用熒光定量PCR及金標(biāo)法、酶聯(lián)免疫法檢測不孕婦女生殖道沙眼衣原體感染的比較

吳喬羽

用熒光定量PCR及金標(biāo)法、酶聯(lián)免疫法檢測不孕婦女生殖道沙眼衣原體感染的比較

吳喬羽

目的 評價熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)、金標(biāo)法、酶聯(lián)免疫法檢測不孕婦女生殖道沙眼衣原體感染的應(yīng)用效果。方法 57例確診為生殖道沙眼衣原體感染的不孕婦女作為研究對象,使用一次性無菌采樣拭子采集患者宮頸口分泌物,分別采用熒光定量PCR、金標(biāo)法、酶聯(lián)免疫法檢測沙眼衣原體,對比三種檢測方法的陽性率。結(jié)果 熒光定量PCR(96.49%)與酶聯(lián)免疫法(92.98%)的沙眼衣原體陽性檢出率比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.704,P>0.05)；熒光定量PCR及酶聯(lián)免疫法的沙眼衣原體陽性檢出率均高于金標(biāo)法(82.46%),差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.961、2.931,P<0.05)。結(jié)論 與金標(biāo)法比較,熒光定量PCR和酶聯(lián)免疫法檢測不孕婦女生殖道沙眼衣原體感染的準(zhǔn)確性更高,兩種方法均可為該疾病患者臨床治療方案的制定提供具有高度客觀性的參考依據(jù)。

不孕婦女；生殖道沙眼衣原體感染；熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；金標(biāo)法；酶聯(lián)免疫法

生殖道沙眼衣原體感染是近年來才被命名的一種疾病,是指由沙眼衣原體感染所引起的生殖道炎性反應(yīng),屬于性傳播疾?。?］。臨床研究發(fā)現(xiàn),不孕婦女多合并生殖道沙眼衣原體感染,對身心健康產(chǎn)生的危害較大。因此,臨床迫切需要一種檢測生殖道沙眼衣原體感染快速、準(zhǔn)確的方法［2］?，F(xiàn)階段,用于檢測生殖道沙眼衣原體感染的方法主要有三種,分別為熒光定量PCR、酶聯(lián)免疫法和金標(biāo)法［3］。為進(jìn)一步明確上述三種檢測方法的應(yīng)用價值,本院選取57例生殖道沙眼衣原體感染不孕患者作為研究對象開展課題研究,現(xiàn)將研究內(nèi)容報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2015年3月～2016年3月收治的57例生殖道沙眼衣原體感染不孕患者作為研究對象,患者的生殖道沙眼衣原體感染均經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)確診。57例患者年齡26～43歲,平均年齡(32.2±3.7)歲,其中原發(fā)性不孕患者14例,繼發(fā)性不孕患者43例,不孕時間3～16年,平均不孕時間(7.1±1.9)年。開展本課題研究前本院已事先向患者講解研究目的及方法,患者均同意參與本課題研究,并簽署研究知情同意書。

1.2 研究方法 使用一次性無菌采樣拭子采集57例患者宮頸口分泌物,分別采用熒光定量PCR、金標(biāo)法、酶聯(lián)免疫法檢測沙眼衣原體。

1.2.1 熒光定量PCR 將采集到的標(biāo)本洗入1 ml無菌生理鹽水中,在無菌生理鹽水中加100 μl DNA提取液,搖晃混勻,以13000轉(zhuǎn)/min的速度離心10 min,棄上清液,再加入50 μl DNA提取液,震蕩混勻,煮沸10 min,再次以13000轉(zhuǎn)/min的速度離心10 min,以上清液為DNA擴(kuò)增反應(yīng)模板,反應(yīng)條件：溫度37℃、時間94 min,溫度95℃、時間1 min,溫度94℃、時間5 s,溫度60℃、時間40 s,共進(jìn)行40個循環(huán)。當(dāng)熒光強(qiáng)度>1×103copies/ml判定為陽性。

1.2.2 金標(biāo)法 將標(biāo)本放置在樣品處理管中,檢測試劑盒購自南京森貝伽生物科技有限公司,按照試劑盒進(jìn)行操作,10 min后觀察結(jié)果,分別采用熱滅活衣原體和熱滅活B鏈球菌作為陽性對照,設(shè)置對照區(qū)和檢測區(qū),對照區(qū)有紅線,檢測區(qū)無紅線判定為陰性,對照區(qū)和檢測區(qū)均有紅線判定為陽性。

1.2.3 酶聯(lián)免疫法 酶聯(lián)免疫法檢測使用酶標(biāo)儀為全自動酶標(biāo)檢測儀(購自美國Trinity公司),檢測試劑為儀器配套試劑,嚴(yán)格按照檢測儀器說明書和試劑說明書進(jìn)行操作,由儀器對檢測結(jié)果進(jìn)行判定。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察熒光定量PCR、金標(biāo)法、酶聯(lián)免疫法檢測沙眼衣原體的陽性率。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

熒光定量PCR檢測沙眼衣原體的陽性率為96.49%,金標(biāo)法檢測沙眼衣原體的陽性率為82.46%,酶聯(lián)免疫法檢測沙眼衣原體的陽性率為92.98%。熒光定量PCR與酶聯(lián)免疫法的沙眼衣原體陽性檢出率比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.704,P>0.05)；熒光定量PCR及酶聯(lián)免疫法的沙眼衣原體陽性檢出率均高于金標(biāo)法,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.961、2.931,P<0.05)。見表1。

表1 熒光定量PCR、金標(biāo)法、酶聯(lián)免疫法檢測沙眼衣原體的陽性率比較［n(%)］

3 討論

熒光定量PCR、金標(biāo)法、酶聯(lián)免疫法在生殖道沙眼衣原體檢測中的應(yīng)用均較為廣泛［4-6］。熒光定量PCR是二十世紀(jì)末發(fā)展起來的一種新檢測技術(shù),該種檢測技術(shù)的檢測原理是在PCR擴(kuò)增時加入一對引物和特異性的熒光探針,通過熒光能量傳遞技術(shù)和閉管檢測獲得最終檢測結(jié)果［7-9］?？偨Y(jié)應(yīng)用經(jīng)驗發(fā)現(xiàn),該種檢測方法能夠有效避免傳統(tǒng)PCR易污染的缺點(diǎn),故獲得檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性更高。

金標(biāo)法即免疫金標(biāo)記技術(shù),在全世界范圍內(nèi)應(yīng)用較為廣泛,具有特異性高、操作簡便的應(yīng)用優(yōu)勢,檢測時無需使用特殊的設(shè)備。但近年來報道的臨床研究均表明該種檢測方法靈敏度較低［10-12］。酶聯(lián)免疫法是上個世紀(jì)70年代發(fā)展起來的一種檢測體液中微量物質(zhì)的固相免疫測定方法,現(xiàn)階段已成為化學(xué)領(lǐng)域中的重點(diǎn)研究課題,且多數(shù)實踐研究均證實該種檢測方法具有特異性高、靈敏度高的應(yīng)用優(yōu)勢［13-15］。

本課題研究對上述三種檢測方法在檢測不孕婦女生殖道沙眼衣原體感染中的應(yīng)用效果進(jìn)分析。結(jié)果顯示,熒光定量PCR檢測沙眼衣原體的陽性率為96.49%,金標(biāo)法檢測沙眼衣原體的陽性率為82.46%,酶聯(lián)免疫法檢測沙眼衣原體的陽性率為92.98%。熒光定量PCR與酶聯(lián)免疫法的沙眼衣原體陽性檢出率比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.704,P>0.05)；熒光定量PCR及酶聯(lián)免疫法的沙眼衣原體陽性檢出率均高于金標(biāo)法,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.961、2.931,P<0.05)。

綜上所述,熒光定量PCR和酶聯(lián)免疫法在不孕婦女生殖道沙眼衣原體感染檢測中所具有的應(yīng)用優(yōu)勢更明顯,兩種檢測方法均可為該疾病患者臨床治療方案的制定提供具有高度客觀性的參考依據(jù),值得各大醫(yī)院開展應(yīng)用。

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Comparison of fluorescent quantitation PCR,golden-standard method and euzymelinked immunosorbent assay in detection of genital chlamydia trachomatis infection in infertility women

WU Qiao-yu.

Department of Clinical Laboratory,Dongguan City Zhongtang Hospital,Dongguan 523220,China

Objective To evaluate the application effect of fluorescent quantitation polymerase chain reaction(PCR),golden-standard method and euzymelinked immunosorbent assay in detection of genital chlamydia trachomatis infection in infertility women.Methods A total of 57 infertility women with confirmed genital chlamydia trachomatis infection as study subjects,and their cervical secretions were collected with disposable sterile swab sampling.Detection were made on chlamydia trachomatis by fluorescent quantitation PCR,goldenstandard method and euzymelinked immunosorbent assay,and the positive rate of three detection methods was compared.Results There was no statistically significant difference in positive detection rate in chlamydia trachomatis between fluorescent quantitation PCR(96.49%)and euzymelinked immunosorbent assay(92.98%)(χ2=0.704,P>0.05).Fluorescent quantitation PCR and euzymelinked immunosorbent assay had higher positive detection rate in chlamydia trachomatis than golden-standard method(82.46%),and the difference had statistical significance(χ2=5.961,2.931,P<0.05).Conclusion Compared with golden-standard method,fluorescent quantitation PCR and euzymelinked immunosorbent assay provides higher accuracy rate in detection of genital chlamydia trachomatis infection in infertility women,and both methods can provide highly objective reference for establishment of clinical treatment regimens for patients with this disease.

Infertility women; Genital chlamydia trachomatis infection; Fluorescent quantitation polymerase chain reaction; Golden-standard method; Euzymelinked immunosorbent assay

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.06.016

2017-02-17］

523220 東莞市中堂醫(yī)院檢驗科