壯藥蛭血通腸溶膠囊藥效試驗研究

許振朝，宋延坤，宋茹雪，覃 壬，張雄勝，黃仁彬

（1.南寧市凈雪皇生物工程有限公司研究中心，廣西 南寧 530000；2.廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣西 南寧 530031）

壯藥蛭血通腸溶膠囊藥效試驗研究

許振朝1，宋延坤1，宋茹雪1，覃 壬1，張雄勝1，黃仁彬2

（1.南寧市凈雪皇生物工程有限公司研究中心，廣西 南寧 530000；2.廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣西 南寧 530031）

目的 首次闡述以壯藥金邊螞蟥為君藥的蛭血通腸溶膠囊的藥效學(xué)研究，以水蛭、土元和地龍?zhí)崛∥镒鳛閷Ρ取７椒?采用大鼠靜脈血栓模型，檢測大鼠體外血栓形成；檢測大鼠全血凝固時間（CT）、部分凝血酶原時間（APTT）、凝血酶原時間（PT）、凝血酶時間（TT）；觀察小鼠耳廓血管微循環(huán)；用建立的高脂血癥模型，研究本品的改善微循環(huán)、抗高血脂、抗凝抗血栓作用。結(jié)果 蛭血通膠囊能降低大鼠血栓濕重、減少大鼠靜脈血栓形成；縮短體外血栓長度、降低體外血栓濕重和干重；可延長大鼠的PT、CT時間；降低小鼠耳廓動脈血流速度變化率、靜脈血流速度變化率、動脈血流量變化率，緩解小鼠耳廓動靜脈血管管徑的縮??；能顯著降低膽固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白的含量，對高脂血癥大鼠有一定的降血脂作用。結(jié)論 蛭血通膠囊、土元和地龍?zhí)崛∥飳Υ笫笥忻黠@的抗血栓作用，對小鼠耳廓微循環(huán)障礙有顯著改善作用，有體內(nèi)抗凝血作用，對高脂血癥大鼠有一定的降血脂作用。土元和地龍?zhí)崛∥镌谥袆┝繒r也顯示該作用。

壯藥蛭血通腸溶膠囊；藥效；試驗

秦漢時期[神農(nóng)本草經(jīng)]記載，”水蛭味咸平，主逐惡血，燎血，月閉，破血瘕積聚，無子，利水道”，“壯醫(yī)藥學(xué)”稱其通龍路，通水道，治麻邦（中風(fēng)中經(jīng)絡(luò)）[1]。東漢張仲景在大黃庶蟲丸、抵當(dāng)湯中伍用水蛭以泄蓄血，宋[太平圣惠方]中的桃仁丸，[婦人良方]中地黃通經(jīng)丸，[千金方]中冶漏下方等史籍中均見水蛭用于方劑，說明我們祖先對水蛭效用早有認識[2]。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中，水蛭作為活血化瘀廣泛應(yīng)用于臨床，尤其如在腦中風(fēng)，腦血栓后遺癥，婦科頑癥中，在采用其它療法不顯著時，水蛭方劑治療往往收到顯著效果[3，4，5，6]。

水蛭（螞蟥）的應(yīng)用在中國已千多年歷史，后傳入歐州。水蛭進入現(xiàn)代研究已有100年歷史[7]，確認水蛭素具有抗凝血酶作用，屬于高效抗凝劑和抗栓劑[8]。金邊螞蟥是含抗凝血酶活性成分最高的一種水蛭，高岀日本醫(yī)蛭10倍以上，已收載于“廣西壯藥材標(biāo)準(zhǔn)”[1]，在廣西民間廣為應(yīng)用于心腦血管、婦科、男科疾病的冶療，療效顯著。本文首次報道以壯藥金邊螞蟥為主藥的醫(yī)院制劑“蛭血通膠囊”的藥效實驗研究，並進行對比研究，揭示壯藥金邊螞蟥方藥的功效。

1 實驗材料

1.1 供試品

蛭血通腸溶膠囊，實驗用其內(nèi)容物，南寧市凈雪皇生物工程有限公司提供，按臨床制劑制備。

土元和地龍?zhí)崛∥镆矠閮粞┗使咎峁?，按組方藥味量提取，并成提取物干膏，加輔料淀粉制成.

1.2 受試藥物分組、劑量及用法

蛭血通膠囊（提取物）人臨床每日擬用量：按成人3.123 g/60 kg計算，人日擬用量為0.052 g/kg/日。

K，α——與爆破點至保護對象間的地形、地質(zhì)條件有關(guān)的系數(shù)和衰減指數(shù)，本工程為中硬巖石，K取150，α取1.8。

實驗設(shè)蛭血通高劑量、中劑量和低劑量組（20、10、5倍臨床日用量）、正常對照組、模型組、陽性對照華法林組（0.4 mg/kg）組；土元提取物組和地龍?zhí)崛∥锝M（均為10倍臨床日用量）、金邊螞蟥提取物組（5倍臨床日用量），灌胃給藥。

1.3 試劑和儀器

華法林：上海信誼九福藥業(yè)有限公司，批號：18140106D。鹽酸腎上腺素：遠大醫(yī)藥（中國）有限公司，批號：140110；膽固醇：成都市科龍化工試劑廠，分析純，批號：2014060101；豬膽鹽：成都市科龍化工試劑廠，生化試劑，批號：20130503；豬油及蛋黃粉：自制。辛伐他?。撼啥己闳鹬扑幱邢薰?，批號：130601；臺式低速大容量離心機，上海安亭科學(xué)儀器廠，TDL-33；電子天平：HANGPING JA1003型，梅特勒—托利多上海天平儀器廠；全自動生化分析儀：日立全自動生化分析儀，7100型；全自動血栓檢測儀：鄭州明舉科技有限公司，型號：LMK-12多環(huán)型。

1.4 實驗動物

動物：昆明種小鼠18～22 g，SPF級，雌雄兼用，Wister系大鼠180～220 g，SPF級，雌雄兼用，由廣西醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供。試驗動物生產(chǎn)許可證：SCXK桂2009-0002，試驗動物使用許可證：SYKG桂2009-0004。

2 試驗方法[9]及結(jié)果

采用《中國醫(yī)學(xué)百科全書-醫(yī)學(xué)統(tǒng)計學(xué)》統(tǒng)計軟件包（第二版）進行有關(guān)檢驗，數(shù)據(jù)均以x（-）±s表示。

2.1 蛭血通膠囊對大鼠靜脈血栓的溶栓效應(yīng)試驗

取Wister大鼠50只，隨機分成5組，空白對照組，華法林陽性對照組，蛭血通低、中、高劑量組，每組10只。蛭血通低劑量（0.26 g/kg）、中劑量（0.52 g/kg）、高劑量（1.04 g/kg）組，華法林組（0.4 mg/kg），地龍?zhí)崛∥铮?.52 g/kg），土元提取物（0.52 g/kg），空白組 （等體積蒸餾水）連續(xù)灌胃給藥7天，各組大鼠于末次給藥后1小時，腹腔注射10%水合氯醛（300 mg/kg）麻醉，開腹分離下腔靜脈，于左腎靜脈下方用線結(jié)扎，2小時后，于結(jié)扎處下2cm處結(jié)扎血管，阻斷血流，記錄血栓形成率，取出血栓，稱血栓長度和濕重。

血栓形成率（%）=各組形成血栓的個數(shù)/各組總受試個數(shù)×100%

實驗結(jié)果顯示，蛭血通、土元和地龍?zhí)崛∥锬芙档痛笫笱裰?，減少血栓形成。見表1。

表1 蛭血通、土元和地龍?zhí)崛∥飳Υ笫箪o脈血栓的溶栓效應(yīng)

2.2 蛭血通對大鼠體外血栓的影響試驗

取大鼠50只，隨機分成5組，空白對照組，華法林陽性對照組，蛭血通低、中、高劑量組，每組10只。蛭血通低、中、高劑量組，華法林組，地龍?zhí)崛∥?，土元提取物，空白組，連續(xù)灌胃給藥7天。各組大鼠于末次給藥后1小時，腹腔注射10%水合氯醛（300 mg/kg）麻醉，開腹腹主動脈取血1 mL，放入聚已希管，在LMK-12體外血栓儀上旋轉(zhuǎn)10分鐘（15圈/分），取出血栓，在濾紙上吸干后量取血栓長度，稱取血栓濕重。將血栓60℃烘干30 min再稱取重量，即得血栓干重。

實驗結(jié)果顯示，蛭血通、土元和地龍?zhí)崛∥锬芸s短血栓長度、降低血栓濕重和血栓干重作用。見表2。

表2 蛭血通、土元和地龍?zhí)崛∥飳Υ笫篌w外血栓的影響

2.3 蛭血通對大鼠CT、APTT、PT、TT的影響試驗[21]

選取SD大鼠80只，隨機分成8組，即空白對照組，蛭血通膠囊高、中、低劑量組，地龍?zhí)崛∥锝M，土元提取物，水蛭提取物組（5倍臨床劑量），每組10只。各組大鼠灌胃給藥，空白對照組予等體積蒸餾水，共給藥7d。各組大鼠于末次給藥后1 h，腹腔注射10%水合氯醛（0.35 g/kg）麻醉，測定大鼠全血凝固時間（CT）；腹主動脈取血2 mL放入枸櫞酸鈉抗凝管中，離心取血清測定APTT、PT及TT。

結(jié)果：與空白組比較，蛭血通膠囊低、高劑量組均可延長大鼠的PT、CT，地龍?zhí)崛∥锝M及水蛭提取物組可延長大鼠的PT、CT，土元提取物組可延長大鼠的PT，各組對APTT和TT均無明顯影響。見表3。

表3 蛭血通對大鼠APTT、PT、TT、CT的影響

2.4 蛭血通對小鼠微循環(huán)的影響試驗

取小鼠60只，隨機分6組：空白對照組，模型對照組，華法林對照組，蛭血通低、中、高劑量組，每組10只。連續(xù)灌胃給藥5天。各組小鼠末次給藥后1 h，腹腔注射10%烏拉坦（0.12 ml/10 g）麻醉小鼠，將動物俯臥于微循環(huán)的觀察臺上，平展耳廓并滴少許石蠟油使之固定于載玻片上，在透射光下用10×4倍鏡觀察小鼠耳廓微循環(huán)，然后尾靜脈注射0.01%鹽酸腎上腺素注射液5 ml/kg體重造成小鼠微循環(huán)障礙模型，再次觀察小鼠耳廓微循環(huán)在造模后15 min的變化，分別記錄動脈血流速度，用顯微測微尺測量耳廓細動脈（A）和細靜脈（V）的血管口徑，計算造模前后的變化率。

計算公式：動脈血流速度變化率（%）=（造模前動脈血流速度-造模后15min）/造模前×100%；靜脈血流速度變化率（%）=（造模前靜脈血流速度-造模后15min）/造模前×100%；動脈血流量變化率（%）=（造模前動脈血流量-造模后15min）/造模前×100%。

實驗結(jié)果顯示，蛭血通、土元和地龍?zhí)崛∥锬芙档托∈蠖獎用}血流速度變化率、靜脈血流速度變化率、動脈血流量變化率，緩解小鼠耳廓動靜脈血管管徑的縮小。見表4、表5。

表4 小鼠造模前后動靜脈血流速度變化率、動脈血流量變化率（±s）

表4 小鼠造模前后動靜脈血流速度變化率、動脈血流量變化率（±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

分組動脈血流速度變化率（%）靜脈血流速度變化率（%）動脈血流量變化率（%）空白組1.44±0.401.47±0.442.07±1.66模型組22.11±9.8**16.74±13.08*77.64±10.90**陽性藥組3.20±1.22**2.62±0.72*13.12±6.84蛭血通高劑量組3.63±1.12**4.92±0.80**27.60±14.27**蛭血通中劑量組7.24±0.06**37.85±8.08**蛭血通低劑量組7.62±0.69**14.24±5.20**68.23±14.75**地龍?zhí)崛∥锝M6.25±1.05**5.28±1.64**34.57±16.92**土元提取物組7.59±1.63**6.81±0.37**31.21±7.28**

表5 小鼠造模后耳廓動靜脈血管口徑（±s）

表5 小鼠造模后耳廓動靜脈血管口徑（±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

分組靜脈管徑（um）動脈管徑（um）空白組201.44±33.2765.42±25.01模型組153.79±21.46**39.25±15.23*陽性藥組（華法林）182.40±34.70**63.22±25.01蛭血通高劑量組199.00±27.5550.82±12.85蛭血通中劑量組176.63±41.5846.00±9.71蛭血通低劑量組164.91±42.22*45.25±11.21*地龍?zhí)崛∥锝M186.92±44.6851.08±16.06土元提取物組175.75±26.1950.22±11.58

2.5 蛭血通對實驗性大鼠高脂血癥血脂的影響試驗[21]

建立高脂血癥模型及分組：選取70只健康SD大鼠，體重200±20 g，雌雄各半。適應(yīng)性飼養(yǎng)7天后，隨機抽取10只作為空白組，雌雄各半，實驗全程喂飼基礎(chǔ)飼料。其余60只大鼠喂飼高脂飼料4周，誘導(dǎo)建立飲食性高脂血癥大鼠模型。將50只高脂血癥大鼠按TC水平隨機分成5個組：模型組，辛伐他汀組（5.0 mg?kg-1?d-1），蛭血通高、中、低劑量組，地龍?zhí)崛∥铮猎崛∥锝M，每組10只，雌雄各半。灌胃給藥，空白組和模型組給予等劑量的蒸餾水，持續(xù)3周。灌胃3周后，眼眥取血2 mL。4℃靜置10 min，3000 pr/min離心1 5min，分離血清，用全自動生化儀檢測TC、TG、HDL-C、LDL-C水平。

實驗結(jié)果顯示，蛭血通提取物低劑量組、土元提取物組能顯著降低膽固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白的含量，蛭血通中、高劑量組、地龍?zhí)崛∥飳Ω咧Y大鼠有一定的降血脂作用，但無統(tǒng)計學(xué)意義.見表6。

表6 蛭血通、土元和地龍?zhí)崛∥飳Ω哐笫笱挠绊懀ā?s,mmol/L）

表6 蛭血通、土元和地龍?zhí)崛∥飳Ω哐笫笱挠绊懀ā?s,mmol/L）

注：與空白組比較＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，與模型組比較●P＜0.05，●●P＜0.01

組別TCTGHDL-CLDL-C空白組1.62±0.23●●1.42±0.211.62±0.23●●0.20±0.07●●模型組4.66±1.64＊＊1.85±1.384.66±1.64＊＊3.28±2.05＊＊華法林組3.76±0.69＊＊1.97±0.923.76±0.69＊＊2.15±0.62＊＊蛭血通高4.09±1.16＊＊1.68±0.904.09±1.16＊＊2.84±1.75＊＊蛭血通中3.66±2.03＊＊1.83±1.093.66±2.03＊＊2.34±2.58＊＊蛭血通低2.67±0.61＊●1.27±0.382.67±0.61＊●1.54±0.75＊●●地龍?zhí)崛∥锝M3.87±0.77＊＊1.56±0.333.87±0.77＊＊2.36±0.93＊＊土元提取物組3.47±O.67＊＊●●1.64±0.723.47±O.67＊＊●●2.17±0.62＊＊

3 試驗結(jié)論

蛭血通腸溶膠囊對大鼠靜脈血栓模型和體外血栓模型有抑制作用，能降低大鼠血栓濕重，減少血栓形成，縮短血栓長度、降低血栓濕重和血栓干重。試驗結(jié)果證明，蛭血通對血栓形成有明顯的防治作用。

蛭血通對大鼠凝血功能有抑制作用，對大鼠PT、CT有所延長。

蛭血通膠囊對小鼠耳廓微循環(huán)障礙有顯著改善作用，能降低小鼠耳廓動脈血流速度變化率、靜脈血流速度變化率、動脈血流量變化率，緩解小鼠耳廓動靜脈血管管徑的縮小。

蛭血通膠囊對大鼠高脂血癥有一定的改善作用，其低劑量組能顯著降低膽固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白的含量（●P＜0.05，●●P＜0.01），蛭血通中、高劑量組對高脂血癥大鼠有一定的降血脂作用，但無統(tǒng)計學(xué)意義。

[1] 廣西壯族自治區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局.廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)第二卷[C].2011.12

[2] 南京藥學(xué)院.中草藥學(xué)[M].江蘇:江蘇科技出版社,1980:1399.

[3] 戈小寧.水蛭的抗栓和溶栓作用新考[J].醫(yī)學(xué)信息(中旬刊),2010, (11):3402-3403.

[4] 楊永華,沈龍柱,郭元彪,鄭 嵐,夏 翔.中藥水蛭治療冠心病的臨床研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,1996,(06):283.

[5] 鄧妙麗,李寶紅,程 怡,吳勁東,康群招.水蛭的研究概況[J].海峽藥學(xué),2012,(03):5-8.

[6] 司志國.水蛭系列制劑-腦心通治療中風(fēng)的療效研究[N].中西醫(yī)結(jié)合實用臨床急救,2016,(3):106-108.

[7] 曲 進.水蛭[N].山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2012-12.

[8] 楊 潼,李建秋,尹 平.我國產(chǎn)日本醫(yī)蛭水蛭素的分離和純化[J].水生生物學(xué)報,2007,(02):169-173.

[9] 魏 偉,吳希美,李元建.藥理實驗方法學(xué)(第4版)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2010:1113-1116 ; 742-748.

本文編輯：吳玲麗

Objective For the first time in this paper,Study on pharmacodynamics of Zhixuetong enteric capsules which take the zhuang medicine phnom penh leeches as main component.Eupolyphaga and earthworm extract as a comparison.Methods The rat model of venous thrombosis was used to detect the formation of thrombus in vitro.The whole blood clotting time (CT),partial thromboplastin time (APTT),prothrombin time (PT),thrombin time (TT) were measured.To observe the auricle Microcirculation in mice.With the establishment of hyperlipidemia model,to study the improvement of microcirculation,anti hyperlipidemia,anticoagulant and antithrombotic effect. Results Zhixuetong enteric capsules can reduce the wet weight of thrombus and reduce the formation of venous thrombosis in rats.Shorten the length of thrombus in vitro,reduce the wet weight and dry weight of thrombus in vitro.Can prolong the rat PT、CT time.Reduce the auricular artery blood flow velocity change rate of mice,blood flow velocity change rate,arterial blood flow change rate,Alleviate the reduction of the diameter of arterial and venous vessels in the ear of mice.Can significantly reduce the content of cholesterol,high density lipoprotein,low density lipoprotein,On hyperlipidemia rats have a certain lipid-lowering effect.Conclusion Zhixuetong capsule、Eupolyphaga and earthworm extract has obvious anti thrombosis effect on rats.In mice auricle microcirculation has improved significantly and has anticoagulant effect in vivo.On hyperlipidemia rat has a certain lipid-lowering effect. Eupolyphaga and earthworm extract also shows the role in the medium dosage.

Zhuang medicine leech blood through enteric capsule;Efficacy;Test

R286

B

ISSN.2095-8242.2017.16.2977.04