化學(xué)發(fā)光免疫分析法聯(lián)合TPPA法在梅毒血清學(xué)篩查中的應(yīng)用研究

張新衛(wèi)

【摘要】 目的：探討化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）聯(lián)合梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）在梅毒血清學(xué)篩查中的應(yīng)用價值。方法：選取2014年

2月-2016年2月筆者所在醫(yī)院門診婦科收治的疑似梅毒患者200例為試驗對象。所有患者均取晨起空腹靜脈血檢測，初篩試驗采用CLIA法展開特異性梅毒螺旋體抗體試驗，再將標(biāo)本經(jīng)TPPA與梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）進行復(fù)檢。比較不同S/CO值標(biāo)本TPPA與TRUST復(fù)檢結(jié)果。結(jié)果：S/CO值<1.00，兩者復(fù)檢符合率均可達100%，但TPPA復(fù)檢S/CO值為1.00～2.99、3.00～5.99、6.00～8.99、9.00～11.99及>12.00標(biāo)本符合率分別為91.30%、94.87%、97.14%、96.43%、100%，均明顯高于TRUST的63.04%、69.23%、68.57%、75.00%、77.78%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。TPPA復(fù)檢CLIA初篩結(jié)果符合率明顯高于TRUST復(fù)檢符合率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：化學(xué)發(fā)光免疫分析法聯(lián)合TPPA法在梅毒血清學(xué)篩查中，能夠顯著提升檢測準(zhǔn)確度，減少漏診、誤診現(xiàn)象，有助于早期臨床診斷病情，進而及時治療，值得推廣。

【關(guān)鍵詞】 化學(xué)發(fā)光免疫分析法； 梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗； 梅毒； 血清學(xué)篩查

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.15.023 文獻標(biāo)識碼 B 文章編號 1674-6805（2017）15-0042-02

梅毒是一種傳染性較強、病程較長的性傳播疾病，可嚴(yán)重?fù)p害心血管、神經(jīng)等多系統(tǒng)，對人們健康危害極大，尤其威脅臨床輸血安全[1]。此外，梅毒可通過母嬰傳播這一途徑將梅毒傳染至胎兒，進而造成先天梅毒、自發(fā)性流產(chǎn)。故早期診治梅毒顯得尤為重要。目前臨床常用的檢測方式為血清學(xué)篩查，包括酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）、CLIA、TPPA、TRUST等。其中ELISA、CLIA、TPPA屬于特異性梅毒抗體試驗，而TRUST屬于非特異性梅毒抗體試驗[2]。多數(shù)醫(yī)院采用上述其中的兩種方式篩查梅毒，但因選用不同的方式可能導(dǎo)致檢測結(jié)果產(chǎn)生差異。本研究擬用CLIA法聯(lián)合TPPA法進行梅毒血清學(xué)篩查，探討其臨床應(yīng)用價值，為梅毒早期診斷提供合理借鑒，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2014年2月-2016年2月筆者所在醫(yī)院門診婦科收治的疑似梅毒患者200例為試驗對象，年齡23～70歲，平均（36.84±3.26）歲。

1.2 儀器與設(shè)備

微量U形反應(yīng)板、平板混合器、微量滴管（25 μl/滴）、微量加樣器（25 μl）。CLIA法采用Chem cline全自動化學(xué)發(fā)光儀，應(yīng)用北京科美生物技術(shù)有限公司提供的配套試劑盒。TPPA試劑盒由日本富士瑞必歐株式會社提供，包括血清稀釋液、陽性對照血清、致敏粒子、溶解液等。TRUST試劑購自上海榮盛生物藥業(yè)有限公司。

1.3 方法

所有患者均取3 ml晨起空腹?fàn)顟B(tài)下靜脈血，行離心處理15 min，轉(zhuǎn)速為3000 r/min，血清分離后，制作血清標(biāo)本，于4 ℃保存。采用全自動分析儀進行CLIA測試，并讀取結(jié)果。參照實際說明書，S為待測樣品發(fā)光值，陰性對照品平均發(fā)光值的2.1倍為臨界值（CO）。S/CO<1.00為陰性，S/CO≥1.00為陽性，若S/CO處于（1±10%）范圍內(nèi)，給予內(nèi)雙孔復(fù)查。采取手工操作實施TPPA法，根據(jù)試劑說明書，肉眼評判檢測結(jié)果。細(xì)胞以光滑紐扣狀沉積于反應(yīng)孔中央判為陰性；若細(xì)胞凝集于反應(yīng)孔，且表現(xiàn)為不規(guī)則沉積判為陽性。滴度超過1∶80時判為陽性。重復(fù)2次測定弱陽性標(biāo)本，復(fù)測結(jié)果2次均為陰性者判為陰性，反之為陽性。TRUST試驗肉眼評判結(jié)果，其中陽性標(biāo)準(zhǔn)為凝集，凝集最高稀釋度為陽性滴度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 19.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料用（x±s）表示，計數(shù)資料以率（%）表示，比較用字2檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

S/CO值<1.00，兩者復(fù)檢符合率均可達100%，但TPPA復(fù)檢S/CO值為1.00～2.99、3.00～5.99、6.00～8.99、9.00～11.99及>12.00標(biāo)本符合率均明顯高于TRUST，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。TPPA復(fù)檢CLIA初篩結(jié)果符合率達96.00%，符合率=（158+34）/200×100%。TRUST復(fù)檢符合率為74.50%，符合率=（115+34）/200×100%，TPPA復(fù)檢CLIA初篩結(jié)果符合率明顯高于TRUST復(fù)檢符合率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（字2=36.761，P<0.05），見表1、表2。

3 討論

梅毒是由蒼白密螺旋體感染導(dǎo)致的性傳播疾病，其病原體可累及全身所有臟器，引起多器官病變、破壞組織，從而導(dǎo)致功能失常。近年來，隨著人們行為觀念及生活方式的變化，梅毒發(fā)病率呈明顯上升趨勢，逐漸引起臨床重點關(guān)注[3]。由于梅毒螺旋體僅存在于人體內(nèi)，故人是唯一的梅毒傳染源。文獻[4]顯示，95%～98%左右的患者是通過性接觸而感染，梅毒螺旋體通過穿透人體正常皮膚及黏膜，從而使健康者感染梅毒?；颊呷旧厦范竞笃湫难芟到y(tǒng)與神經(jīng)系統(tǒng)嚴(yán)重受損，生命安全受到威脅，同時該病具有較強的傳染性，因而積極防治梅毒對維護社會公共衛(wèi)生安全具有重要意義。

傳統(tǒng)上梅毒篩查方式主要有兩種，一是初篩以特異性梅毒螺旋體試驗，復(fù)檢應(yīng)用非特異性梅毒螺旋體試驗；另外一種方式中初篩與復(fù)檢分別應(yīng)用非特異性與特異性梅毒螺旋體試驗。在梅毒血清學(xué)篩查中，較高的敏感度是對檢查方式的重點要求，目前，CLIA是梅毒初篩試驗中應(yīng)用較為普遍的一種方式，制備梅毒螺旋體抗原，并以辣根過氧化物酶進行標(biāo)記，與標(biāo)本中抗體形成雙抗原夾心后，洗滌添加化學(xué)發(fā)光底物，發(fā)光強度測定后，依據(jù)S/CO值判斷標(biāo)本有無梅毒螺旋體特異性抗體[5]。由于整個檢測過程中采用全自動分析儀讀取結(jié)果，從而充分發(fā)揮高自動化的優(yōu)勢，減少認(rèn)為誤差，并避免攜帶污染。故該檢測方法能夠?qū)Υ笈繕?biāo)本進行篩查。但因其敏感度較高，在檢測低S/CO值標(biāo)本時易發(fā)生假陽性現(xiàn)象，進而造成誤診，增加臨床確診難度[6]。本研究中，46例S/CO值為1.00～2.99患者中，經(jīng)TPPA確證為陰性4例，而TRUST復(fù)檢出17例陰性。該標(biāo)本多來自腫瘤或透析患者，因此，針對S/CO值較低的患者需謹(jǐn)慎處理，并采用TPPA進行確證，減少假陽性的存在。另外，在CLIA初篩后，TPPA復(fù)檢符合率為96.00%，明顯高于TRUST的74.50%，表明TPPA聯(lián)合CLIA檢測梅毒可有效提高檢測準(zhǔn)確度，減少漏診、誤診現(xiàn)象。這是由于TPPA采用人工載體明膠粒子與梅毒螺旋體抗體形成凝集，發(fā)生粒子凝聚反應(yīng)，進而有效檢測出血清中梅毒螺旋體抗體，其靈敏度與特異度均具有較高水平。而本研究中CLIA檢出率高于TPPA，可能是由藥物干擾所致，或是梅毒螺旋體隱性感染。TRUST作為非特異性梅毒螺旋體，可通過觀察滴度的變化，以判斷梅毒感染情況。但在復(fù)檢試驗中發(fā)現(xiàn)，陽性率偏低，存在漏診率高等問題。故本研究認(rèn)為，CLIA聯(lián)合TPPA檢測梅毒更具臨床應(yīng)用價值。但需注意的是，TPPA法在實際操作過程中存在檢測時間長、操作繁雜、自動化水平低等問題，判讀結(jié)果時易受人為因素影響，尤其是標(biāo)本介于陽性與陰性之間，難免出現(xiàn)誤差[7]。而CLIA能夠?qū)崿F(xiàn)高通量、高自動化、重復(fù)性檢測，客觀的判讀結(jié)果，敏感度更高，故更適合應(yīng)用于初篩試驗[8]。由于各檢測方式均存在一定的漏診、誤診現(xiàn)象，臨床實際篩查中應(yīng)注重采用聯(lián)合的方式進行檢測，尤其是對于S/CO值較低的標(biāo)本，經(jīng)CLIA法初篩后，應(yīng)給予TPPA法確證，以確保檢測準(zhǔn)確度，盡可能的減少誤診、漏診現(xiàn)象，從而避免醫(yī)療糾紛，構(gòu)建和諧的醫(yī)患關(guān)系。

綜上所述，CLIA聯(lián)合TPPA法在梅毒血清學(xué)篩查中具有顯著的應(yīng)用價值，臨床可充分發(fā)揮CLIA敏感度高的優(yōu)勢，在初篩后應(yīng)用TPPA法對檢測結(jié)果進行確證，提高診斷準(zhǔn)確度，為臨床治療提供科學(xué)依據(jù)。

參考文獻

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