常山縣不同區(qū)域胡柚果實生長過程中黃酮含量的監(jiān)測

李小梅鄭美瑜汪麗霞徐小忠陸勝民

（1.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食品科學(xué)研究所/浙江省果蔬保鮮與加工技術(shù)研究重點實驗室 杭州310021；2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院；3.浙江柚都生物科技有限公司）

常山縣不同區(qū)域胡柚果實生長過程中黃酮含量的監(jiān)測

李小梅1，2鄭美瑜1汪麗霞3徐小忠3陸勝民1

（1.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食品科學(xué)研究所/浙江省果蔬保鮮與加工技術(shù)研究重點實驗室 杭州310021；2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院；3.浙江柚都生物科技有限公司）

常山胡柚的植物學(xué)名為Citrus Paradisi cv.Changshanhuyou，起源于常山縣青石鄉(xiāng)胡家村，又稱“仙柚”、“孝子柚”、“長壽柚”，是優(yōu)良的柚子與其它柑橘自然雜交品種[1]。常山胡柚因其具有耐瘠、耐寒、耐貯等優(yōu)良品質(zhì)，被譽為“中華第一雜柑”，至今已有100多年的栽培歷史[2]。其果實富含多種維生素和人體所必須的18種氨基酸以及磷、鉀、鐵、鈣等微量元素，營養(yǎng)價值很高[3]，并具有穩(wěn)定血糖、排毒養(yǎng)顏、生津止渴、解酒醒腦、消食利尿、鎮(zhèn)咳化痰、清熱解毒、延年益壽等諸多功效[4]。此外，胡柚中還含有多種有益于健康的功能性成分，主要有黃酮類化合物、檸檬苦素類化合物和類胡蘿卜素等[5]，是一種良好的純天然保健食品，其中黃酮類化合物是含量最豐富的一類活性物質(zhì)，大量地存在于胡柚幼果和成熟果皮中，代表性的為柚皮苷和新橙皮苷[6,7]。

本文對常山縣產(chǎn)區(qū)不同區(qū)域的胡柚果實在生長發(fā)育過程中的主要黃酮類成分含量進行測定，以確定胡柚成熟過程中黃酮類物質(zhì)的變化規(guī)律，為合理疏果時間和提取原料的選擇提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

胡柚，采摘區(qū)域為衢州市常山縣15個村（蔣蓮鋪村（十八里）、小白石村、紅旗村、龍繞、同弓山、太公山（趙）、太公山、新品種、青石、閣底、五里、大橋、東案、老塢、丁家塢），分別于2015年6月上旬、6月下旬、7月上旬、7月下旬、8月上旬、8月下旬、9月、10月采摘，共8個批次。所有胡柚果實均切成小塊，自然風(fēng)干，干燥后粉碎，過40目篩。

1.2 試劑與儀器

甲醇，冰醋酸，均為分析純；乙腈，色譜純；蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷標準品購自上海士鋒生物科技有限公司。

BS200S-WE1電子天平，余姚金諾電子天平儀器有限公司；BJ-200型高速多功能粉碎機，上海標本模型廠；LXJ－HB 飛鴿離心機，上海安亭科學(xué)儀器廠；KQ-500DB 型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；U3000高效液相分析儀，美國賽默飛世爾科技有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1HPLC條 件[8]。 色 譜 柱 ：ODS C18柱（SunFire5um，4.6mm×250mm）；流動相：水和乙腈，采用梯度洗脫，洗脫梯度為：0～15min，乙腈為20%；15～35min，乙腈為20%～60%；35～40min，乙 腈 為60%～100%；42～45min，乙腈為100%～20%；45～50min，乙腈為20%。流速：1mL/min；柱溫：25℃；檢測波長：280nm；進樣量：10μL。

1.3.2 蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷混合標準品溶液的配制。分別準確稱取標準品蕓香柚皮苷5mg、柚皮苷5mg、橙皮苷5mg和新橙皮苷10mg，用甲醇超聲波輔助溶解于25mL容量瓶中，定容，制得混合標準溶液貯備液。

1.3.3 蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷標準曲線的繪制。用移液槍分別移取0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL的上述混合標準溶液貯備液于6個10mL的容量瓶中，分別用甲醇定容至刻度線，即得6個濃度的混合標準溶液。用0.45μm微孔濾膜過濾，進行HPLC分析。

1.3.4 胡柚中黃酮的提取。準確稱取各個區(qū)域每個批次的干燥樣品各1g于錐形瓶中，加入15mL甲醇，在超聲功率為500W、超聲溫度為45℃的條件下提取30min，提取后離心5min，傾出上清液，濾渣再超聲兩次（每次加入15mL甲醇，超聲提取30min，離心，傾出上清液），合并三次提取液，并定容至50mL容量瓶中[9]。用0.45μm微孔濾膜過濾，進行HPLC分析。重復(fù)三次，取平均值。

圖1 蕓香柚皮苷標準曲線

圖2 柚皮苷標準曲線

圖3 橙皮苷標準曲線

圖4 新橙皮苷標準曲線

2 結(jié)果與討論

2.1 標準曲線的繪制

根據(jù)1.3.1色譜條件，測定不同濃度下的峰面積，以峰面積為縱坐標，標準品溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標，繪制標準曲線(見圖1～4)。

2.2 不同區(qū)域胡柚生長過程中蕓香柚皮苷的含量分析

根據(jù)1.3.1的實驗方法，對常山縣15個村6～10月份的胡柚樣品中的蕓香柚皮苷含量進行了監(jiān)測，結(jié)果見表1。

由表1可知，常山縣15個村的胡柚中蕓香柚皮苷的含量普遍較低，從平均含量來看，其中太公山、丁家塢、同弓山、紅旗村和青石的胡柚中蕓香柚皮苷的含量相對較高，而五里、東案、太公山（趙）和龍繞的胡柚中含量較低。在6月上旬到7月上旬胡柚中蕓香柚皮苷的含量較高，而在7月下旬急劇下降，8月上旬到10月隨著胡柚的逐漸成熟蕓香柚皮苷的含量緩慢下降，其中10個村的胡柚中蕓香柚皮苷的含量均在6月下旬達到最高。常山縣15個村6～10月份的胡柚樣品中，青石村6月下旬的胡柚中蕓香柚皮苷的含量最高為26.10mg/g，其次是龍繞村6月下旬的胡柚，其蕓香柚皮苷的含量為25.27mg/ g。所以應(yīng)采摘青石和龍繞6月下旬的胡柚進行蕓香柚皮苷的研究。

表1 不同區(qū)域胡柚生長過程中蕓香柚皮苷的含量（mg/g）

2.3 不同區(qū)域胡柚生長過程中柚皮苷的含量分析

根據(jù)1.3.1的實驗方法，對常山縣15個村6～10月份的胡柚樣品中的柚皮苷含量進行了監(jiān)測，結(jié)果見表2。

由表2可知，常山縣15個村的胡柚中柚皮苷的含量均較高，從平均含量來看，其中新品種、紅旗村、同弓山、太公山和小白石村的胡柚中柚皮苷的含量相對較高，而蔣蓮鋪村（十八里）、閣底、太公山（趙）和龍繞的胡柚中含量較低。從6月上旬到10月，隨著胡柚的成熟柚皮苷的含量逐漸下降，其中11個村的胡柚中柚皮苷的含量均在6月上旬最高。常山縣15個村6～10月份的胡柚樣品中，老塢村6月上旬的胡柚中柚皮苷含量最高為144.40mg/g，其次是東案村6月上旬的胡柚，其柚皮苷含量為141.05mg/g。所以應(yīng)采摘老塢和東案6月上旬的胡柚進行柚皮苷的研究。

表2 不同區(qū)域胡柚生長過程中柚皮苷的含量（mg/g）

2.4 不同區(qū)域胡柚生長過程中橙皮苷的含量分析

根據(jù)1.3.1的實驗方法，對常山縣15十五個村6～10月份的胡柚樣品中的橙皮苷含量進行了監(jiān)測，結(jié)果見表3。

由表3可知，常山縣15個村的胡柚中的橙皮苷的含量普遍較低，從平均含量來看，其中太公山（趙）、太公山、同弓山、紅旗村和大橋的胡柚中橙皮苷的含量相對較高，而五里、青石、老塢、閣底和龍繞的胡柚中含量較低。在6月上旬和6月下旬，胡柚中橙皮苷的含量較高，而在7月上旬快速下降，從7月下旬到10月隨著胡柚的逐漸成熟橙皮苷的含量緩慢下降，其中13個村的胡柚中橙皮苷的含量均在6月上旬最高。常山縣15個村6～10月份的胡柚樣品中，同弓山村6月上旬的胡柚中橙皮苷含量最高為32.11mg/g，其次是太公山（趙）六月下旬的胡柚，其橙皮苷含量為32.04mg/g。所以應(yīng)采摘同弓山6月上旬的胡柚或太公山（趙）6月下旬的胡柚進行橙皮苷的研究。

表3 不同區(qū)域胡柚生長過程中橙皮苷的含量（mg/g）

2.5 不同區(qū)域胡柚生長過程中新橙皮苷的含量分析

根據(jù)1.3.1的實驗方法，對常山縣15個村6～10月份的胡柚樣品中的新橙皮苷含量進行了監(jiān)測，結(jié)果見表4。

由表4可知，常山縣15個村的胡柚中的新橙皮苷的含量普遍較高，從平均含量來看，其中紅旗村、同弓山、小白石村、太公山（趙）和新品種的胡柚中新橙皮苷的含量相對較高，而青石、老塢、閣底和龍繞的胡柚中含量較低。15個村的胡柚中新橙皮苷的含量都在6月上旬為最大值，且?guī)缀鯙?月下旬的兩倍，從7月上旬到10月隨著胡柚的逐漸成熟新橙皮苷的含量緩慢下降。常山縣15個村6～10月份的胡柚樣品中，太公山（趙）6月上旬的胡柚中新橙皮苷含量最高為158.82mg/ g，其次是太公山6月上旬的胡柚，其新橙皮苷含量為149.94mg/g。所以應(yīng)采摘太公山（趙）和太公山6月上旬的胡柚進行新橙皮苷的研究。

2.6 胡柚生長過程中四種黃酮含量的變化

由圖5可知，不同生長時期常山胡柚中四種黃酮的含量隨著果實的成熟而逐漸下降。在6月上旬時柚皮苷和新橙皮苷的含量均非常豐富，高達116.88mg/g和121.91mg/ g。從6月上旬到7月下旬柚皮苷和新橙皮苷的含量下降明顯，7月下旬到8月下旬，則趨于穩(wěn)定，但仍有緩慢降低的趨勢，在9月份，兩種黃酮的含量均有所增長。而蕓香柚皮苷的含量在6月下旬達到最大值，之后也一直緩慢下降，橙皮苷的含量則一直保持緩慢下降。所以應(yīng)當采用6月上旬胡柚進行黃酮的提取制備。

表4 不同區(qū)域胡柚生長過程中新橙皮苷的含量（mg/g）

圖5 胡柚生長過程中四種黃酮含量的變化

3 結(jié)論

本文監(jiān)測了常山縣15個主栽村的胡柚在生長發(fā)育過程中主要黃酮類成分含量的變化規(guī)律，得到如下結(jié)論。

3.1 四種黃酮中，蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷含量最高的分別是太公山、新品種、太公山（趙）和紅旗村的胡柚，含量分別為11.17mg/g、65.76mg/g、10.51mg/g和49.00mg/ g；龍繞胡柚中的蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷含量均為最低，分別為7.57mg/g、40.93mg/g、6.56mg/g和31.17mg/g。

3.26 ～10月份的胡柚中四種黃酮總含量大小按時間排序依次為：6月上旬＞6月下旬＞7月上旬＞9月＞7月下旬＞8月上旬＞8月下旬＞10月。

3.3 常山胡柚中的黃酮主要為柚皮苷和新橙 皮 苷 ，平 均 含 量 分 別 為54.51mg/g和39.61mg/g，而蕓香柚皮苷和橙皮苷的含量較少，平均含量只有8.97mg/g和7.90mg/g。

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10.13906/j.cnki.zjgj.1009-0584.2017.02.533

2017-04-18

浙江省重大科技專項重點農(nóng)業(yè)項目（2014C02021）