Elem Res，2001，79（3）：205-219.

［29］ Guo C H，Ko W S，Chen P C，et al. Alterations in trace elements and oxidative stress in uremic patients with dementia［J］. Biol Trace Elem Res，2009，131（1）：13-24.

（責(zé)任編輯 鄒移光）

Comparative study of three kinds of active ingredients between Nobile-type Dendrobium and Dendrobium nobile Lindl.

ZHANG Jin-hui1，WANG Zai-hua1，DANZhen ci-ren2，LI Jie1，ZHU Gen-fa1
（1.Environmental Horticulture Research Institute，Guangdong Academy of Agricultural Sciences /Guangdong Key Lab of Ornamental Plant Germplasm Innovation and Utilization，Guangzhou 510640，China；2.Linzhi Science and Technology Development and Communication Service Center，Linzhi 860000，China）

This paper analyzed the active ingredients contents betwenDendrobium Second Love‘Tokimeki’and the traditional medicinalD. nobileto provide reference for the development ofD. Second Love‘Tokimeki’. The content of polysaccharide was determined by phenol sulfuric acid colorimetry，and the molecular weight of polysaccharides was detected by Gel Permeation Chromatography. The content of free amino acid was determined by LC-MS/MS. The mineral element content was determined by Graphite furnace atomic absorption spectrophotometer 240ZAA（GTA120Z）. Results showed that the mean value of polysaccharide content ofD. Second Love‘Tokimeki’was higher than that ofD. nobilefrom September to January of next year，the number-average molecular weight and weight- average molecular weight of DHPP-ⅠofD. Second Love‘Tokimeki’ were lower than DNPP-ⅠofD. Nobile. There were 19 kinds of free amino acids measured in both species ofDendrobiums，the total free amino acid content ofD. nobilewas higher than that ofD. Second Love‘Tokimeki’，but the total content of eight kindsof essential amino acids inD. Second Love‘Tokimeki’ was higher than that ofD. Nobile. The content of Fe and B elements ofD. nobilewere higher than those ofD. Second Love‘Tokimeki’，but the content of Mn，Zn and Cu elements ofD. Second Love‘Tokimeki’ were higher than those ofD. Nobile. By comparative analysis of three kinds of active ingredients in both species ofDendrobiums，we can know that the polysaccharide content ofD. Second Love‘Tokimeki’ was higher，and the number-average molecular weight and weight-average molecular weight of DHPP-Ⅰ ofD. Second Love‘Tokimeki’ were lower than DNPP-ⅠofD. Nobile，the composition of free amino acids and mineral element in both species ofDendrobiums were the same，but the contents were different. The results could provide a reference for the medicinal development ofD. Second Love‘Tokimeki’ .

Dendrobium；polysaccharide；free amino acids；mineral element

S567.23+9

A

1004-874X（2017）04-0024-08

章金輝，王再花，旦真次仁，等. 春石斛雜交種與藥用金釵石斛3種活性成分的比較研究［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，44（4）：24-31.

2016-11-08

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2015A020210084，2014A020209058）

章金輝（1986-），男，碩士，助理研究員，E-mail：zhangjinhui41@163.com

朱根發(fā)（1968-），男，博士，研究員， E-mail：genfazhu@163.com