切花月季‘雪山’的離體快繁體系的建立

劉洋　陳萬鵬　劉祥君

摘要：取切花月季‘雪山一年生枝條4-7節(jié)莖段為外植體，建立其離體快繁體系。以Ms培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，通過不同濃度的植物激素配比篩選最適培養(yǎng)基，探討分析植物激素對其分化及增殖的影響。結(jié)果表明，‘雪山月季離體培養(yǎng)的最適初代培養(yǎng)基為MS+6-BA1.5mg/L+NAA 0.05mg/L+GA3 0.1mg/L，最適繼代培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA3 0.1mg/L，最適生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 0.3mg/L。

關(guān)鍵詞：雪山；切花月季；離體快繁；IBA

切花月季（RosaCVS），為薔薇科薔薇屬的有刺灌木，花單生莖頂，花姿優(yōu)美，花重瓣，花形、花色豐富，深受大眾喜愛。其中，白色切花月季‘雪山種植范圍廣，適應(yīng)力強，廣受切花種植者和消費者歡迎。切花月季的傳統(tǒng)繁殖方式是扦插法，作為無性繁殖的一種方式，扦插能夠保留品種的優(yōu)良性狀，但受原種苗數(shù)量的限制，難以快速形成規(guī)模，長期扦插繁殖，植株老化，品種退化。通過建立切花月季的離體快繁體系，利用組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)種苗具有繁殖速度快，復(fù)壯品種等優(yōu)點，對于月季新品種的擴繁與大規(guī)模推廣具有重要意義。本文以切花月季‘雪山為試材，研究建立切花月季離體快繁體系，為商品化生產(chǎn)切花月季名優(yōu)品種提供科學(xué)依據(jù)。

1.試材與方法

1.1試驗材料

晴天上午，取遼寧廣播電視大學(xué)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)示范體驗基地花卉溫室內(nèi)的切花月季‘雪山健壯植株上的當(dāng)年生未開花枝條為試材。去除頂部3個芽，留4～7節(jié)腋芽，去復(fù)葉留葉柄，剪成帶單腋芽的小段。

1.2試驗方法

1.2.1初代培養(yǎng)。試材處理：將剪切好的帶腋芽莖段浸入肥皂水沖刷，自來水流水沖洗1h。在超凈工作臺上用75%酒精消毒30s，無菌水沖洗1次，0.1%氯化汞溶液浸泡并攪拌7～8min，無菌水沖洗3次，放在滅菌后的濾紙上吸干表面水分，切除莖段兩端受損部分，垂直插入初代培養(yǎng)基。

初代培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，附加不同濃度的6-BA、NAA、GA3，采用3因素3水平正交實驗設(shè)計（L9（34）），共設(shè)9個處理（如表1），每個處理接種30瓶，每瓶接種1個莖段，設(shè)3次重復(fù)，20d后統(tǒng)計出芽數(shù)量及質(zhì)量。

1.2.2繼代培養(yǎng)。初代培養(yǎng)苗長到2～3cm時，將嫩芽切割下來去除原莖段及大葉片，接入繼代培養(yǎng)基中。共設(shè)9個處理（如表1），每個處理接種20瓶，每瓶接種1棵幼嫩植株，設(shè)3次重復(fù)，25d為1周期，2個周期后調(diào)查增殖及生長狀況。

1.2.3生根培養(yǎng)。將生長健壯，高度在3～5cm的叢生苗分切單株，轉(zhuǎn)接人生根培養(yǎng)基中。生根培養(yǎng)基以1/2MS為基礎(chǔ)，蔗糖15g/L，瓊脂6.5g/L，附加不同濃度的NAA或IBA，設(shè)4個處理（如表2所示），每處理轉(zhuǎn)接20瓶，每瓶3棵單株幼苗，20d后統(tǒng)計結(jié)果。

1.2.4煉苗移栽。當(dāng)組培苗根系平均長度在0.5cm以上時，將瓶苗轉(zhuǎn)移至欲移栽的溫室中3～5d，再開蓋煉苗2d。取出幼苗洗凈根部殘留的培養(yǎng)基，移栽到用0.1%多菌靈消毒的基質(zhì)上（泥炭：蛭石：珍珠巖=1：1：1），覆膜噴水保持基質(zhì)濕潤并遮陽。視環(huán)境條件及幼苗生長狀況逐步揭膜。

2.結(jié)果與分析

2.1腋芽的誘導(dǎo)與分化

月季莖段接種5d后，腋芽開始萌動。培養(yǎng)20d后對組培苗進行芽增殖情況統(tǒng)計，由表3可知，萌動率最高值出現(xiàn)在A2處理，萌動率最高為87.8%，隨著6-BA濃度的升高萌動率降低。從芽生長狀況來看，當(dāng)6-BA濃度達2.0mg/L時，腋芽見不同程度玻璃化，當(dāng)GA₃濃度在0.1mg/L時，腋芽表現(xiàn)粗壯。芽增殖倍數(shù)隨6-BA濃度升高而升高，綜合結(jié)果表明，培養(yǎng)基MS+6-BA1.5mg/L+NAA 0.05mg/L+GAs 0.1mg/L為誘導(dǎo)‘雪山腋芽誘導(dǎo)與分化的最適培養(yǎng)基。

2.2增殖繼代培養(yǎng)

初代嫩芽繼代增殖培養(yǎng)50d后，增殖結(jié)果因激素配比不同而異。如表4所示，嫩芽增殖倍數(shù)隨6-BA濃度的升高而增大，但濃度過高且無NAA、GA3配合時會影響苗高且有玻璃化現(xiàn)象產(chǎn)生。低濃度NAA可提高苗高，配合適當(dāng)濃度GAs可培育壯苗。綜合結(jié)果表明，MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA3 0.1mg/L為‘雪山組培苗的最適繼代培養(yǎng)基，此處理芽苗生長粗壯，葉色深綠，增殖倍數(shù)為5.1，平均苗高4.25cm。

2.3生根培養(yǎng)的效果

‘雪山繼代苗接種到含NAA的生根培養(yǎng)基上4～6d，嫩莖基部膨大開始出現(xiàn)愈傷組織，10d后分化為不定根，20d后統(tǒng)計生根率、平均根數(shù)、平均根長均不及B3、B4處理。將繼代苗接種到含IBA的生根培養(yǎng)基中5d后，嫩莖基部開始生成白色根原基，10d后逐步生產(chǎn)為白色根須，綜合生長情況分析，1/2MS+IBA0.3mg/L適合‘雪山繼代苗的生根，生根率最高為94.8%，根白而粗，生根苗長勢健壯。

2.4煉苗移栽的效果

生根組培苗根長0.5cm以上時轉(zhuǎn)移到育苗溫室中進行煉苗移栽，成活率可達75%以上。生根苗的健壯程度和株高對移栽成活率影響顯著，株高低于2.5cm或高于5cm時，成活率顯著下降。此外當(dāng)根長超過1.5cm、根部呈黃褐色的老根苗移栽后也不易成活。

3.討論

植物組織培養(yǎng)方法主要分為愈傷組織再分化和芽誘導(dǎo)2種，目前切花月季組織培養(yǎng)以芽誘導(dǎo)方式培養(yǎng)較為普遍。本試驗以‘雪山切花月季1年生4～7節(jié)莖段腋芽為試材，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，添加不同濃度配比的植物激素，篩選出‘雪山組織培養(yǎng)最適初代培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.05mg/L+GA30.1mg/L，最適繼代培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0mg/L+NAA0.1mg/L+GA 3 0.1mg/L，最適生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.3mg/L。本試驗篩選出的培養(yǎng)基配比與其他品種切花月季有一定差異，這可能與其基因型不同或試驗條件不同有關(guān)。

生根苗的株高、根長及健壯程度直接影響移栽成活率，俞燕芳認(rèn)為生根苗的最適株高為2.5～4cm，本試驗生根苗低于2.5cm或高于5cm時，成活率顯著下降。株高過高的生根苗自身消耗較大且莖纖細不易輸送水分及養(yǎng)料至頂部，因而致死。根系過長移栽時易受損且緩苗慢。

本試驗初步建立了切花月季‘雪山的離體快繁體系，為商品化生產(chǎn)切花月季名優(yōu)品種提供科學(xué)依據(jù)。此外試驗過程中出現(xiàn)褐化及污染現(xiàn)象，其產(chǎn)生機理及解決方法還有待進一步探討。endprint