扶正培本方對CIK細(xì)胞免疫治療的影響

歐陽郴生，李時(shí)光，楊振江，古宏暉，劉心亮，陳 鐘，汪桃利，李 琦

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)深圳臨床醫(yī)學(xué)院，廣東深圳518033）

扶正培本方對CIK細(xì)胞免疫治療的影響

歐陽郴生，李時(shí)光，楊振江，古宏暉，劉心亮，陳 鐘，汪桃利，李 琦

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)深圳臨床醫(yī)學(xué)院，廣東深圳518033）

Eeffect of Fuzheng Peiben decoction on CIK cell immunotherapy

目的：癌癥是全球發(fā)病和死亡的主要原因，已逐步成為我國居民的主要慢性疾病之一，對個(gè)人與社會(huì)均造成巨大負(fù)擔(dān)。腫瘤治療除了常規(guī)手術(shù)、放化療之外，免疫治療（CIK）逐漸成為腫瘤治療的新手段之一。探討扶正培本方聯(lián)合CIK治療能否產(chǎn)生協(xié)同增效的作用。方法：納入病人44例隨機(jī)分為CIK組（對照組，n=22）和扶正培本方聯(lián)合CIK組（治療組，n=22），抽血觀察患者外周血淋巴細(xì)胞亞群，NK細(xì)胞和T輔助細(xì)胞分型（Th1，Th2，Th17及Treg）的變化。結(jié)果：淋巴細(xì)胞亞群分析顯示，對照組及治療組中對淋巴細(xì)胞，NK細(xì)胞均無顯著性差異，但中藥聯(lián)合CIK治療后，患者CD4+CD25+Foxp3+Treg顯著降低（P＜0.05）。結(jié)論：扶正培本方聯(lián)合CIK可能有助于減輕免疫抑制，活化免疫反應(yīng)。

CIK；扶正培本方；腫瘤；Treg

根據(jù)世界衛(wèi)生組織發(fā)布的《世界腫瘤報(bào)告2014》，癌癥已成為全球?qū)е滤劳龅闹饕膊≈唬?012年約有1 400萬人被診斷患有癌癥和820萬例癌癥病人死亡［1］。其中22%的癌癥新發(fā)病例及27%的癌癥死亡病例均發(fā)生在中國，據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國2011年全國惡性腫瘤發(fā)病率為250.28/ 10萬（約300萬人），死亡率為156.84/10萬（約195萬人），隨著惡性腫瘤發(fā)病率和死亡率的逐步升高，癌癥嚴(yán)重威脅著我國居民的生活質(zhì)量及健康［2］。

《內(nèi)經(jīng)》有云“正氣存內(nèi)，邪不可干，邪之所湊，其氣必虛”。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與“正氣”的強(qiáng)弱關(guān)系密切，正氣即抵御外邪之機(jī)體的免疫機(jī)能。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)針對惡性腫瘤的治療手段發(fā)展迅速、種類繁多，已經(jīng)由傳統(tǒng)的手術(shù)、放療、化療治療發(fā)展至靶向治療、免疫治療、疫苗等。手術(shù)及放化療治療副作用大，中晚期惡性腫瘤患者難以耐受，細(xì)胞免疫治療（cytokine-induced killer cells，CIK）逐漸引起臨床重視，并成為研究的熱點(diǎn)［3-4］，研究發(fā)現(xiàn)其能夠提高患者的免疫力，改善機(jī)體內(nèi)環(huán)境，清除微小殘留病灶，延長惡性腫瘤患者的生存時(shí)間，但也發(fā)現(xiàn)中晚期腫瘤患者的機(jī)體狀態(tài)差，免疫低下，較難從CIK治療中獲益［3］。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為“腎為先天之本，脾為后天之本”，脾、腎是人體一身正氣之根本，扶正培本是我們對晚期腫瘤患者常用的治療方法，培補(bǔ)脾腎有助于扶助正氣，是提高患者免疫機(jī)能的重要方法，也是中醫(yī)治療腫瘤的主要原則之一。本研究旨在探索扶正培本方對CIK治療是否有協(xié)同增效作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

在深圳市中醫(yī)院經(jīng)知情同意后招募中晚期癌癥患者44例，隨機(jī)分為治療組（扶正培本方加CIK組）22例，對照組（單純CIK治療組）22例。其中男26例（治療組14例，對照組12例），女18例（治療組8例，對照組10例），年齡在35歲～70歲之間，治療組和對照組患者性別、年齡、病理分型及臨床分期比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.1），具有可比性。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

經(jīng)過細(xì)胞學(xué)或病理組織明確診斷，符合惡性腫瘤診斷的患者；放化療結(jié)束1個(gè)月以上或未經(jīng)放化療治療；KPS評分≥60分；年齡35～70歲；預(yù)計(jì)生存期超過3個(gè)月；血常規(guī)及肝、腎功能正常，心電圖檢查無明顯異常；患者自愿并能夠遵守所有治療要求，通過本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，簽署參加該項(xiàng)治療的書面知情同意書。

1.3 CIK細(xì)胞培養(yǎng)方法

抽取中晚期惡性腫瘤患者的肝素抗凝外周血75 mL，分離單個(gè)核細(xì)胞，把這些細(xì)胞加入到含有IFN-γ，小鼠抗人CD3單抗的IL-2和IL-1α等培養(yǎng)因子進(jìn)一步培養(yǎng)。培養(yǎng)14~18 d后，離心收集CIK細(xì)胞，對細(xì)胞進(jìn)行無菌、細(xì)胞活力、腫瘤殺傷等檢測合格后回輸患者。給予患者細(xì)胞靜脈輸注，每次輸注細(xì)胞數(shù)量約1×109個(gè)，總體200 mL，采用培養(yǎng)液回輸，每次1袋（200 mL），連輸2 d為1個(gè)療程。

1.4 干 預(yù)

對照組：單純CIK免疫治療。治療組：在對照組的基礎(chǔ)上給予扶正培本方（組方：黨參20 g，白術(shù)10 g，山萸肉10 g，菟絲子10 g等）口服，并于CIK免疫治療前3 d開始服用。200 mL/次，2次/d，水煎服，真空包裝，每日1劑，分袋，每袋200 mL，分早晚服用。

1.5 觀察指標(biāo)

檢測淋巴細(xì)胞亞群（T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞），Th1、Th2、Th17、CD4+CD25+Foxp3+Treg。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析將利用SPSS16.0軟件分析，治療組、對照組兩組比較采用Independent Sample T檢驗(yàn)。數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。

2 結(jié) 果

本研究共納入病人44例，完成治療44例，未出現(xiàn)脫落例數(shù)。淋巴細(xì)胞亞群分析顯示，對照組及治療組中CD3+，CD3+CD8+，CD3+CD4+，CD4+/CD8+，CD3+CD4+CD8+，NK細(xì)胞和B細(xì)胞治療前后組內(nèi)及組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表1）。我們進(jìn)一步研究T細(xì)胞亞群在兩組之間的差異，結(jié)果顯示中藥聯(lián)合CIK治療后，CD4+CD25+Foxp3+Treg顯著降低（見圖1），顯示免疫抑制減少，但數(shù)據(jù)顯示兩組對Th1，Th2及Th17影響差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表2）。結(jié)果顯示扶正培本方可能有助于減輕免疫抑制，活化免疫反應(yīng)。

圖1

3 討 論

近年來，國內(nèi)外現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對晚期惡性腫瘤的治療展開日新月異的研究，而中醫(yī)學(xué)認(rèn)為健脾補(bǔ)腎，扶正益氣，固本培元是晚期惡性腫瘤的治療大法。本研究旨在觀察應(yīng)用扶正培本法中藥能否對CIK免疫治療起到協(xié)同增效，增強(qiáng)機(jī)體生物免疫調(diào)節(jié)的作用，從而提高腫瘤抑制療效、提高生活質(zhì)量及降低腫瘤轉(zhuǎn)移率，這一問題值得我們進(jìn)一步探索。

本次研究嘗試運(yùn)用隨機(jī)對照的臨床試驗(yàn)，運(yùn)用隨機(jī)對照臨床觀察客觀評價(jià)扶正培本方聯(lián)合CIK免疫治療晚期腫瘤的療效，并為中醫(yī)藥結(jié)合CIK免疫治療惡性腫瘤提供經(jīng)驗(yàn)。研究發(fā)現(xiàn)扶正培本方聯(lián)合CIK能顯著減少調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）的數(shù)量，減輕免疫抑制。研究發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞增強(qiáng)而加重腫瘤患者免疫抑制，可能是導(dǎo)致免疫調(diào)節(jié)功能下降的重要因素，大部分腫瘤患者外周血存在Treg細(xì)胞升高的現(xiàn)象［4］。毛麗偉等［5］發(fā)現(xiàn)CIK可顯著降低胃癌合并腹水患者外周血Treg細(xì)胞比例，下調(diào)Foxp3 mRNA基因表達(dá)，降低Treg細(xì)胞的免疫抑制效應(yīng)，有利于誘導(dǎo)抗腫瘤免疫效應(yīng)。本研究發(fā)現(xiàn)扶正培本方聯(lián)合CIK治療能降低Treg

表1 淋巴細(xì)胞亞群分析 （±s）

表1 淋巴細(xì)胞亞群分析 （±s）

組別 例數(shù) CD3+CD3+CD8+CD3+CD4+CD4+/CD8+CD3+CD4+CD8+NK cell CD19+/CD45+對照組 22 72.55±1.99 27.14±1.27 41.05±2.00 1.59±0.11 0.45±0.14 10.82±1.35 11.41±1.32治療組 22 72.09±2.02 26.73±1.33 40.18±2.02 1.58±0.11 0.32±0.12 10.27±1.74 11.59±1.25 P值 0.873 0.825 0.763 0.961 0.471 0.805 0.921

表2 輔助性T細(xì)胞 （±s）

表2 輔助性T細(xì)胞 （±s）

組別 例數(shù) Th17 Th2 Th1 Th1/Th2 CD4+CD4+CD25+對照組 22 2.91±0.80 1.65±0.31 8.86±1.96 5.62±1.21 7.42±1.18 0.91±0.14治療組 22 2.21±0.45 2.22±0.75 9.02±2.32 6.81±2.08 5.80±0.72 0.70±0.09 P值 0.454 0.484 0.957 0.623 0.252 0.207

細(xì)胞的表達(dá)，提高免疫力，減少腫瘤的免疫逃逸。扶正培本方由黨參、白術(shù)、山萸肉、菟絲子、山藥、當(dāng)歸等組成，研究發(fā)現(xiàn)其中不少中藥能顯著增加免疫機(jī)能，如黨參能夠明顯阻斷小鼠因環(huán)磷酰胺和鈷放射引起的免疫抑制，調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫狀態(tài)［6-7］。研究發(fā)現(xiàn)黨參、白術(shù)、當(dāng)歸、黃芪等組成的復(fù)方亦均有效改善免疫功能，降低免疫耐受［8-9］。課題組研究數(shù)據(jù)顯示：扶正培本方對CIK治療能夠起到協(xié)同增效，提高免疫功能，降低免疫逃逸，可能抑制或延緩惡性腫瘤的進(jìn)展。

本研究存在不足，首先由于樣本量小，未能發(fā)現(xiàn)其他指標(biāo)存在顯著性差異。其次，長期隨訪療效仍在收集觀察中。這些不足尚待將來進(jìn)一步探究?？傊?，扶正培本聯(lián)合CIK治療能下調(diào)CD4+CD25+Foxp3的表達(dá)，顯著增強(qiáng)腫瘤患者的免疫力，進(jìn)而殺傷腫瘤細(xì)胞，其確切療效需要進(jìn)一步的大型隨機(jī)對照研究進(jìn)行驗(yàn)證。

［1］International Agency for Research on Cancer.World cancer report 2014［M］.Geneva：WHO，2014.

［2］陳萬青.中國2010年惡性腫瘤發(fā)病與死亡［J］.中國腫瘤，2014（1）：1-10.

［3］鄭振東.自體CIK細(xì)胞治療對不同階段腫瘤患者免疫功能的影響［J］.臨床腫瘤學(xué)雜志，2014，19（6）：498-502.

［4］Tosolini M.Clinical impact of different classes of infiltrating T cytotoxic and helper cells（Th1，Th2，Treg，Th17）in patients with colorectal cancer ［J］.Cancer Res，2011，71（4）：1 263-1 271.

［5］毛麗偉.DC-CIK對胃癌合并腹水患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞增殖及功能的影響［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2016，24（12）：33.

［6］秦韜.硒化黨參多糖對免疫抑制小鼠免疫功能的影響［C］.中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)藥理毒理學(xué)分會(huì)會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)討論會(huì)與中國毒理學(xué)會(huì)獸醫(yī)毒理專業(yè)委員會(huì)第五次學(xué)術(shù)研討會(huì)，2015.

［7］張曉君.黨參多糖對小鼠免疫和造血功能的影響［C］.中藥新藥與臨床藥理二十周年刊慶祝大會(huì)暨世中聯(lián)中藥藥理專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)，2011.

［8］閆琳，梅景良，黃一帆.加味玉屏風(fēng)散對實(shí)驗(yàn)性免疫抑制黃鱔非特異性免疫功能的影響［C］.中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)藥理毒理學(xué)分會(huì)第十次研討會(huì)論文摘要集，2009.

［9］苗明三，方曉艷.當(dāng)歸補(bǔ)血湯粗多糖對免疫抑制小鼠免疫功能的影響［J］.中藥藥理與臨床，2003，19（6）：8-9.

（編輯：翟春濤）

R282

A

1671-0258（2017）02-0058-03

深圳市科技計(jì)劃項(xiàng)目（JCYJ20150401163841057）85/2

歐陽郴生，主任醫(yī)師，E-mail：ouyangchensheng@126.com