小鼠脂肪組織石蠟切片制作方法

董學(xué)易，孫慧誌，趙秀蘭，趙 楠，劉 芳

小鼠脂肪組織石蠟切片制作方法

董學(xué)易1,2，孫慧誌1，趙秀蘭1,2，趙 楠1,2，劉 芳1,2

脂肪組織；石蠟制片；HE染色

常規(guī)病理制片將脂肪組織和其他組織同時(shí)用手工或者自動(dòng)脫水機(jī)進(jìn)行脫水、透明、浸蠟、包埋，其它組織制成的蠟塊切片完整，而脂肪組織制成的石蠟切片易空洞或缺損，較難切成完整的切片。優(yōu)良的脂肪組織切片在病理臨床診斷和科學(xué)研究中占有重要地位[1-2]，現(xiàn)階段病理技術(shù)人員對(duì)脂肪組織切片存在困難[3]。我們?cè)谌粘９ぷ髦袑?duì)小鼠的脂肪組織進(jìn)行多次實(shí)驗(yàn)，獲得較為滿意的脂肪組織切片，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 昆明系小鼠正常脂肪組織標(biāo)本，10%中性福爾馬林、95%乙醇、無(wú)水乙醇、二甲苯，均購(gòu)自天津致遠(yuǎn)公司。蘇木精、伊紅染液均購(gòu)自北京中杉金橋公司。石蠟(熔點(diǎn)60～65 ℃)購(gòu)自Leica公司。Leica RM2235型輪轉(zhuǎn)切片機(jī)購(gòu)自德國(guó)。

1.2 方法

1.2.1 石蠟包埋脂肪組織 正常昆明系小鼠的脂肪組織標(biāo)本10塊，大小均為1.5 cm×1 cm×0.2 cm，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各5塊，10塊脂肪組織均用10%中性福爾馬林固定36 h，對(duì)照組采用常規(guī)制片程序進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)組采用特殊處理制片程序進(jìn)行處理。具體程序處理時(shí)間詳見(jiàn)表1，浸蠟溫度均為61 ℃。

表1 脂肪組織特殊處理與常規(guī)處理程序表

1.2.2 切片、染色 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組經(jīng)兩種不同方法處理后，用Leica RM2235型輪轉(zhuǎn)切片機(jī)進(jìn)行切片，切片厚4 μm。水浴鍋溫度42 ℃，烤片溫度70 ℃，烤片2 h后行常規(guī)HE染色。

2 結(jié)果

脂肪組織經(jīng)特殊程序處理后，肉眼可見(jiàn)脂肪組織的石蠟塊完整，石蠟切片可見(jiàn)完整的脂肪組織(圖1A、B)。鏡下可見(jiàn)脂肪組織的細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰透明，核質(zhì)著色良好，無(wú)擠壓和皺縮現(xiàn)象；細(xì)胞內(nèi)的脂滴被溶解成一大空泡，胞核扁圓形，被脂滴推擠到細(xì)胞一側(cè)，呈橢圓或多角形，有的連同部分胞質(zhì)呈新月形，有的細(xì)胞則聚集呈蜂窩狀(圖1C)。實(shí)驗(yàn)組5例蠟塊中，優(yōu)質(zhì)的HE染色切片達(dá)100%。

①A①B①C②A②B②C

圖1 A.實(shí)驗(yàn)組脂肪組織的石蠟塊，脂肪組織形態(tài)保持完整；B.實(shí)驗(yàn)組水浴鍋中的石蠟切片可見(jiàn)完整的脂肪組織，無(wú)皺褶、無(wú)缺損；C.實(shí)驗(yàn)組脂肪細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，分界清楚，核質(zhì)著色良好，細(xì)胞核被脂滴擠到一邊，呈蜂窩狀 圖2 A.對(duì)照組脂肪組織的石蠟塊，脂肪組織形態(tài)保持完整；B.對(duì)照組載玻片上的石蠟切片可見(jiàn)明顯的空洞和缺損，脂肪組織不完整；C.對(duì)照組脂肪組織結(jié)構(gòu)不完整，有空洞，完整部分的脂肪細(xì)胞結(jié)構(gòu)尚清晰，分界清楚

脂肪組織經(jīng)常規(guī)程序處理后，肉眼可見(jiàn)脂肪組織的石蠟塊完整(圖2A)，與實(shí)驗(yàn)組無(wú)明顯差異；但石蠟切片不完整，存在許多空洞及破損(圖2B)。鏡下可見(jiàn)脂肪組織形態(tài)不完整，僅部分脂肪細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，核質(zhì)著色良好；可見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)的脂滴被溶解成一大空泡(圖2C)。對(duì)照組5例蠟塊中，無(wú)1例有完整的HE染色切片，結(jié)果均不合格。

3 討論

優(yōu)質(zhì)的病理切片是保證臨床準(zhǔn)確診斷和科學(xué)研究的重要基礎(chǔ)。由于脂肪組織特殊的結(jié)構(gòu)，決定其必須延長(zhǎng)在乙醇和二甲苯中的脫水、脫脂時(shí)間；只有脂肪組織中的水分徹底脫干凈、油脂徹底溶解，才能保證后續(xù)的石蠟充分浸入脂肪組織中。在制片過(guò)程中需注意以下幾點(diǎn)：(1)保證充分的乙醇和二甲苯脫水、脫脂時(shí)間；(2)充足的浸蠟時(shí)間，且溫度不宜太高；(3)撈片水浴鍋溫度不宜太高。本方法可以適用于乳腺組織標(biāo)本、脂肪瘤、皮膚等含脂肪比較高的標(biāo)本，還可用于肥胖基因相關(guān)研究的小鼠標(biāo)本。

本實(shí)驗(yàn)采用特殊程序處理脂肪組織，該方法簡(jiǎn)便實(shí)用，無(wú)需特殊的儀器與試劑，避免以往復(fù)雜的處理過(guò)程，如微波熱固定、丙酮脫脂固定等程序[4-6]。本實(shí)驗(yàn)在保證切片質(zhì)量的同時(shí)提高了工作效率，滿足臨床診斷和科學(xué)研究的需要，值得在科研和臨床上推廣。

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國(guó)家自然科學(xué)基金(81572872)

1天津醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室，天津 3000702天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院病理科，天津 300052

董學(xué)易，女，碩士，實(shí)驗(yàn)師。E-mail: dxy7235202@126.com 趙秀蘭，女，主任技師，通訊作者。E-mail: sunbaocun@aliyun.com

時(shí)間：2017-5-17 23:54 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170517.2352.030.html

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1001-7399(2017)05-0584-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.05.030

接受日期：2017-02-20