黃芪提取液對(duì)家兔睪丸細(xì)胞活力的影響

楊少飛，趙發(fā)年

(陜西省寶雞市陳倉(cāng)區(qū)新街鎮(zhèn)政府 721300)

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黃芪提取液對(duì)家兔睪丸細(xì)胞活力的影響

楊少飛，趙發(fā)年

(陜西省寶雞市陳倉(cāng)區(qū)新街鎮(zhèn)政府 721300)

為探討黃芪提取液對(duì)家兔睪丸細(xì)胞活力的影響，將無(wú)菌條件下分離得到的家兔睪丸細(xì)胞培養(yǎng)于含有不同濃度黃芪提取液的培養(yǎng)液內(nèi)，培養(yǎng)48 h后，用CCK-8試劑測(cè)定細(xì)胞相對(duì)活力。結(jié)果表明，培養(yǎng)液內(nèi)添加適當(dāng)濃度的黃芪提取液可以提高家兔睪丸細(xì)胞的活力。

家兔；黃芪提取液；睪丸細(xì)胞；活力

黃芪是一種傳統(tǒng)中藥材，在我國(guó)已有兩千多年的使用歷史。黃芪具有廣泛的藥用價(jià)值，對(duì)動(dòng)物諸多生理功能均有影響。黃芪可以調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能[1,2]，保護(hù)心血管[3]，抗疲勞[4]，抗衰老[5]，抗腫瘤[6]等。另外，黃芪對(duì)雄性動(dòng)物的生殖也有積極的作用。黃芪能夠改善4℃低溫下豬精液的保存效果[7]，能夠抑制大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞的凋亡[8]，能夠抗睪丸氧化損傷[9]等。

雖然已有的研究表明，黃芪在多種動(dòng)物上發(fā)揮著多種功能，但是黃芪對(duì)家兔睪丸的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究以家兔睪丸細(xì)胞為研究對(duì)象，探討黃芪提取液對(duì)家兔睪丸細(xì)胞活力的影響，為黃芪在家兔飼養(yǎng)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

黃芪提取液購(gòu)于大理藥業(yè)股份有限公司；MEM細(xì)胞培養(yǎng)液、胎牛血清、青鏈霉素混合液、胰蛋白酶、CCK-8試劑盒購(gòu)于武漢博士德公司。

1.2 家兔睪丸細(xì)胞的收集

選取4只健康家兔，摘取睪丸。無(wú)菌環(huán)境下去除睪丸被膜后，將睪丸組織剪碎，然后將剪碎的睪丸組織用0.25%胰蛋白酶溶液在37℃下消化30 min。消化完成后，細(xì)胞篩過(guò)濾收集細(xì)胞，并將收集的睪丸細(xì)胞用PBS清洗兩次。

1.3 家兔睪丸細(xì)胞的培養(yǎng)

將PBS清洗后的睪丸細(xì)胞用培養(yǎng)液稀釋后接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)，每孔104個(gè)細(xì)胞。培養(yǎng)液為含有10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、0.1 mg/mL鏈霉素的MEM細(xì)胞培養(yǎng)液。將細(xì)胞分為對(duì)照組與3個(gè)試驗(yàn)組。對(duì)照組不添加黃芪提取液(0 μg/mL)，3個(gè)試驗(yàn)組內(nèi)黃芪提取液濃度分別為50 μg/mL、100 μg/mL、150 μg/mL。每組設(shè)定3個(gè)重復(fù)，試驗(yàn)重復(fù)4次。家兔睪丸細(xì)胞在35℃，5% CO2濃度，飽和濕度條件下培養(yǎng)48 h。

1.4 細(xì)胞活力的測(cè)定

本試驗(yàn)采用CCK-8試劑檢測(cè)細(xì)胞活力。CCK-8能被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物，生成的甲臜物的數(shù)量與細(xì)胞活力成正比。用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映細(xì)胞活力。

家兔睪丸細(xì)胞培養(yǎng)48 h后，向各個(gè)含有細(xì)胞的培養(yǎng)孔內(nèi)加入10 μL CCK-8溶液，然后繼續(xù)培養(yǎng)2 h。2 h后，將96孔板置于酶標(biāo)儀內(nèi)，讀取各孔450 nm處的吸光度值。此吸光度值與細(xì)胞活力成正比。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

將對(duì)照組吸光度值表示為100%，試驗(yàn)組吸光度值以對(duì)照組為基礎(chǔ)換算成百分?jǐn)?shù)。將所換算的百分?jǐn)?shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，統(tǒng)計(jì)軟件使用SPSS 17.0，使用單因素方差分析。

2 結(jié)果與分析

黃芪提取液對(duì)家兔睪丸細(xì)胞活力的影響如圖1所示。當(dāng)培養(yǎng)液內(nèi)黃芪提取液濃度達(dá)到100 μg/mL及150 μg/mL時(shí)，家兔睪丸細(xì)胞的活力有顯著提升(P<0.05或P<0.01)。

圖1 黃芪提取液對(duì)家兔睪丸細(xì)胞活力的影響(*,P<0.05; **,P<0.01)

3 討論

黃芪是一種傳統(tǒng)的中藥材，具有廣泛的生理功能。已有研究從某些角度闡明了黃芪對(duì)雄性動(dòng)物生殖健康具有積極的作用[7～9]。本研究表明，合適濃度的黃芪提取液能夠有效提高家兔睪丸細(xì)胞的活力。睪丸是分泌睪酮并生成精子的器官，黃芪提取液能夠提高家兔睪丸細(xì)胞的活力，說(shuō)明黃芪或許對(duì)維持家兔睪酮分泌，提高家兔精子質(zhì)量有積極的作用。這為黃芪在家兔飼養(yǎng)當(dāng)中的應(yīng)用提供了理論依據(jù)。

黃芪提取液成分復(fù)雜，其中包含了黃芪多糖、皂苷等多種營(yíng)養(yǎng)成分，具體是哪一種或哪幾種營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)家兔睪丸細(xì)胞發(fā)揮作用，還需進(jìn)一步研究。另外，睪丸細(xì)胞種類繁多，功能多樣，黃芪對(duì)于家兔睪丸細(xì)胞的具體功能的影響還需進(jìn)一步探究。

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2017-04-05

楊少飛(1984-)，男，本科，助理畜牧師。

829.1

A

1005-2739(2017)04-0006-02