山西地區(qū)豬流行性腹瀉免疫情況調(diào)研

王娟萍，薛翼鵬，米瑞娟，姚敬明，吳 忻，孟 帆，樊振華 , 劉文俊，李紅麗

(山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，山西太原030032)

山西地區(qū)豬流行性腹瀉免疫情況調(diào)研

王娟萍，薛翼鵬，米瑞娟，姚敬明，吳 忻，孟 帆，樊振華 , 劉文俊，李紅麗

(山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，山西太原030032)

豬流行性腹瀉近年來嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展，為了查明不同免疫程序?qū)Ψ揽乇静〉男Ч?，對山西各地?0個規(guī)模化種豬場母豬疫苗免疫情況、免疫程序及防控效果等進行了調(diào)研。結(jié)果顯示，未免疫疫苗的豬群乳豬死亡率為61.70%，而母豬產(chǎn)前40 d和20 d后海穴注射胃流輪三聯(lián)活苗，肌肉注射胃流二聯(lián)滅活苗的豬群乳豬死亡率為10.26%；母豬產(chǎn)前40 d和20 d后海穴注射胃流輪三聯(lián)活苗，3日齡乳豬后海穴注射胃流輪三聯(lián)活苗的豬群乳豬死亡率為9.63%；應(yīng)用PCR檢測病原，PEDV、TGEV的陽性率分別為64.1%和2.56%；ELISA檢測母豬乳汁中IgA抗體，陽性率為95%；檢測母豬、乳豬、斷奶仔豬血樣中IgA抗體，陽性率為30%。通過本次調(diào)研與檢測，篩選出兩種較好的免疫程序，為豬場防控該類疫病提供參考。

豬流行性腹瀉病毒 ； 免疫情況 ； 調(diào)研與檢測

自2011年以來，全國各地區(qū)均有不同程度豬流行性腹瀉病(PED)持續(xù)性暴發(fā)流行[1-4]，課題組在山西11個地市的30個規(guī)模化豬場的仔豬腹瀉發(fā)病情況調(diào)研，并重點對10個豬場進行流行病學(xué)調(diào)查、病原檢測及免疫防控情況統(tǒng)計分析，證明了山西豬群發(fā)生腹瀉主要是由PEDV引起，并篩選出2種較好的免疫程序，可為豬場防控該類疫病提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 調(diào)研豬場與方法 課題組在山西11個地市10個規(guī)?；N豬場進行調(diào)研，重點對豬流行性腹瀉疫苗免疫情況、2016年1～3月份母豬產(chǎn)子、乳豬病死情況等進行統(tǒng)計；采集病死豬小腸內(nèi)容物、母豬及仔豬血樣及母豬乳汁備檢。

1.2 檢測試劑盒 PEDV RT-PCR檢測試劑盒和TGEV實時熒光RT-PCR檢測試劑盒，購自北京世紀(jì)元亨動物防疫技術(shù)有限公司；PEDV IgA抗體ELISA檢測試劑盒，韓國Bionote生產(chǎn)。

1.3 病原檢測 取適量病料于1.5 mL滅菌EP管，加入1 mL PBS 8 000 r/min離心2 min，取100 μL上清，按照檢測試劑盒說明書進行RNA提取。PEDV檢測在普通PCR儀上進行擴增，1.5%瓊脂糖凝膠電泳進行檢測，TGEV檢測用熒光定量PCR儀檢測。

1.4 PEDV IgA抗體檢測樣品 取10 μL加入包被好的96孔酶標(biāo)板中，按照檢測試劑盒說明書進行操作，用酶標(biāo)儀在450 nm波長下讀值。

2 結(jié)果

2.1 山西各豬場防控腹瀉類疫病的免疫程序 主要有：程序一：母豬每年9月初首免，3～4周后二免，經(jīng)產(chǎn)母豬全年產(chǎn)前3～5周跟胎免疫，每頭每次后海穴注射4 mL胃流二聯(lián)滅活苗。程序二：每年秋冬季節(jié)母豬間隔3～4周免疫2次胃流二聯(lián)滅活苗，仔豬不免疫。程序三：母豬產(chǎn)前40天、20天后海穴注射胃流三聯(lián)活苗，同時肌肉注射胃流二聯(lián)滅活苗。程序四：母豬產(chǎn)前40天、20天后海穴各注射一次胃流三聯(lián)活苗，3日齡仔豬后海穴注射胃流三聯(lián)活苗。未免疫：部分豬場不免疫該類疫苗。

2.2 不同免疫程序豬場母豬產(chǎn)仔與乳豬病死情況 見表1。

表1 不同免疫程序母豬產(chǎn)仔與哺乳仔豬病死情況統(tǒng)計

2.3 病原檢測結(jié)果 PEDV檢測結(jié)果見圖1，陽性對照可見651 bp左右擴增條帶，陰性對照無擴增條帶，被檢樣品可見651 bp左右的擴增條帶，鑒定為PEDV陽性；TGEV檢測出現(xiàn)Ct值小于30的擴增曲線，為陽性。共39份病料，PEDV陽性率為64.1%；檢測其中28份病料，TGEV陽性率為2.56%。

圖1 部分樣品PEDV RT-PCR檢測結(jié)果

M：DNA Marker DL-2 000； P：陽性對照(Positive control)；N：陰性對照(Negative control)； 1-11：樣品PCR擴增產(chǎn)物

2.4 PEDV IgA抗體檢測結(jié)果 據(jù)試劑盒結(jié)果判斷值=(0.35+陰性對照的平均OD值)，對結(jié)果的陰性、陽性進行判定，詳見表2。

3 分析與討論

2011年以來，課題組每年采集病死豬小腸內(nèi)容物或糞便進行病原檢測，證明了山西省豬腹瀉的主要病原是PEDV，與我國近幾年其他地區(qū)的檢測結(jié)果相符[1-8]，也說明在中國PEDV仍是引起豬腹瀉的最主要病原。

調(diào)查發(fā)現(xiàn)，未免疫該類疫苗的豬場乳豬病死率最高；采用免疫程序一、二的豬場，2014年之前乳豬較少腹瀉，但2015年后突然腹瀉導(dǎo)致病死率升高，這可能與PEDV毒株發(fā)生變異，導(dǎo)致毒力增強有關(guān)[6-8]；采用免疫程序三、四的豬場病死率最低，證明這兩種免疫程序?qū)刂曝i腹瀉有一定的效果，可為養(yǎng)豬者提供參考。同時應(yīng)加強產(chǎn)房的飼養(yǎng)管理，產(chǎn)房溫度保持在22 ℃～24 ℃、濕度保持在50%～70%，嚴(yán)格實施隔離消毒措施、乳豬盡快吃上初乳等飼養(yǎng)管理措施非常必要。

PEDV感染機體后，首先侵害小腸集合淋巴結(jié)，隨后進入小腸黏膜層上皮細胞，因此腸道黏膜免疫中sIgA抗體尤為重要[9]。通過肌肉或后海穴注射疫苗，尤其是弱毒活苗，可刺激母豬產(chǎn)生大量IgA抗體分泌到乳汁中形成sIgA抗體，為乳豬提供被動免疫保護[10]。本次乳汁sIgA抗體檢測結(jié)果OD值偏高，尤其PEDV感染陽性豬場更高，證明ELISA試劑盒檢測乳汁中PEDV IgA抗體能客觀地反映豬群中該病毒的免疫情況和感染情況。相比檢測血清中抗體，檢測母豬乳汁中PEDV IgA抗體的特異性和敏感性更高，因此監(jiān)測產(chǎn)后母豬乳汁中PEDV IgA抗體含量，是檢驗該類疫苗免疫有效與否的新方案[11-12]。但采用ELISA試劑盒檢測血清或乳汁中PEDV IgA抗體，至今還不能區(qū)分疫苗免疫還是野毒感染，需繼續(xù)加強該方面的研究。

表2 乳汁和血清IgA抗體檢測結(jié)果

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Investigation of immune state of porcine epidemic diarrhea in Shanxi

WANG Juan-ping，XUE Yi-peng，MI Rui-juan ，YAO Jing-ming， WU Xin，MENG Fan ，F(xiàn)AN Zhen-hua，LIU Wen-jun，LI Hong-li

(Institution of Animal Husbandry and Veterinary, Shanxi Academy of AgriculturalSciences, Taiyuan 030032， China)

In recent years, the porcine epidemic diarrhea (PED) has caused huge economic losses to the swine industry．In order to ascertain the prevention-control effect of different immune procedures against PED Virus(PEDV), our research group investigated the vaccine type, immune procedure and prevention-control effect of 10 scale pig breeding farms in different cities Shanxi province . The results showed that the mortality rate of sucking piglets in non-vaccine immunity groups was 61.70%. However, and it was 9.63% when the pregnant sows immunized with three-combined live vaccine of the transmissible gastroenteritis virus(TGEV), PEDV and porcine rotavirus via houhai acupoint at 40d and 20d before farrowing, respectively, and the same immune method was used for 3d-sucking peglets. We detected pathogens by PCR, and the positive rate of PEDV and TGEV was 64.1% and 2.56%, respectively. The positive rates of IgA antibody against PEDV from colostrum of sows and sera of sows，sucking piglets and postweaning pigs were 95% and 30% detected by Elisa. Based on the statistical analysis of these results, we selected out the two best immune procedures to provide references for the prevention and control against PEDV in pig farms.

PEDV; Immune state; Investigation and detection

XUE Yi-peng

2016-07-07

山西省科技攻關(guān)項目(20140311020-2-A,20150311018-3)

王娟萍(1958-)，女，研究員，本科，從事畜禽傳染病的研究，E-mail：jcbyjs@sohu.com

薛翼鵬，E-mail：xyp295337768@163.com

S855.3

A

0529-6005(2017)04-0017-03