吡啶衍生物合成及抗幽門螺桿菌活性研究

鐘 猛，丁 銳，林華鑫，宋欣沛，鄒遠(yuǎn)軍，王 銳，鄭一敏

(重慶理工大學(xué) 藥學(xué)與生物工程學(xué)院， 重慶 400054)

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吡啶衍生物合成及抗幽門螺桿菌活性研究

鐘 猛，丁 銳，林華鑫，宋欣沛，鄒遠(yuǎn)軍，王 銳，鄭一敏

(重慶理工大學(xué) 藥學(xué)與生物工程學(xué)院， 重慶 400054)

合成了系列吡啶衍生物，并對其進行抗幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，HP)作用研究，以得到較高活性的先導(dǎo)化合物。以2-氯甲基-3-甲基-4-甲氧基吡啶鹽酸鹽為原料，通過親核取代、間氯過氧苯甲酸(m-CPBA)氧化合成了系列吡啶衍生物；采用瓊脂擴散法，以阿莫西林為陽性對照，進行了初步體外抗幽門螺桿菌( Anti-Helicobacter pylori)活性評價。成功合成了2a～2c、3a～3c、4a、5a、6a～6c十一個吡啶衍生物，并經(jīng)過MS、1H NMR和13CNMR 結(jié)構(gòu)確證，發(fā)現(xiàn)化合物2a、6a均有良好活性。由此發(fā)現(xiàn)了新型的具有抗幽門螺桿菌作用的吡啶類先導(dǎo)化合物。

吡啶衍生物; 先導(dǎo)化合物; 幽門諾桿菌; 合成; 阿莫西林

幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori，HP)是由2005年諾貝爾生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎獲得者Warren和Marshall于1979年從慢性胃炎病人的胃鏡活檢標(biāo)本中分離得到的一種多鞭毛革蘭氏陰性微需氧桿菌。從發(fā)現(xiàn)以來，HP一直受到國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注。幽門螺桿菌感染是慢性活動性胃炎、消化性潰瘍、胃黏膜相關(guān)淋巴組織(MALT) 淋巴瘤和胃癌的主要致病因素[1-2]。目前，世界范圍內(nèi)有超過50%的人存在HP感染[3]。因此，1994年世界衛(wèi)生組織/國際癌癥研究機構(gòu)(WHO/IARC) 將幽門螺桿菌定為Ⅰ類致癌因子[4]。根除HP有助于降低潰瘍復(fù)發(fā)，預(yù)防MALT-淋巴瘤(黏膜相關(guān)組織淋巴瘤)及其他胃部惡性腫瘤[5]。目前對胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍的治療，主要以抑制胃酸分泌的H2受體拮抗劑、質(zhì)子泵抑制劑及胃粘膜保護藥物為主流，但是這些潰瘍治療藥物對復(fù)發(fā)性胃病療效甚微[1]。根除幽門螺桿菌是治療復(fù)發(fā)性胃病的基本途徑。在此前提下，由抗生素及合成抗菌藥(如阿莫西林、克拉霉素、替硝唑等抗生素二選一與質(zhì)子泵抑制劑(proton pump inhibitors,PPI))構(gòu)成的三聯(lián)療法成為臨床治療感染幽門螺桿菌消化性潰瘍的主要治療藥物[2-7]。然而，作為一線臨床方案的三聯(lián)療法存在下列顯著問題：① 廣譜抗生素缺乏選擇性，且臨床上大劑量給藥及患者的長期使用會伴隨有惡心、嘔吐、腹瀉等副作用，為治療方案的臨床普及帶來困難；另一方面，會導(dǎo)致胃腸道內(nèi)的有用菌群失調(diào)，產(chǎn)生便溏、腹泄、味覺異常、舌炎、口腔炎、肝功能障礙、肝功能異常、出血性腸炎等副作用，甚至助長耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA) 的出現(xiàn)[7]。② 長期使用PPI會導(dǎo)致胃炎類型改變，使胃竇胃炎轉(zhuǎn)向胃體胃炎。其原因在于：長期使用PPI使胃內(nèi)pH值增加，會導(dǎo)致HP從胃竇向胃體遷移，而胃體炎癥及萎縮會減少胃酸分泌，其最終結(jié)果是促進胃癌得病幾率增加[1-2]。③ 阿莫西林(AMX)在pH值低于4、克拉霉素CLR在pH值低于5時不穩(wěn)定，易水解。顯然，通常胃酸pH值(1～2)更易使其迅速水解，從而使藥效降低[8]。④ 三聯(lián)療法導(dǎo)致HP的克拉霉素、甲硝唑抗性菌株頻現(xiàn)，抵抗率逐年上升，抗藥性使HP根治日益困難[9]。

研究表明：MK-6(甲萘醌-6)及未確定的一些醌類在HP呼吸中起重要作用。在HP中MK-6或MK-1充當(dāng)著輔酶Q類似的角色作用[10]。MK-6是幽門諾桿菌電子轉(zhuǎn)移鏈中重要的移動組分，而電子轉(zhuǎn)移鏈的存在是通過氧化磷酸化合成ATP的前提條件。顯然，合成輔酶Q的結(jié)構(gòu)類似物——結(jié)構(gòu)更簡單的吡啶衍生物——可以與MK-6相競爭，從而抑制HP電子傳遞。另外，在吡啶衍生物2位引入長鏈烷基后，將有助于滲入外膜，并可能改變膜的流動性，從而引起通透性改變而起到殺菌作用[11]。Diggle 等[12-13]研究了2-烷基4-喹諾酮(AQs)可控制菌群的行為，認(rèn)為AQs對銅綠假單胞菌、類鼻疽伯霍爾德桿菌、枯草桿菌及白色念珠菌可產(chǎn)生抑制。Liu等[14]揭示硫醚類化合物對HP的 MIC為8～64 μg/mL， 小鼠胃部脲酶活性可降低70%，體內(nèi)活性好，且該化合物耐熱，100 ℃ 下仍保持良好的抗菌效果。為此，本研究合成了結(jié)構(gòu)更簡單的2-烷基喹諾酮結(jié)構(gòu)類似物——吡啶類化合物(合成路線見圖1)，并探究其抗幽門螺桿菌活性[15]。

圖1 吡啶衍生物合成路線

1 儀器與試劑

HWCL-1恒溫磁力攪拌器，鄭州長城儀器有限公司出品。PSL-1810型磁力攪拌低溫槽，EYELA東京理化器械株式會社出品。層析用硅膠，300～400目。

合成原料試劑均購于Adamas及General Regent。核磁(NMR)由Bruker Avance-600MHz測定(內(nèi)標(biāo)TMS)。質(zhì)譜(MS)由Finnigan-LCQDECA (ESI-MS) 及Bruker Daltonics Bio TOF-Q測定。MGC AnaeroPack 系列2.5L厭氧培養(yǎng)罐由上海寶曼生物科技有限公司生產(chǎn)。AnaeroPack微需氧產(chǎn)氣袋由上海寶曼生物科技有限公司提供。幽門螺旋桿菌NCTCJ 99 sw-2由第三軍醫(yī)大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗系臨床微生物教研室提供。布氏肉湯由青島海博生物技術(shù)有限公司提供。腦心浸液瓊脂干粉由青島海博生物技術(shù)有限公司提供。選擇性抗生素(每毫升含萘啶酮酸1 mg、TMP 0.5 mg、萬古霉素0.3 mg、兩性霉素B 0.2 mg)由青島海博生物技術(shù)有限公司提供。瓊脂粉由成都科龍化工試劑廠生產(chǎn)。脫纖維羊血由廣州蕊特生物科技有限公司提供。小牛血清由杭州四季青有限公司提供。氧化酶試紙由杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn)。尿素酶試紙由珠海市克迪科技開發(fā)有限公司生產(chǎn)。Nisin A由蘭州生物制品所提供。萬古霉素由華北制藥股份有限公司生產(chǎn)。實驗所用試劑均為市售分析純。

2 實驗方法

2.1 吡啶類化合物的合成

2.1.1 目標(biāo)化合物2a～2c的合成

2a的合成：氮氣保護下，將0.26 g Na(11.3 mmol) 溶解在10 mL無水乙醇中，反應(yīng)完成后冷卻至0～5 ℃，加入2-氯甲基-4-甲氧基吡啶鹽酸鹽(5 mmol)、1-己硫醇(6 mmol)，混合物室溫隔夜攪拌。反應(yīng)完成后，真空旋除溶劑，殘留物低溫下加入20 mL冰水，以乙醚萃取(20 mL×3)，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，真空旋除溶劑，殘留物硅膠柱層析(石油醚∶乙酸乙酯=3∶1～1∶1梯度洗脫)，可得到無色油狀液體1.14 g，收率為90%。 ESI-MS：m/z 254([M+H]+)。1H NMR (500 MHz,CDCl3):δ=8.20 (d,J=5.5 Hz,1H),6.61 (d,J=5.5 Hz,1H),3.78 (s,5H),2.50 (t,J=7.5 Hz,2H),2.17 (s,3H),1.50 (dt,J=15.0,7.4 Hz,2H),1.30-1.18 (m,6H),0.82 (t,J=7.0 Hz,3H).13CNMR (125 MHz,CDCl3):δ=163.80,157.32,147.28,120.03,104.34,55.16,36.16,31.80,31.21,29.25,28.34,22.33,13.83,10.43。

2b的合成：合成方法同2a。得到無色油狀液體1.10 g，收率為92%。ESI-MS：m/z 240 ([M+H]+)。1H NMR (400 MHz,CDCl3):δ=8.25 (d,J=6.0 Hz,1H),6.66 (d,J=6.0 Hz,1H),3.84 (d,J=2.8 Hz,5H),2.55 (t,J=7.6Hz,2H),2.21 (s,3H),1.59-1.52 (m,2H),1.32-1.26 (m,4H),0.87 (t,J=6.8 Hz,3H).13CNMR (100 MHz,CDCl3):δ=164.04,157.55,147.47,120.27,104.55,55.37,36.37,32.01,31.05,29.20,22.26,13.95,10.63。

2c的合成：合成方法同2a。得到無色油狀液體1.05 g，收率為93%。ESI-MS：m/z 226 ([M+H]+)。1H NMR (400 MHz,CDCl3):δ=8.17 (d,J=6.0 Hz,1H),6.58 (d,J=6.0 Hz,1H),3.76 (s,5H),2.49 -2.42 (t,J=7.6Hz,2H),2.14 (s,3H),1.50 (dt,J=15.2,7.6 Hz,2H),1.32-1.26 (m,2H),0.81 (t,J=7.2 Hz,3H).13CNMR (100 MHz,CDCl3):δ=163.97,157.44,147.39,104.50,76.87,55.31,36.26,31.61,31.53,21.91,13.60,10.55。

2.1.2 目標(biāo)化合物6a～6c的合成

6a的合成：氮氣保護下，向己醇鈉(22 mmol鈉溶解在15 mL己醇中)滴加相應(yīng)3-甲基4-甲氧基吡啶鹽酸鹽(10 mmol，溶解在10 mL己醇中)。滴加完成后，混合物加熱至90 ℃，攪拌18～20 h(TLC監(jiān)控)。反應(yīng)完成后冷卻至室溫，加入20 mL 冰水，以乙醚萃取(20 mL×3)，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，真空旋除溶劑，殘留物柱層析(石油醚∶乙酸乙酯=3∶1-1∶1梯度洗脫)，可得到淡黃色油狀液體0.90 g，產(chǎn)率為76%。ESI-MS：m/z 238 ([M+H]+)。1H NMR (400 MHz,CDCl3):δ=8.23 (d,J=3.2 Hz,1H),6.63 (d,J=3.2 Hz,1H),4.55 (t，J=3.2 Hz,2H),3.78 (dd,J=5.3,3.6 Hz,3H),3.45 (dd,J=6.4,2.0 Hz,2H),2.19 (d,J=2.8 Hz,3H),1.53 (d,J=6.4 Hz,2H),1.27-1.20 (m,6H),0.82 (t,J=4.0,2.0 Hz,3H).13CNMR (100 MHz,CDCl3):δ=164.05,156.32,147.55,121.69,105.20,73.32,70.76,55.27,31.59,29.64,25.78,22.54,13.96,10.15。

6b的合成：合成方法同6a。得到淺黃色油狀液體0.892 g，收率為80%。ESI-MS：m/z 224 ([M+H]+)。1H NMR (400 MHz,CDCl3):δ=8.28 (d,J=5.6 Hz,1H),6.68 (d,J=5.6 Hz,1H),4.58 (s,2H),3.82 (s,3H),3.47 (t,J=6.8 Hz,2H),2.22 (s,3H),1.59-1.55 (m,2H),1.30-1.26 (m,4H),0.86 (t,J=6.8 Hz,3H).13CNMR (100 MHz,CDCl3):δ=164.10,156.34,147.59,121.74,105.24,73.34,70.82,55.33,29.39,28.30,22.47,13.97,10.19。

6c的合成：合成方法同6c。得到淺黃色油狀液體0.173 g，收率為83%。MS：m/z 210 ([M+H]+)。1H NMR (400 MHz,CDCl3):δ=8.28 (d,J=5.6 Hz,1H),6.70 (d,J=5.6 Hz,1H),4.59 (s,2H),3.82 (s,3H),3.49 (t,J=6.8 Hz,2H),2.22 (s,3H),1.59-1.52 (m,2H),1.37-1.31 (m,2H),0.88 (t,J=7.2 Hz,3H).13CNMR (100 MHz,CDCl3):δ=164.10,156.35,147.61,121.75,116.86,105.25,104.57,73.37,70.52,55.33,31.79,19.32,13.85,10.19。

2.1.3 目標(biāo)化合物3a-3c的合成

3a的合成：在氬氣保護下，將5 mmol 2a溶解在40 mL 無水二氯甲烷中。隨后加入25 mL飽和NaHCO3溶液?；旌衔锢鋮s至0 ℃，劇烈攪拌下滴加m-CPBA(77%，1.1 g)/二氯甲烷 (8.5 mL)。攪拌反應(yīng)10～20 min(淀粉紙顯示過酸消耗完畢)，分離有機相，水相以二氯甲烷萃取，合并有機相，旋除溶劑，殘留物柱層析(石油醚∶乙酸乙酯=1∶1)，可得到無色油狀液體1.214 g，收率為84%。ESI-MS：m/z 290 ([M+H]+)。1H NMR (400 MHz,CDCl3):δ=8.26 (d,J=5.6 Hz,1H),6.68 (d,J=5.6 Hz,1H),4.26 (d,J=12.8 Hz,1H),4.15 (d,J=12.8 Hz,1H),3.82(s,3H),2.77-2.71 (m,2H),2.22 (s,3H),1.75-1.71 (m,2H),1.25-1.22 (m,4H),0.83 (t,J=6.8 Hz,3H).13CNMR (100 MHz,CDCl3):δ=164.30,150.11,148.19,122.75,105.21,58.01,55.53,52.12,31.31,28.42,22.45,22.32,13.91,11.21。

3b的合成：合成方法同3a。得到無色油狀液體1.084 g，收率為85%。MS：m/z 256 ([M+H]+)。1H NMR (400 MHz,CDCl3):δ=8.28 (d,J=5.6 Hz,1H),6.69 (d,J=5.6 Hz,1H),4.28 (d,J=12.8 Hz,1H),4.16 (d,J=12.8 Hz,1H),3.83 (s,3H),2.78-2.72 (m,2H),2.24 (s,3H),1.78 -1.74 (m,2H),1.38-1.27 (m,4H),0.87 (t,J=7.2 Hz,3H).13CNMR (400 MHz,CDCl3):δ=164.21,150.23,148.35,122.67,105.19,58.19,55.50,52.09,30.92,22.26,22.21,13.79,11.23。

3c的合成：合成方法同3a。得到無色油狀液體1.048 g，收率為87%。ESI-MS：m/z 242 ([M+H]+)。1H NMR (400 MHz,CDCl3):δ=8.06 (d,J=5.6 Hz,1H),6.50 (d,J=5.2 Hz,1H),4.06 (d,J=12.8 Hz,1H),3.96 (d,J=12.8 Hz,1H),3.61 (s,3H),2.59-2.52 (m,2H),2.02 (s,3H),1.24-1.16 (m,2H),0.70 (t,J=7.2 Hz,3H).13CNMR (100 MHz,CDCl3):δ=164.05,149.96,148.09,122.41,105.11,57.79,55.38,51.56,24.31,21.78,13.49,11.02。

2.1.4 目標(biāo)化合物4a的合成

將2a(2 mmol)溶解在10 mL氯仿中，隨后在室溫下加入m-CPBA(77%，0.536 g)/氯仿(10 mL)。室溫攪拌反應(yīng)20 h。反應(yīng)結(jié)束后，加入10% NaOH溶液，調(diào)節(jié)pH值至8左右，用二氯甲烷萃取，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，過濾，真空旋除溶劑，殘留物硅膠柱層析(石油醚∶乙酸乙酯=1∶1，甲醇∶乙 酸乙酯=1∶3梯度洗脫)，可得到無色油狀液體0.245 g，收率為43%。ESI-MS：m/z 286 ([M+H]+)。1H NMR (400 MHz,CDCl3):δ=8.30 (d,J=5.6 Hz,1H),6.75 (d,J=5.6 Hz,1H),4.44 (s,2H),3.86 (s,3H),3.08 (t,J=8 Hz 2H),2.30 (s,3H),1.88-1.80 (m,2H),1.44-1.36 (m,2H),1.31-1.27(m,4H),0.89 (t,J=6.8Hz,3H).13CNMR (100 MHz,CDCl3):δ=164.56,148.68,148.21,124.14,105.71,58.81,55.58,52.18,31.18,28.09,22.29,21.57,13.94,11.56。

2.1.5 目標(biāo)化合物5a的合成

將3a(2.13 mmol，0.572 g)溶解在15 mL氯仿中，隨后加入m-CPBA(77%，0.914 g)/氯仿 (15 mL)，加熱回流3 h。反應(yīng)完成后，冷卻至室溫。加入10% NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至8左右，用二氯甲烷萃取，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，過濾，真空旋除溶劑，殘留物硅膠柱層析(石油醚∶乙酸乙酯=1∶1，甲醇∶乙酸乙酯=1∶3梯度洗脫)，可得到白色固體0.365 g，收率為57%。ESI-MS：m/z 302 ([M+H]+)。1H NMR (400 MHz,CDCl3):δ=8.18 (d,J=7.2 Hz,1H),6.77 (d,J=7.2 Hz,1H),4.85 (s,2H),3.89 (s,3H),3.33 (t,J=8.0 Hz,2H),2.35 (s,3H),1.91 (dt,J=15.6,7.6 Hz,2H),1.46-1.39 (m,2H),1.31-1.27(m,4H ),0.88 (t,J=2.8 Hz, 3H).13CNMR (100MHz,CDCl3):δ=156.51,140.91,137.13,127.91,107.02,56.45,56.19,52.42,31.28,28.14,22.29,21.85,13.89,12.70。

2.2 吡啶類化合物抗幽門螺桿菌活性試驗

2.2.1 培養(yǎng)基制備

腦心浸液牛血清糊精瓊脂平板制備：稱取腦心浸液瓊脂干粉(BHI)5.2 g，加入瓊脂粉0.2 g、β-環(huán)糊精0.1 g，溶于93 mL蒸餾水中，121 ℃ 15 min 高壓滅菌。待培養(yǎng)基溫度降至50～55 ℃時，加入1 mL混合抗生素(選擇性抗生素中加入300 μL Nisin)、7 mL小牛血清及0.004%(mg·mL-1)的活菌染色劑TTC(氯代三苯基四氮唑)，混勻，趁熱用無菌移液管吸取15 mL培養(yǎng)基加入滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)(直徑90 mm)，放置于無菌工作臺上，冷卻凝固后用無菌袋包裝好，放置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2.2 幽門螺桿菌菌懸液的制備

取冷凍保存的菌株立即放入37 ℃水浴30 s，用移液槍吸取50 μL加入腦心浸液血糊精瓊脂平板，用滅菌接種環(huán)密集劃線后，放于厭氧罐中，加入微需氧產(chǎn)氣袋，放于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱養(yǎng)2 d后，在平板中加入布氏肉湯1 mL，用L棒刮下菌苔，用比濁法將菌濃度調(diào)節(jié)至1×109 CFU·mL-1，備用。

2.2.3 樣品配制

用50% PEG將樣品配制10 μg·mL-1、1 μg·mL-1兩個濃度。

2.2.4 活性評價

用直徑10 mm的打孔器在抑菌平板上打孔，取出孔內(nèi)培養(yǎng)基后，每孔加樣品100 μL，然后將平板放于厭氧罐中，加入微需氧產(chǎn)氣袋，放于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h后觀察結(jié)果。每個化合物活性評價均經(jīng)過3～5次重復(fù)驗證實驗，實驗數(shù)據(jù)均是經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析得到，見表1。

表1 合成吡啶衍生物抗HP活性結(jié)果±s)

3 討論

對合成的2位烷基取代吡啶類化合物進行活性測定，實驗結(jié)果見表1。由2a～2c可以看出：化合物2a活性較好。由3a～3c可知：3a抗HP活性較好。從6a～6c可知:6a抗Hp活性較好。由此可以得出:2位取代的烷基鏈增長，活性有所增加，但是隨著烷基鏈的延長，物質(zhì)的脂溶性增加，成藥性降低。從表1可以看出：4a和5a在10 μg·mL-1是幾乎沒有活性；3c和6c在1 μg·mL-1時幾乎沒有活性。由2a、3a、4a、5a和6a，2b、3b和6b，2c、3c和6c可以看出：吡啶硫醚類、吡啶醚類、吡啶亞砜類、吡啶亞砜氮氧化物、吡啶砜氮氧化物類化合物抗幽門活性依次降低。2a、6a表現(xiàn)出較好的抗幽門諾桿菌活性，可做為新的先導(dǎo)化合物，繼續(xù)進行深入、系統(tǒng)的構(gòu)效關(guān)系研究及機制研究，為治療抗幽門螺桿菌的新藥篩選提供新思路。

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(責(zé)任編輯 何杰玲)

Synthesis and Anti-HelicobacterPyloriActivity of Pyridine Derivatives

ZHONG Meng, DING Rui, LIN Hua-xin, SONG Xin-pei, ZOU Yuan-jun, WANG Rui, ZHENG Yi-min

(College of Pharmacy and Bioengineering, Chongqing University of Technology, Chongqing 400054, China)

We compounded a series of pyridine derivatives and evaluated its activity of anti-Helicobacterpylorito get lead compounds with higher activity. The target compounds were synthesized through nucleophilic substitution, oxidation bym-CPBA using 2-chloromethyl-4-methoxy-3-methylpyridine hydrochloride as starting material, and evaluated anti-Helicobacterpyloriactivity of pyridine derivatives by the agar diffusion method and amoxicillin as positive control. The target compounds were successfully synthesized and verified by13CNMR,1H NMR and MS spectra, which included 2a～2c, 3a～3c, 4a, 5a, 6a～6c, etc. 11compouds altogether, and then found that 2a and 6a exhibited comparable efficacy to amoxicillin. A new family of anti-Helicobacterpyloriactivity of pyridine derivatives is disclosed.

pyridine derivative; lead compound;Helicobacterpylori; synthesis; amoxicillin

2017-01-04 基金項目：重慶高校創(chuàng)新團隊建設(shè)計劃資助項目(CXTDX201601031)

鐘猛(1990—)，男，碩士研究生，主要從事微生物與生化藥學(xué)研究，E-mail：zhongmeng789@163.com；通訊作者 王銳，男，博士，副教授，主要從事新藥設(shè)計與合成研究，E-mail：wangrx1022@163.com。

鐘猛，丁銳，林華鑫，等.吡啶衍生物合成及抗幽門螺桿菌活性研究[J].重慶理工大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué))，2017(5):105-110.

format：ZHONG Meng, DING Rui, LIN Hua-xin, et al.Synthesis and Anti-HelicobacterPyloriActivity of Pyridine Derivatives[J].Journal of Chongqing University of Technology(Natural Science)，2017(5):105-110.

10.3969/j.issn.1674-8425(z).2017.05.018

R914

A

1674-8425(2017)05-0105-06