種雞開產(chǎn)前免疫不同新城疫傳染性支氣管炎禽流感H9 三聯(lián)油苗的效果觀察

焦鵬濤，蔣維維，姬忠華，何怡寧，曹艷杰，吳科敏 ，陳 果，劉 婷，侯雪嬌，何旭少，韋 平

(1.廣西大學(xué)養(yǎng)禽與禽病研究所，廣西南寧530005 ； 2.廣西鴻光農(nóng)牧有限公司，廣西容縣537500)

種雞開產(chǎn)前免疫不同新城疫傳染性支氣管炎禽流感H9 三聯(lián)油苗的效果觀察

焦鵬濤1，蔣維維2，姬忠華1，何怡寧1，曹艷杰1，吳科敏1，陳 果1，劉 婷1，侯雪嬌1，何旭少2，韋 平1

(1.廣西大學(xué)養(yǎng)禽與禽病研究所，廣西南寧530005 ； 2.廣西鴻光農(nóng)牧有限公司，廣西容縣537500)

為了探討盡可能延長母雞開產(chǎn)后免疫保護(hù)期的可能性，本試驗(yàn)選用市售的兩種新城疫(ND)-傳染性支氣管炎(IB)-禽流感(AI)H9三聯(lián)滅活商品疫苗在廣西地區(qū)主要地方品種三黃雞的兩個(gè)品系黃1和黃2上分別進(jìn)行對比免疫試驗(yàn)。種雞開產(chǎn)前的150日齡分別使用疫苗A(精制濃縮型油苗)、疫苗B (普通油苗)免疫，然后分別于免疫時(shí)以及免疫后的1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、4個(gè)月和5個(gè)月分別使用HI試驗(yàn)和ELISA測定兩組雞只相應(yīng)產(chǎn)生的血清抗體滴度。結(jié)果表明，在黃1品種上的試驗(yàn)，疫苗A免疫組的ND抗體水平高于疫苗B免疫組，兩組雞的H9、IB抗體水平則無明顯差異；在黃2品種的試驗(yàn)，疫苗A免疫組的ND、H9、IB抗體水平均高于疫苗B免疫組；開產(chǎn)前免疫疫苗A后5個(gè)月，黃1和黃2品種均仍能維持較高的抗體水平，其中黃1品種可推遲補(bǔ)免時(shí)間20多天，黃2品種推遲補(bǔ)免時(shí)間1個(gè)月。

新城疫 ； 傳染性支氣管炎 ； 禽流感H9 ； 三聯(lián)油苗 ； 血清抗體 ； 免疫效果

新城疫(ND)是一種急性、高度接觸性傳染病，主要侵害雞和火雞，亦可感染其他禽類及人類，是禽類重要疾病之一，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將其列為A類傳染病，我國亦將其列為一類動(dòng)物傳染?。粋魅拘灾夤苎?IB)是一種可引起雞呼吸道、輸卵管、腎臟、腸道等多個(gè)器官上皮細(xì)胞損傷，導(dǎo)致雞的呼吸道、泌尿生殖系統(tǒng)及腸道疾病的傳染病，并且容易引起細(xì)菌、支原體等的繼發(fā)感染；禽流感(AI)分為高致病性和低致病性兩種類型，其中H5亞型屬于高致病性的A類(一類)傳染病[1]，而H9亞型則屬于低致病性的而且是我國當(dāng)前流行的主要亞型[2]。很長一段時(shí)間以來，ND、IB和H9亞型禽流感在雞群中的流行和危害給我國養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大損失，這3種疾病是養(yǎng)禽業(yè)中必須預(yù)防和控制的重要疾病。

單苗分別接種(注射3次)預(yù)防往往導(dǎo)致免疫程序復(fù)雜、接種次數(shù)多、勞動(dòng)強(qiáng)度大、對免疫雞只的應(yīng)激大等問題，使用新城疫-傳染性支氣管炎-禽流感H9三聯(lián)滅活疫苗(以下簡稱新-支-流三聯(lián)苗)能1次完成3種疫苗的免疫，收到一針預(yù)防3種疾病的效果，具有減少免疫注射次數(shù)、減少應(yīng)激、省時(shí)省力省錢等優(yōu)點(diǎn)[3]。種雞開產(chǎn)前免疫油苗，不僅能使其在產(chǎn)蛋期間的安全得到保障，而且還能使后代雛雞得到高而整齊的母源抗體，對于保證雛雞的存活率具有重要意義[4-5]。目前生產(chǎn)上普遍在開產(chǎn)前免疫的是普通的新-支-流三聯(lián)疫苗，由于免疫抑制病的存在等因素，疫苗產(chǎn)生的保護(hù)水平的免疫維持時(shí)間相對比較短，往往很難維持到產(chǎn)蛋高峰期。而且隨著產(chǎn)蛋率上升，雞體代謝旺盛，抵抗力差，就極易受到病原的侵襲[6]。生產(chǎn)實(shí)踐中，如果開產(chǎn)前的免疫所產(chǎn)生的抗體不足以維持到產(chǎn)蛋高峰期過后的話，往往需要正在產(chǎn)蛋高峰期或者還未達(dá)到高峰期就進(jìn)行補(bǔ)免，補(bǔ)免所帶來的應(yīng)激反應(yīng)可使產(chǎn)蛋率受到影響，雞群往往需要數(shù)天至1周甚至更長的時(shí)間才能使其產(chǎn)蛋恢復(fù)到正常水平，給種雞的生產(chǎn)效益帶來很大的損失。為了尋找一種在種雞開產(chǎn)前免疫既可產(chǎn)生較高的抗體水平，又能使其保護(hù)水平的免疫力維持到產(chǎn)蛋高峰期過后的新-支-流三聯(lián)苗，進(jìn)一步了解、掌握不同新-支-流三聯(lián)苗對種雞開產(chǎn)前免疫的效果。筆者選用兩類市售三聯(lián)滅活疫苗A(精制濃縮型)和B(普通型)，在廣西鴻光農(nóng)牧有限公司開展了試驗(yàn)觀察。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)疫苗 新-支-流(H9)精制濃縮三聯(lián)苗A(公司A生產(chǎn)，批號(hào)20150324)；普通新-支-流(H9)三聯(lián)苗B(公司B生產(chǎn)，批號(hào)20150411)。供試疫苗均在有效期內(nèi)。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 開產(chǎn)前即150 日齡三黃雞兩個(gè)品系黃1和黃2，為廣西鴻光農(nóng)牧有限公司種大欖雞場籠養(yǎng)的父母代種雞，飼養(yǎng)方式、日齡、免疫程序、試驗(yàn)雞的數(shù)量等條件基本一致。

1.3 診斷試劑 禽流感H9株抗原(批號(hào)20150201)和陽性血清(批號(hào)20150208)，新城疫抗原(批號(hào)20150311)和陽性血清(批號(hào)20150314)，均購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所；傳染性支氣管炎抗體檢測試劑盒，由廣西大學(xué)養(yǎng)禽與禽病研究所研發(fā)[7]；紅細(xì)胞懸液采自非免疫雞只，按照常規(guī)方法制備成1%懸液；生理鹽水、抗凝劑、96孔V型板等自備。

1.4 試驗(yàn)方案 試驗(yàn)于2015年3月～8月在廣西鴻光農(nóng)牧有限公司的黃1和黃2兩個(gè)品系中分別進(jìn)行，免疫疫苗A組、疫苗B組各6 500羽；在種雞開產(chǎn)前即150 日齡，分別按常規(guī)肌肉注射免疫疫苗A組、疫苗B組(0.5 mL/只)；然后在免疫時(shí)以及免疫后的1個(gè)月(M)、2 M、3 M、4 M和5 M分別隨機(jī)采血樣(30份/組)進(jìn)行新城疫、傳染性支氣管炎、禽流感H9抗體的檢測。

1.5 檢測方法 新城疫和禽流感H9的血清抗體，按照《中國獸藥典》方法和試行規(guī)程進(jìn)行[8]；傳染性支氣管炎的血清抗體，按照廣西大學(xué)養(yǎng)禽與禽病研究所建立的間接N-ELISA方法[7]進(jìn)行檢測，統(tǒng)計(jì)組內(nèi)平均值，分析組間差異。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)用生物學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件SPSS21.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

兩個(gè)品系雞上進(jìn)行的試驗(yàn)及其3種病原的特異性抗體產(chǎn)生情況見表1。

表1 兩種品系雞免疫兩種疫苗后ND、IB、H9抗體效價(jià)檢測結(jié)果 log2/OD值

注：同一列肩標(biāo)不同小寫字母之間的數(shù)據(jù)差異顯著(P<0.01或P<0.05)，不同大寫字母的數(shù)據(jù)之間差異極顯著(P<0.01)，未標(biāo)字母表示差異不顯著(P>0.05)

2.1 黃1品種抗體水平及消長規(guī)律 黃1品種雞免疫兩組疫苗后，ND抗體水平兩組都是先下降，后上升，免疫后4 M、5 M兩組抗體水平差異極顯著(P<0.01)；而H9抗體水平兩組都是先上升后下降，差異不顯著(P>0.05)(圖1)；IB抗體水平兩組的消長規(guī)律都是免疫三聯(lián)疫苗后抗體水平先下降，1 M后開始上升，3 M后達(dá)到高峰，免疫后5 M兩組抗體均下降，水平基本一致(P>0.05)(圖2)。

圖1 黃1品種ND、H9抗體水平消長規(guī)律圖2 黃1品種IB抗體水平消長規(guī)律

2.2 黃2品種抗體水平變化及消長規(guī)律 黃2品種雞免疫后的ND抗體水平，兩組均在免疫后升高，免疫后1 M達(dá)到峰值，然后開始下降，2 M后又開始上升，免疫后4 M恢復(fù)到較高水平，免疫后5 M又下降到較低水平，其中免疫后4 M、5 M兩組抗體水平差異極顯著(P<0.01)；H9抗體水平兩組在免疫后均整體升高，免疫A組在2 M后有所下降，免疫B組升高，兩組在免疫3 M后開始下降，其中免疫后5 M兩組抗體水平差異極顯著(P<0.01)(圖3)。IB抗體水平兩組在免疫后均先升高后下降，免疫后4 M恢復(fù)至較高的水平，免疫后5 M又下降到較低水平，其中免疫后1 M、3 M兩組抗體水平差異極顯著(P<0.01)，免疫后5 M兩組抗體水平差異顯著(P<0.05)，而且整體來看免疫A組穩(wěn)定性優(yōu)于免疫B組(圖4)。

圖3 黃2品種ND、H9抗體水平消長規(guī)律圖4 黃2品種IB抗體水平消長規(guī)律

3 討論

新-支-流精制三聯(lián)苗A在黃2品種試驗(yàn)中ND、H9、IB抗體水平均優(yōu)于普通三聯(lián)疫苗B，在黃1品種試驗(yàn)中ND抗體水平優(yōu)于普通三聯(lián)疫苗B，H9、IB抗體水平無明顯差異。免疫新-支-流精制三聯(lián)苗產(chǎn)生抗體滴度的離散度在兩個(gè)品種中均小于免疫普通三聯(lián)油苗。

總結(jié)長期生產(chǎn)實(shí)踐的經(jīng)驗(yàn)是把ND≥7 log2、H9≥8 log2作為種雞群的臨床發(fā)病保護(hù)水平，當(dāng)抽檢樣本有20%的個(gè)體低于保護(hù)率水平時(shí)，需要對種雞群進(jìn)行補(bǔ)免[9-11]。根據(jù)試驗(yàn)的具體情況及其多年來的生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，為了使雞群能抵抗外界強(qiáng)毒的攻擊，對于產(chǎn)蛋前免疫普通三聯(lián)苗的雞群，一般在免疫后的100～106 d進(jìn)行一次補(bǔ)免(雖然此時(shí)抗體水平處于臨界值以上)。

而本次試驗(yàn)中，根據(jù)抗體檢測的結(jié)果，黃1品種雞群在免疫新-支-流精制三聯(lián)苗后一直持續(xù)到129 d才對雞群進(jìn)行了補(bǔ)免，補(bǔ)免時(shí)間推遲了20多天；黃2品種在免疫新-支-流精制三聯(lián)苗后一直持續(xù)到136 d才需要進(jìn)行補(bǔ)免，比免疫普通三聯(lián)苗推遲補(bǔ)免時(shí)間長達(dá)30多天之久。這樣免疫新-支-流精制三聯(lián)苗可有效的避免了種雞產(chǎn)蛋高峰期前后進(jìn)行疫苗補(bǔ)免可能對雞群造成的應(yīng)激大、產(chǎn)蛋量下降、雞蛋品種差等不利影響。

不同廠家生產(chǎn)的疫苗在實(shí)際生產(chǎn)中，免疫效果受多種因素的影響，免疫接種時(shí)不僅要根據(jù)養(yǎng)殖場的實(shí)際情況，還要及時(shí)對雞群抗體水平進(jìn)行檢測，適時(shí)抽檢，制定合理的免疫方案，減少損失。

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2016-04-28

國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系廣西肉雞產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)項(xiàng)目(nycytxgxcxtd-04-20-2)；廣西重大科研項(xiàng)目(桂科重14121003-4-1)

焦鵬濤(1989-)，男，碩士生，主要從事禽病與病原分子生物學(xué)研究，E-mail:pengtaojiao66@126.com

韋平，E-mail:pingwei8@126.com

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B 文章編號(hào)：0529-6005(2017)-04-0044-03