厚樸葉水提物抗腹瀉效果研究

謝靜 費正彬 陳玉蓮 曾云鴻 李紅 蓋文惠 楊蒙 馬林??

摘要[目的]為合理利用厚樸葉資源，研究不同劑量厚樸葉水提物對小鼠蓖麻油誘導腹瀉的影響。[方法]以蒸餾水為陰性對照、鹽酸洛哌丁胺為陽性對照，研究厚樸葉水提物低、中、高劑量組處理對蓖麻油誘導腹瀉小鼠（5組× 6只）的腹瀉率、起效時間、稀便次數(shù)、稀便級數(shù)和腹瀉指數(shù)的影響。[結(jié)果]厚樸葉水提物低劑量組和陽性對照組均具有顯著降低腹瀉率的作用；隨著厚樸葉水提物劑量的增加，對小鼠腹瀉的稀便次數(shù)有抑制作用；厚樸葉水提物也能顯著降低小鼠的稀便率，且與其劑量高低有關(guān)；厚樸葉水提物能顯著降低小鼠的平均稀便等級和腹瀉指數(shù)。但總的來說，厚樸葉水提物的效果不及鹽酸洛哌丁胺，且對蓖麻油所致小鼠的起效時間無影響。[結(jié)論]厚樸葉水提物對蓖麻油所致的小鼠腹瀉具有顯著的抑制作用，且存在一定的量效關(guān)系。

關(guān)鍵詞厚樸葉；水提物；蓖麻油；抗腹瀉

中圖分類號S567.1+1；R285.5文獻標識碼A文章編號0517-6611（2017）19-0107-03

Antidiarrhea Effect of Aqueous Extract of Magnolia officinalis Leaves

XIE Jing1， FEI Zhengbin1， CHEN Yulian1，MA Lin1，2* et al

（1. School of Life Science and Engineering， Southwest University of Science and Technology， Mianyang， Sichuan 621010；2. Engineering Research Center for Biomass Resource Utilization and Modification of Sichuan Province， Mianyang， Sichuan 621010）

Abstract[Objective] The research aimed to study the effects of different does of aqueous extraction from Magnolia officinals leaves （AEMOL） on rats diarrhea caused by castor oil， fully utilizing this resource.[Method]Using distilled water as the negative control， loperamide hydrochloride as the positive control，the effects of three different does（low， middle and high） of AEMOL on loose stools rate， onset time， numbers of loose， loose stools series and diarrhea index of the loose rats （5 groups × 6） were studied.[Result]The group of low does AEMOL and the positive control group showed significantly inhibition ratio to diarrhoea. With the does increase， it showed inhibitory effect to the number of loose；besides， AEMOL could also decrease the loose stools rate （the specific effects depend on its does）；meanwhile， AEMOL could also significantly reduce the average level of loose stools and diarrhea index.But in general the effect of AEMOL was lower than hydrochloric acid， and it showed no effect on the onset time of mice induced by castor oil.[Conclusion]The AEMOL has a significant inhibitory effect on the rat diarrhea caused by castor oil with doseeffect relationship.

Key wordsMagnolia officinalis leaves；Aqueous extraction；Castor oil；Antidiarrhea

厚樸作為我國傳統(tǒng)藥材，入藥部位為木蘭科植物厚樸（Magnolia officinalis Rehd.et Wils.）或凹葉厚樸（Magnolia officinalis Rehd.et Wils.var.biloba Rehd.et Wils.）的干燥干皮、枝皮或根皮[1-3]。厚樸酚及和厚樸酚在厚樸藥材中占5%～12%，可從厚樸葉中提取獲得[4]，研究表明其是厚樸用于抗腹瀉治療的主要活性成分。厚樸葉資源豐富[2]，但利用率較低，其常作為腐葉而廢棄，不僅浪費厚樸資源，也極大地破壞了生態(tài)環(huán)境?；诖?，人們逐漸開始重視對厚樸葉的開發(fā)和利用，對其進行了較多的研究[5]，劉存芳[6]在利用超聲輔助法提取秦巴山區(qū)采集的野生厚樸樹葉中的厚樸酚后，分別用顯色法和薄層色譜法對其進行定性鑒定，最后用反相高效液相色譜法對其含量進行測定，其含量與劉曉鵬等[7]和葉錦霞等[8]用不同方法測得的厚樸酚含量存在差異，而厚樸葉提取物對植物病原真菌具有較強的抑制活性，且通過分離、純化、鑒定發(fā)現(xiàn)該較強的抑菌活性是厚樸葉中的厚樸酚與和厚樸酚的功效[9-11]。由于厚樸葉與厚樸樹皮中均具有厚樸酚與和厚樸酚，曾紅等[12]通過比較同分異構(gòu)體厚樸酚及和厚樸酚對小鼠腹瀉和胃腸排空抑制的影響，得出厚樸酚與和厚樸酚的抗腹瀉能力相似；丁婉萍等[13]研究發(fā)現(xiàn)厚樸酚與和厚樸酚抗運動型腹瀉作用可能通過影響對胃腸功能而發(fā)揮作用，因此厚樸葉也具有顯著的抗腹瀉作用，從而拓寬了厚樸葉的開發(fā)利用前景。但是，目前對厚樸葉的抗腹瀉活性研究較少，其抗腹瀉機理尚不明確。因此，該研究擬建立腹瀉小鼠模型，研究厚樸葉的藥效活性，考察厚樸葉的抗腹瀉效應，為進一步闡明厚樸酚與和厚樸酚的抗腹瀉機理提供依據(jù)，從而對厚樸葉的藥用價值進行綜合評價，指導厚樸葉的開發(fā)利用，為厚樸藥材的全面深入開發(fā)及臨床應用奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1供試材料

1.1.1試驗動物與飼養(yǎng)條件。

普通昆明系無菌小鼠，雌雄（♀ / ♂）各半，購自四川簡陽達碩生物科技有限公司。采用標準飼料飼養(yǎng)于室溫為26 ℃、相對濕度為40%且通風良好的普通級動物室中，雌雄分籠，每籠10只，試驗于安靜環(huán)境下進行。

1.1.2試驗藥材。

厚樸葉于2015年10月采自四川省綿陽市平武縣五星村，由綿陽師范學院羅明華教授鑒定。

1.1.3主要儀器。電熱恒溫水浴鍋（北京市永明醫(yī)療儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式多用真空泵（上海道京儀器有限公司）。

1.1.4主要試劑。蓖麻油（成都市科龍化工試劑廠，批號014120201）；鹽酸洛哌丁胺（中國食品藥品檢定研究院，批號100300-200001）；其余試劑均為分析純。

1.2試驗方法

1.2.1厚樸葉水提物制備。

厚樸葉于60 ℃干燥后粉碎。取100 g厚樸葉粉末，按1∶10料液比與蒸餾水混合，60 ℃水浴浸提5 h，趁熱抽濾，收集濾液，濾渣再次浸提5 h。合并2次浸提所得濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至一定體積后，在60 ℃水浴鍋上緩慢蒸干，得厚樸葉水提固形物，于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2厚樸葉水提物抗腹瀉作用。

取小鼠30只，禁食12 h后，隨機分為5組，每組6只，雌雄各半，將小鼠單獨放在墊有濾紙的飼養(yǎng)盒中，分別灌胃0.6 mL/只的厚樸葉水提物（100、200、400 mg/kg）、鹽酸洛哌丁胺（5 mg/kg）和蒸餾水。0.5 h后，每只小鼠灌胃0.4 mL蓖麻油，每隔1 h更換濾紙1次，記錄每只小鼠6 h內(nèi)每小時腹瀉次數(shù)、稀便級數(shù)、腹瀉持續(xù)時間、首次腹瀉時間[14-15]。其中小鼠糞便可分為5種：正常便、外型正常含水較多的軟便、外型不正常的軟便、水樣便及黏液便。將前2種視為正常便，后3種視為異常便。

1.2.3試驗觀察指標[16]。

1.2.3.1腹瀉率。腹瀉動物的只數(shù)與總動物數(shù)之比。

1.2.3.2稀便率。每只動物排稀便數(shù)與總便數(shù)之比（濾紙上每?；蛎慷鸭S便為排便1次）。

1.2.3.3稀便等級。以稀便污染濾紙面積直徑（cm）定級，分為4級：1級（<1.0 cm）、2級（1.0～1.9 cm）、3級（2.0～3.0 cm）、4級（>3.0 cm）。統(tǒng)計時先逐個統(tǒng)計每一堆稀便的級數(shù)，然后將該鼠所有稀便級數(shù)相加，除以稀便次數(shù)得到稀便的平均級數(shù)。

1.2.3.4腹瀉指數(shù)。稀便率與稀便平均等級的乘積。

1.3數(shù)據(jù)處理

計算各項考察指標的平均值，利用DPS 2006統(tǒng)計分析軟件進行數(shù)據(jù)處理，采用LSD法進行處理間多重比較分析。

2結(jié)果與分析

2.1厚樸葉水提物對蓖麻油致腹瀉小鼠腹瀉率、起效時間和稀便次數(shù)的影響

觀察各處理組的小鼠腹瀉情況，記錄灌胃蓖麻油后的首次排稀便時間（起效時間），統(tǒng)計6 h內(nèi)的排稀便次數(shù)，結(jié)果見表1。

從表1可看出，與陰性對照組相比，厚樸葉水提物低劑量組和陽性對照組腹瀉率顯著降低（P<0.05），而厚樸葉水提物中、高劑量組差異均不顯著（P>0.05），但鹽酸洛哌丁胺能明顯降低腹瀉率，是因為陰性與陽性對照組之間差異顯著（P<0.05）。起效時間，厚樸葉水提物不同劑量組與陰性對照組無顯著性差異（P>0.05），但數(shù)值上比陰性對照組略高，表明厚樸葉水提物對起效時間也有一定的影響。稀便次數(shù)，厚樸葉水提物中、高劑量組較陰性對照組顯著減少（P<005），而厚樸葉水提物低劑量組和陰性對照組相比無顯著性差異（P>0.05），從數(shù)值的大小可知，稀便次數(shù)與厚樸葉水提物的劑量成反比，因此厚樸葉水提物能顯著降低蓖麻油致小鼠腹瀉的稀便次數(shù)。

2.2厚樸葉水提物對蓖麻油致腹瀉小鼠稀便率、稀便等級和腹瀉指數(shù)的影響

根據(jù)小鼠的腹瀉情況考察腹瀉小鼠的稀便率、稀便平均等級和腹瀉指數(shù)，不僅可以考慮稀便量的變化，還能考慮到質(zhì)的因素，從而更能全面和客觀地反映厚樸葉水提物對蓖麻油致腹瀉小鼠的影響。因此在DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)中對稀便率、稀便等級、腹瀉指數(shù)進行了單因素下的LSD多重比較分析，結(jié)果見表2。

由表2可知，與陰性對照組相比，厚樸葉水提物各劑量組的稀便率均顯著降低（P<0.05），雖然數(shù)值上比陽性對照

組大，但明顯小于陰性對照組，因此厚樸葉水提物能顯著降

低小鼠的稀便率。從平均稀便等級來看，厚樸葉水提物低劑量組與陰性對照組相比顯著降低（P<0.05），而厚樸葉水提物中、高劑量組與陰性對照組相比無顯著性差異（P>0.05），厚樸葉水提物劑量組均低于陰性對照組，但明顯高于陽性對照組，因此厚樸葉水提物能顯著降低小鼠的平均稀便等級。腹瀉指數(shù)，厚樸葉水提物低、中、高劑量組均低于陰性對照組，多重比較分析顯示厚樸葉水提物低、高劑量組與陰性對照組相比有顯著性差異（P<0.05），因此厚樸葉水提物能顯著降低小鼠的腹瀉指數(shù)。

3討論與結(jié)論

厚樸作為我國傳統(tǒng)的中藥材，在傳統(tǒng)中藥中占有重要的地位，同時厚樸資源豐富，分布廣泛，且易得，為其藥用價值的研究與開發(fā)奠定了基礎(chǔ)?，F(xiàn)代藥理研究試驗表明，厚樸具有重要的抗腹瀉藥理作用[17-19]，其植物體內(nèi)的厚樸酚與和厚樸酚的抗腹瀉是辛溫（熱）合歸脾胃經(jīng)中藥藥性中的一項共同藥效[20]。而腹瀉的病理基礎(chǔ)在于感染或非感染因素的刺激使腸道黏膜發(fā)炎、水腫，引起腸分泌和運動功能亢進，最終表現(xiàn)出稀便和便頻等系列癥狀[21]。由于厚樸的乙醇提取物（主要成分為厚樸酚與和厚樸酚）在小鼠試驗性潰瘍、藥物性小鼠腹瀉的影響中對消化系統(tǒng)有顯著的促進作用[22]，因此，該研究考察了不同劑量厚樸葉水提物對蓖麻油誘導小鼠腹瀉的抗腹瀉影響，發(fā)現(xiàn)厚樸葉水提物低劑量組和陽性對照組均有顯著降低腹瀉率的作用。厚樸葉水提物對蓖麻油所致小鼠的起效時間無影響；對于稀便次數(shù)，厚樸葉水提物中劑量組和高劑量組與陰性對照組相比均呈顯著差異，且厚樸葉水提物不同劑量組之間的稀便次數(shù)與劑量成反比，表明隨著厚樸葉水提物劑量的增加，對小鼠排稀便起到了抑制作用。從稀便率來看，厚樸葉水提物3個劑量組與陰性對照組相比也均顯著下降；對于平均稀便等級，低劑量組與陰性對照組存在顯著差異；對于腹瀉指數(shù)，低劑量組和高劑量組與陰性對照組相比也均有顯著差異，表明厚樸葉水提物具有拮抗小鼠腹瀉的作用。由此可見，除起效時間以外，厚樸葉水提物對小鼠腹瀉的抑制明顯低于陽性對照組（鹽酸洛哌丁胺），但在不同程度上高于陰性對照組（蒸餾水），厚樸葉水提物低、中、高劑量組的不同考察指標數(shù)據(jù)未呈現(xiàn)一定的規(guī)律性，這可能與藥物的量效依賴性有關(guān)[23]。

綜上所述，厚樸葉水提物對蓖麻油所致的小鼠腹瀉具有顯著的抑制作用。有學者運用小鼠腹瀉和抗炎模型對半夏、厚樸、木香、蒼術(shù)、蓮須等十余種中草藥進行抗腹瀉作用研究，提出“炎癥介質(zhì)是病人體內(nèi)產(chǎn)生的一類致瀉性物質(zhì)”一說，并認為厚樸等中藥治療多數(shù)感染性和非感染性腹瀉是通過抑制炎癥的發(fā)生、發(fā)展或炎癥介質(zhì)的合成與釋放或?qū)寡装Y介質(zhì)的瀉下作用產(chǎn)生抗腹瀉作用[22，24-26]。龐月蘭等[27]分析指出厚樸酚與和厚樸酚可能是通過調(diào)節(jié)胃腸蠕動和以Ca2+拮抗劑的形式抑制炎癥的發(fā)生以發(fā)揮抗腹瀉作用。Gilani等[28]研究野扇花生物堿的抗腹瀉活性，也認為抗腹瀉機制是生物堿阻斷了Ca2+通道而發(fā)揮作用。該研究僅進行了厚樸葉水提物抑制小鼠腹瀉的初步研究，有待進一步進行抗腹瀉機制等方面研究，從而為厚樸葉的藥用研究和資源開發(fā)利用提供更充分的理論依據(jù)。

45卷19期謝 靜等厚樸葉水提物抗腹瀉效果研究

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