蒸餾酒及配制酒中氰化物測(cè)定方法的改進(jìn)

蔡靈利，許晶冰

（重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，重慶401121）

蒸餾酒及配制酒中氰化物測(cè)定方法的改進(jìn)

蔡靈利，許晶冰

（重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，重慶401121）

介紹了對(duì)GB/T 5009.48—2003中異煙酸-吡唑酮法測(cè)定酒中氰化物方法的改進(jìn)與研究，優(yōu)化了樣品前處理過程，解決了樣品pH值調(diào)節(jié)超出定容體積，部分樣品加入異煙酸-吡唑酮顯色后會(huì)產(chǎn)生白色渾濁等問題。結(jié)果表明，該方法加標(biāo)回收率為92.5%～98.1%，檢出限為0.1 mg/L，RSD＜5%。

氰化物； 酒； 異煙酸-吡唑酮法

食品安全是國(guó)家和公眾近年來普遍關(guān)注的問題，氰化物是嚴(yán)重危害食品安全的劇毒化合物。因此氰化物是酒類的一項(xiàng)重要食品安全檢測(cè)指標(biāo)。白酒中的氰化物主要來自原料，以木薯和木薯類糧食釀造的酒，因它們含有氰苷類物質(zhì)，在生產(chǎn)過程中會(huì)水解生產(chǎn)氫氰酸。雖然大部分氫氰酸在原料蒸煮時(shí)可揮發(fā)，但仍有少量殘留在酒中。

國(guó)標(biāo)GB/T 5009.48—2003《蒸餾酒與配制酒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》[1]規(guī)定了酒中氰化物的檢測(cè)仲裁方法，但是該方法存在以下兩個(gè)主要問題：(1)由于對(duì)化學(xué)試劑的用量和濃度有明確的規(guī)定，在調(diào)節(jié)溶液的pH值時(shí)只有0.8 mL的加液量，這樣很容易造成加入的試劑超出定容體積；(2)在樣品中加入異煙酸-吡唑啉酮溶液時(shí)會(huì)出現(xiàn)白色渾濁現(xiàn)象，干擾顯色反應(yīng)發(fā)生。有研究表明，出現(xiàn)渾濁是由于酒樣中含有的醛類物質(zhì)和高級(jí)醇類導(dǎo)致[2]。針對(duì)這兩個(gè)問題，本文對(duì)國(guó)標(biāo)方法進(jìn)行了改進(jìn)與優(yōu)化。

1 材料與方法

1.1 樣品、儀器與試劑

白酒樣品：共6種，選取市售白酒，根據(jù)香型不同，分別為濃香型白酒2種、清香型白酒2種、醬香型白酒2種。

試劑：乙酸（1+6），NaOH（2 g/L），NaOH（20 g/L），酚酞-乙醇指示劑（10 g/L），磷酸鹽緩沖溶液（pH7.0），氯胺T溶液(10 g/L)，異煙酸-吡唑啉酮溶液。以上試劑均按國(guó)標(biāo)法配制。

氰化物標(biāo)準(zhǔn)溶液：標(biāo)準(zhǔn)濃度50.00 μg/mL（以CN-計(jì)），中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院GWB（E）080115。

氰化物標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：吸取2.00 mL氰化物標(biāo)準(zhǔn)溶液，用NaOH（2 g/L）定容于100 mL容量瓶中，濃度為1.00 μg/mL（以CN-計(jì)）。

JENA SPECORD 210 PLUS紫外可見光分光光度計(jì)；優(yōu)萊博SW22恒溫水浴鍋；IKA MS 3渦旋儀；梅特勒PE20 pH計(jì)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品處理

準(zhǔn)確吸取1.00 mL樣品于10 mL具塞比色管中，加入400 μL氫氧化鈉（20 g/L），渦旋混勻，放置5 min（如樣品有顏色或渾濁，則先按照國(guó)標(biāo)法進(jìn)行蒸餾脫色）。另取氰化物標(biāo)準(zhǔn)液（1.00 μg/mL）0.00、0.10 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL分別置于10 mL具塞離心管中。

1.2.2 pH值調(diào)節(jié)

打開管塞，將樣品管及標(biāo)準(zhǔn)管置于80℃水浴中蒸發(fā)50 min，取出冷卻至室溫。分別加入純水2.00 mL，酚酞指示劑1滴，滴加乙酸（1+6）調(diào)至溶液紅色褪去，后用氫氧化鈉（2 g/L）滴至淺紅色。

1.2.3 顯色及測(cè)定

于各管中分別依次加入2.00 mL磷酸鹽緩沖溶液（pH7.0），0.2 mL氯胺T溶液(10 g/L)，2.00 mL異煙酸-吡唑啉酮溶液，定容至刻度（注：每步驟加液后均需混勻并反應(yīng)2 min）。將各管置于30℃下放置30 min，以1 cm比色皿于638 nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)得吸光度及對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品濃度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中氰化物含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 NaOH加入量的選擇

國(guó)標(biāo)GB/T 5009.48—2003中規(guī)定取1.00 mL樣品后加NaOH（2 g/L）至5 mL。方法中加入過量的NaOH是為了保證將樣品中氰化物完全固定，但液體加至5 mL后，用于調(diào)節(jié)pH值的加液量?jī)H有0.8 mL。而顯色反應(yīng)要求嚴(yán)格控制在pH7.0的條件下進(jìn)行，因此為實(shí)驗(yàn)造成了較大難度，溶液總量很容易超過定容體積。因此，本實(shí)驗(yàn)使用較高濃度的NaOH來固定氰化物以減小加液體積，與國(guó)標(biāo)中加入NaOH含量一致，保證了氰化物的充分固定，也增加了調(diào)節(jié)pH值的加液體積。

2.2 加顯色劑后樣品渾濁的處理

根據(jù)樣品檢測(cè)情況，加顯色劑后出現(xiàn)白色渾濁的樣品以醬香型白酒最多，濃香型白酒次之，清香型白酒最不易出現(xiàn)渾濁。這也印證了產(chǎn)生渾濁的物質(zhì)多為醛類和高級(jí)醇類。即酒中的香味物質(zhì)越豐富，沉淀越易產(chǎn)生。由于醛類和高級(jí)醇類都具有較強(qiáng)的揮發(fā)性，因此，本研究采用樣品加堿固定后，80℃水浴50 min的方法，將其揮發(fā)。

氰化物在堿性條件下穩(wěn)定性很好，本文嘗試使用沸水浴，90℃水浴50 min，80℃水浴50 min，70℃水浴50 min。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，90℃、80℃水浴均能達(dá)到除去渾濁的效果，且樣品加標(biāo)回收率在91.2%～98.1%之間。從實(shí)驗(yàn)方便及節(jié)約能源角度出發(fā)，建議選取80℃水浴50 min。

2.3 顯色終點(diǎn)的判定與pH值的相關(guān)性

國(guó)標(biāo)法中規(guī)定調(diào)節(jié)pH值的終點(diǎn)為“近紅色”，本文研究發(fā)現(xiàn)，紅色的深淺與溶液實(shí)際pH值關(guān)系大致為：淺紅色（pH7.05～7.4）；淺紅色+0.5滴2 g/L NaOH（pH7.5～7.8）；淺紅色+1滴2 g/L NaOH （pH7.8～8.3）。由此可見，調(diào)節(jié)pH值時(shí)應(yīng)盡量滴至淺紅色，以保證緩沖溶液能將pH值調(diào)節(jié)至顯色反應(yīng)要求的pH7.0。

2.4 線性范圍、檢出限、加標(biāo)回收率

配制多個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行線性范圍及檢出限分析，結(jié)果表明，加入標(biāo)準(zhǔn)品在0.5～2.0 μg范圍內(nèi)，氰化物濃度與試液吸光度有良好的線性關(guān)系。以氰化物質(zhì)量（μg）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)，回歸方程為：y=-0.0069+0.2907x，R2=0.9996。以線性最低點(diǎn)作為儀器檢出限，1.00 mL取樣量計(jì)算，樣品檢出限為0.1 mg/L。

分別取1.00 mL樣品，加入1.00 mL氰化物標(biāo)準(zhǔn)液（1.00μg/mL），按上述步驟處理樣品并上機(jī)測(cè)定，樣品加標(biāo)后回收率在92.5%～98.1%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在1.42%～4.65%之間。樣品分析及回收率、精密度見表1。

表1 樣品分析及回收率、精密度（n=6）

3 結(jié)論

本研究在國(guó)標(biāo)GB/T 5009.48—2003氰化物檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了優(yōu)化，解決了國(guó)標(biāo)方法中溶液超過定容體積以及加顯色液后出現(xiàn)白色渾濁的問題，探討了酚酞的顏色與試劑pH值間的關(guān)系，得到了較好的穩(wěn)定性和回收率，方法簡(jiǎn)便可靠，能夠滿足檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)對(duì)樣品日常檢驗(yàn)的要求。

[1] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.蒸餾酒與配制酒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法：GB/T 5009.48—2003[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2004.

[2] 宋楠.測(cè)定酒中氰化物時(shí)比色液濁變的原因及對(duì)策[J].職業(yè)與健康,2003,19(10)：52-53.

[3] 黃選中,杜洪山,呂全勇.CTMAB-異煙酸-吡唑酮顯色光度法測(cè)定白酒中氰化物的研究[J].湖北預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2001,12(1)：35-36.

[4] 王慧,張靜,武瑾瑜,等.白酒中氰化物測(cè)定方法的改進(jìn)[J].釀酒科技,2013(9)：59-60.

[5] 張文德,張光仲,郭忠.酒中微量氰化物的測(cè)定方法研究[J].中國(guó)食品衛(wèi)生雜志,2004,16(3)：231-235.

[6] 李德豪.氰化物測(cè)定中糠醛干擾的消除研究[J].茂名學(xué)院學(xué)報(bào),2002,12(8)：23-26.

[7] 徐向陽(yáng),翟鳳蘭.杏仁露中氰化物測(cè)定方法的研究[J].中國(guó)食品衛(wèi)生雜志,2002,14(6)：20-22.

Improvement of the Determination Method of Cyanide in Distilled Liquor/Liqueur

CAI Lingli and XU Jingbing
（Chongqing Institute of Food&Drug Testing,Chongqing 401121,China）

The isonicotinic acid-pyrazole ketones method stipulated in national standard GB/T 5009.48—2003 for the detection of cyanide in liquor was improved.The pretreatment of liquor samples was optimized,which could settle the problems including liquor sample exceeding constant volume when adjusting pH value,and white precipitate in some samples after the addition of isonicotinic acid-pyrazole ketones,etc.The experimental results suggested that the recovery rate of the improved method was 92.5%to 98.1%, the detection limit was 0.1 mg/L,and RSD＜5%.

cyanide;liquor;isonicotinic acid-pyrazole ketones method

TS262.3；TS262.8；TS261.7

A

1001-9286（2017）06-0074-03

10.13746/j.njkj.2016355

2016-12-01

蔡靈利（1986-），女，本科，助理工程師，研究方向?yàn)槭称窓z測(cè)。

優(yōu)先數(shù)字出版時(shí)間：2017-03-27；地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/52.1051.TS.20170327.1525.009.html。