一次性使用輸液器細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)方法的探討

劉興辰 高靜賢 江蘇省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所 （南京 210022）

一次性使用輸液器細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)方法的探討

劉興辰 高靜賢 江蘇省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所 （南京 210022）

輸液器細(xì)菌內(nèi)毒素實(shí)驗(yàn)?zāi)壳澳軈⒄盏默F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定限值不超過(guò)20EU/件，而一般用的鱟試劑靈敏度是0.25EU/ mL，故而浸提液要不超過(guò)80mL/件，而實(shí)際操作的時(shí)候，輸液器一般都無(wú)法直接充入80mL，目前常規(guī)的做法是浸提10（或者20）mL/件，37?C，2h后再稀釋至80mL/件，這樣做肯定會(huì)有誤差。既然標(biāo)準(zhǔn)只提供了限值，如果我們按照限值將剪碎后的輸液器一起浸提，結(jié)果會(huì)是什么呢？可能替代目前的常規(guī)方法嗎？結(jié)果表明，剪碎后浸提得到的浸提液內(nèi)毒素含量有所增加，但是并沒(méi)有超出標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的值。

細(xì)菌內(nèi)毒素 輸液器

輸液器是一種常見(jiàn)的三類(lèi)醫(yī)療器械，主要用于醫(yī)院的靜脈輸液。這類(lèi)直接與人體接觸的器械，從生產(chǎn)到投產(chǎn)前的安全性評(píng)價(jià)再到上市后的監(jiān)督抽樣，每個(gè)環(huán)節(jié)都很重要。

醫(yī)療器械因其多樣性，很多都沒(méi)有一個(gè)完善的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。更多提供的是類(lèi)似指導(dǎo)原則的一種規(guī)范。具體的說(shuō)，例如輸液器的細(xì)菌內(nèi)毒素實(shí)驗(yàn)，“應(yīng)用適當(dāng)?shù)脑囼?yàn)來(lái)評(píng)價(jià)輸液器和/或進(jìn)氣器件無(wú)熱原。結(jié)果應(yīng)表明輸液器無(wú)熱原。第C.1章給出了熱原試驗(yàn)的指南”[1]。“C.1熱原實(shí)驗(yàn)：‘熱原試驗(yàn)應(yīng)按GB/T 14233.2規(guī)定進(jìn)行。注：GB/T 14233.2規(guī)定了熱原試驗(yàn)和細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)’”[1]、“4.5.3供試液制備：‘注2：輸液、輸血、注射器具細(xì)菌內(nèi)毒素限限值在產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定，宜盡可能低。推薦輸液、輸血、注射器具細(xì)菌內(nèi)毒素限量每件不超過(guò)20EU，與腦脊液接觸和胸內(nèi)應(yīng)用醫(yī)療器械每件不超過(guò)2.15EU’”[2]。

以上能參考的就只有輸液器的細(xì)菌內(nèi)毒素限量每件不超過(guò)20EU，由此能算到每件的最大浸提量。其他的就要自己看著辦了。如果是類(lèi)似袋式輸液器還好，80mL能直接注入。一般的普通輸液器，注滿(mǎn)的量大約只有20mL。一份被取代的標(biāo)準(zhǔn)上寫(xiě)到“供試液制備：‘在無(wú)菌條件下，每套輸液器內(nèi)腔注入10mL，輸血器內(nèi)腔注入15mL浸提介質(zhì)，反復(fù)蕩洗5次后兩端密封，置（37±1）?C恒溫箱中保溫2 h，取出后將供試液匯集至一無(wú)菌無(wú)熱原具塞玻璃容器內(nèi)。供試液貯存應(yīng)不超過(guò)2 h。供試品細(xì)菌內(nèi)毒素限量應(yīng)不超過(guò)0.5EU/mL’”，這份93版的舊標(biāo)準(zhǔn)上給出了浸提液制備方法與限值[3]。這份標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定就比較科學(xué)、嚴(yán)格。后來(lái)05版的標(biāo)準(zhǔn)上給了限值，沒(méi)給方法。綜合下，我們目前常規(guī)的方法就是二合一后的93版的方法，05版的限值。

這種方法有沒(méi)有誤差？肯定有，至少輸液器上的瓶塞穿刺器無(wú)法浸提。在產(chǎn)品裝配、使用的過(guò)程中穿刺器會(huì)不會(huì)跟保護(hù)套接觸，外圓錐接頭會(huì)不會(huì)跟保護(hù)套接觸？保護(hù)套你會(huì)浸提嗎，怎么浸提，輸液針你怎么能保證能在37?C±1?C恒溫箱中保溫2 h時(shí)一直與浸提液接觸呢？這些都是實(shí)際上會(huì)遇到的問(wèn)題，想要完善這個(gè)實(shí)驗(yàn)，減少誤差，降低風(fēng)險(xiǎn)，這些都是繞不開(kāi)的障礙。

因此，假想如果能剪碎后全部投入，不管是直接、間接跟人接觸的靜脈針、管路、滴斗、滴管等甚至連看似沒(méi)什么關(guān)系的保護(hù)套、流量調(diào)節(jié)器等也一起算上，整體浸提，加嚴(yán)要求，會(huì)不會(huì)更準(zhǔn)確、更保險(xiǎn)呢？那么目前市場(chǎng)上流通的產(chǎn)品、生產(chǎn)條件能經(jīng)得住這種加嚴(yán)檢測(cè)嗎？筆者從中隨機(jī)選了3家產(chǎn)品做了次調(diào)查。

1.材料與方法

1.1 一般資料

樣品來(lái)源：常州市雙馬醫(yī)療器材有限公司，一次性使用輸液器帶針，規(guī)格：AIF2 0.7×25 TWSB，批號(hào)：20161130（后面簡(jiǎn)稱(chēng)雙馬）；上海金塔醫(yī)用器材有限公司，一次性使用止液輸液器，規(guī)格：0.6×24TWLB，批號(hào)：20160802（后面簡(jiǎn)稱(chēng)金塔）；江蘇治宇醫(yī)療器材有限公司，一次性使用輸液器帶針，規(guī)格：ZY-2 0.6mm，批號(hào)：20160808（后面簡(jiǎn)稱(chēng)治宇）。

試劑：細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品—中國(guó)食品藥品檢定研究院，規(guī)格：80EU/支，批號(hào)：150601-201681；細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水—中國(guó)食品藥品檢定研究院NIFDC，規(guī)格：5mL/支，批號(hào)：160006-201401；細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水—湛江安度斯生物有限公司，規(guī)格：100mL/瓶，批號(hào)：1609280；鱟試劑—湛江安度斯生物有限公司，規(guī)格：0.1mL/支，批號(hào)：1606061標(biāo)示靈敏度：0.25EU/mL；—福州新北生化工業(yè)有限公司，規(guī)格：0.1mL/支，批號(hào)：16040612，標(biāo)示靈敏度：0.25EU/mL。

實(shí)驗(yàn)儀器：①混和器（天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠）ZH-2；②細(xì)菌內(nèi)毒素凝膠法測(cè)定儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）ET-96；③潔凈工作臺(tái)（蘇凈集團(tuán)蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）SW-CJ-2F；④隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱（天津市泰斯特儀器有限公司）規(guī)格：GH6000；⑤電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司）DHG-143BS-III。⑥器具除熱原：與供試品接觸的所有玻璃器皿置電熱干燥箱內(nèi)180?C干烤2h（實(shí)驗(yàn)前一天）

實(shí)驗(yàn)分組：實(shí)驗(yàn)前測(cè)得雙馬、金塔、治宇輸液器注滿(mǎn)水量分別為20mL、18 mL、20 mL。

a1：雙馬，常規(guī)方法，按20mL/件比例注入檢查用水，37?C±1?C，2h。

a2：a1的兩倍稀釋液。（40mL/件）

a3：a2的兩倍稀釋液。（80mL/件）

a4：金塔，常規(guī)方法，按10mL/件比例注入檢查用水，反復(fù)蕩洗5次，37?C±1?C，2h。再反復(fù)蕩洗5次，制備兩倍稀釋液。

a5：a4的兩倍稀釋液。（40mL/件）

a6：a5的兩倍稀釋液。（80mL/件）

a7：治宇，常規(guī)方法，按20mL/件比例注入檢查用水，37?C±1?C，2h。

a8：a7的兩倍稀釋液。（40mL/件）a9：a8的兩倍稀釋液。（80mL/件）

A1：雙馬，剪碎，全部浸提，按20mL/件比例加入檢查用水，未能全部浸入，用力振蕩5 min，37?C±1?C，2h，再用力振蕩5 min，取該液檢測(cè)。

A2：雙馬，剪碎，全部浸提，按40mL/件比例加入檢查用水，未能全部浸入，用力振蕩5 min，37?C±1?C，2h，再用力振蕩5 min，取該液檢測(cè)。

A3：雙馬，剪碎，全部浸提，按80mL/件比例加入檢查用水，37?C±1?C，2h。

A4：金塔，制備方法參照A1。（20mL/件）

A5：金塔，制備方法參照A2。（40mL/件）

A6：金塔，制備方法參照A3。（80mL/件）

A7：治宇，制備方法參照A1。（20mL/件）

A8：治宇，制備方法參照A2。（40mL/件）

A9：治宇，制備方法參照A3。（80mL/件）

1.2 方法

凝膠法—通過(guò)鱟試劑與內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理進(jìn)行限度檢測(cè)。

2.結(jié)果

18組樣品均按藥典方法做過(guò)干擾試驗(yàn)，均無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)表1。

結(jié)果判斷：D的平行管均為陰性，供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液B的平行管均為陽(yáng)性，陽(yáng)性對(duì)照溶液C的平行管均為陽(yáng)性，試驗(yàn)有效。A組中，A1兩個(gè)平行管一管為陽(yáng)性，另一管為陰性，需進(jìn)行復(fù)試，A7兩個(gè)平行管均為陽(yáng)性，判定供試品不符合規(guī)定。其余均符合規(guī)定。

從上表結(jié)果可以看出，在20mL/件條件下，常規(guī)方法均合格，剪碎全浸入一家合格，一家不合格，一家待復(fù)檢。40mL/件、80mL/件時(shí)兩種方法均為合格。

3.討論

本次實(shí)驗(yàn)可以得到如下結(jié)論：①整套輸液器內(nèi)毒素含量比單內(nèi)腔高，高至在某些限制條件下有可能改變實(shí)驗(yàn)結(jié)果。②按目前規(guī)定的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求來(lái)看，生產(chǎn)企業(yè)完全有能力控制整套輸液器內(nèi)毒素含量符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

為什么整套輸液器的內(nèi)毒素含量會(huì)比單內(nèi)腔高呢？本所認(rèn)為是企業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中重視平常認(rèn)知的三類(lèi)醫(yī)療器械重要的部件——與藥液、人體直接、間接接觸的那些，而對(duì)其他看似沒(méi)有直接影響的輔件部分沒(méi)有足夠的重視。產(chǎn)品被污染后，就算經(jīng)過(guò)滅菌處理，某些微生物的尸體及其代謝產(chǎn)物仍會(huì)形成致熱源，釋放出毒性物質(zhì)，影響著細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果。

表1. 18組樣品干擾試驗(yàn)結(jié)果

那么能用檢測(cè)整套輸液器的方法代替常規(guī)方法呢？本所認(rèn)為是可行的?！霸诳萍既找姘l(fā)展的今天，生產(chǎn)工藝和技術(shù)都得到很大提高，筆者覺(jué)得這些關(guān)系到患者安全的標(biāo)準(zhǔn)不宜放松，否則肯定會(huì)大大影響到患者的用藥安全”[4]。

[1] GB 8368-2005.一次性使用輸液器重力輸液式[S]. 2005.

[2] GB/T 14233.2-2005.醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法第2部分:生物學(xué)試驗(yàn)方法[S]. 2005.

[3] GB/T 14233.2-93.醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法第二部分:生物學(xué)試驗(yàn)方法[S]. 1993.

[4] 翁一玲, 陳松旺. 醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中細(xì)菌內(nèi)毒素限度檢查的探討[J]. 海峽藥學(xué), 2009,21(4):78-79.

Discussion on the Method of Detecting Bacterial Endotoxin in Disposable Infusion

LIU Xing-chen GAO Jing-xian Jiangsu Institute of Medical Device Testing (Nanjing 210022)

1006-6586(2017)09-0056-02

R194.5

A

2017-03-20