響應(yīng)面試驗優(yōu)化牛樟芝總?cè)铺崛」に?/h1>
2017-06-22 13:25:08黃紅雨趙虎金曉艷
食品研究與開發(fā) 2017年12期
黃紅雨，趙虎，金曉艷
（1.昌吉職業(yè)技術(shù)學(xué)院，新疆昌吉831100；2.昌吉州中醫(yī)醫(yī)院，新疆昌吉831100）
響應(yīng)面試驗優(yōu)化牛樟芝總?cè)铺崛」に?/p>
黃紅雨1，趙虎2，金曉艷1
（1.昌吉職業(yè)技術(shù)學(xué)院，新疆昌吉831100；2.昌吉州中醫(yī)醫(yī)院，新疆昌吉831100）
對牛樟芝總?cè)铺崛」に噮?shù)進行優(yōu)化研究。采用單因素和響應(yīng)面法優(yōu)化最佳工藝條件。結(jié)果表明，牛樟芝總?cè)铺崛∽罴压に噮?shù)為乙醇濃度78%、提取時間81 min、料液比1∶20（g/mL），在此條件下，牛樟芝總?cè)频寐蕿?.26%。方差分析表明，影響牛樟芝總?cè)频寐视纱蟮叫〉囊蛩貫橐掖紳舛龋咎崛r間＞料液比。研究結(jié)果表明響應(yīng)面法可用來優(yōu)化牛樟芝總?cè)频奶崛」に?，通過牛樟芝總?cè)频奶崛】蔀檫M一步開發(fā)藥食同源類產(chǎn)品提供借鑒作用。
牛樟芝；總?cè)疲豁憫?yīng)面；工藝優(yōu)化
牛樟芝（Antrodia cinnamomea）又被稱作牛樟菇，產(chǎn)于我國臺灣，主要在牛樟樹上，生長海拔較高[1-2]，是一種名貴藥材，藥用部分為子實體，形狀不規(guī)則，具有大量的藥用活性成分[3-4]，其中包括多糖、黃酮類化合物，三萜類化合物，核酸類物質(zhì)，免疫蛋白等，有專家研究得出，多糖類化合物雖然含量很少[5]，但具有提高機體免疫力、抗腫瘤、抗血栓等功效，核酸類物質(zhì)能夠抑制血小板凝聚，預(yù)防和治療動脈硬化等功效[6-7]。三萜類化合物能夠起到抗氧化作用以及抑制癌細胞的繁殖，還具有降血壓、降血糖等功效[8]，因此，牛樟芝總?cè)祁惢衔锞哂兄匾乃幱醚芯績r值，提取牛樟芝總?cè)瞥蔀槟壳凹毙杞鉀Q的問題。本研究以牛樟芝為原料，利用單因素和響應(yīng)面試驗優(yōu)化提取牛樟芝總?cè)谱罴压に噮?shù)，為開發(fā)利用牛樟芝總?cè)祁愃幨惩串a(chǎn)品提供技術(shù)參考。
1 材料與方法
1.1 試驗儀器與材料
BOEN型紫外-可見分光光度計：費爾伯恩精密儀器（上海）有限公司；ScienTZ-10N冷凍干燥機：臨安匯發(fā)機械設(shè)備有限公司；熊果酸標品（批號100080-200306，質(zhì)量分數(shù)≥98.5%）：北京華諾信得科技有限公司；牛樟芝：臺灣亞芯生物科技有限公司；乙醇、高氯酸、5%香草醛-冰乙酸：臨沂商城冠林化工產(chǎn)品有限公司。
1.2 試驗方法
1.2.1 牛樟芝總?cè)铺崛」に嚵鞒?/p>
牛樟芝→清洗→瀝水→烘干→破碎→超微粉碎→乙醇浸提→牛樟芝總?cè)?/p>
1.2.2 牛樟芝總?cè)铺崛我蛩卦囼?/p>
1.2.2.1 乙醇濃度對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊?/p>
在提取時間80 min、料液比1∶20（g/mL）的條件下，乙醇濃度分別為65%、70%、75%、80%、85%時，以牛樟芝總?cè)频寐蕿榭己酥笜?，考察乙醇濃度對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊憽?/p>
1.2.2.2 提取時間對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊?/p>
在乙醇濃度75%、料液比1∶20（g/mL）的條件下，提取時間分別為70、75、80、85、90 min時，以牛樟芝總?cè)频寐蕿榭己酥笜?，考察提取時間對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊憽?/p>
1.2.2.3 料液比對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊?/p>
在乙醇濃度75%、提取時間80 min的條件下，料液比分別為1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30（g/mL）時，以牛樟芝總?cè)频寐蕿榭己酥笜耍疾炝弦罕葘εＵ林タ側(cè)频寐实挠绊憽?/p>
1.2.3 牛樟芝總?cè)铺崛」に図憫?yīng)面試驗
綜合考察單因素試驗結(jié)果，以乙醇濃度（A）、提取時間（B）、料液比（C）作為因素，以牛樟芝總?cè)频寐剩╕）為考察值，設(shè)計三因素三水平的響應(yīng)面試驗，確定飲料最佳工藝參數(shù)。試驗設(shè)計因素水平見表1。
表1 因素與水平Table1 Factors and levels
1.2.4 牛樟芝總?cè)茩z測[9-10]
1.2.4.1 對照樣的制備
準確量取熊果酸對照樣10.00 mg，使用乙醇定容至100 mL，得到濃度為0.10 mg/mL的熊果酸對照樣液，備用。
1.2.4.2 標準曲線的制作
準確取 0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20 mL熊果酸對照樣液，用水浴法將其干燥后，向其中加入0.2 mL 5%香草醛-冰醋酸溶液和1 mL高氯酸，70℃水浴35 min，立即冰浴10 min，加入5.00 mL冰醋酸，搖勻，直到室溫條件，同時做空白試驗。采用紫外-可見分光光度計于548 nm處測定其吸光度（A）值，以熊果酸質(zhì)量濃度（X）作為橫坐標，以吸光度A值（Y）作為縱坐標，做出曲線，得標準曲線方程為Y=57.327 X+ 0.002 3，r=0.999 7，表明熊果酸在10 μg～120 μg線性關(guān)系良好。
1.2.4.3 待測樣液的制備
準確稱牛樟芝細粉末1 g，使用20 mL 90%乙醇溶液根據(jù)單因素試驗規(guī)定進行浸提，過濾后，將濾液定容為250 mL。再精確量取1 mL于10 mL容量瓶中進行定容，測其吸光度，根據(jù)標準曲線即可得出牛樟芝總?cè)频寐省?/p>
1.3 數(shù)據(jù)分析
數(shù)據(jù)處理時，各個數(shù)據(jù)均采用平均數(shù)±標準差（x± s）的形式表示，并且通過SPSS 16.0數(shù)據(jù)分析軟件進行分析處理[11]。
2 結(jié)果
2.1 牛樟芝總?cè)铺崛我蛩卦囼灲Y(jié)果
2.1.1 乙醇濃度對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊?/p>
乙醇濃度對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊懸妶D1。
圖1 乙醇濃度對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊慒ig.1 Effect of ethanol concentration on the total triterpenoid yield of Antrodia cinnamomea
由圖1可得，當(dāng)乙醇濃度為65%時，牛樟芝總?cè)频寐首畹停?dāng)乙醇濃度升高后，牛樟芝總?cè)频寐手饾u升高，當(dāng)乙醇濃度達到75%時，牛樟芝總?cè)频寐首罡撸瑸?.52%。繼續(xù)增大乙醇濃度后，牛樟芝總?cè)频寐蕩缀醪蛔儯虼诉x擇乙醇濃度為70%、75%、80%為響應(yīng)面研究水平。
2.1.2 提取時間對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊?/p>
提取時間對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊懸妶D2。
圖2 提取時間對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊慒ig.2 Effect of extraction time on total triterpenoid yield of Antrodia cinnamomea
由圖2可得，當(dāng)提取時間為70 min時，牛樟芝總?cè)频寐首畹停?dāng)延長提取時間后，牛樟芝總?cè)频寐噬撸?dāng)提取時間為80 min時，牛樟芝總?cè)频寐首罡撸瑸?.50%。繼續(xù)延長提取時間后，牛樟芝總?cè)频寐蕩缀醪蛔儯虼诉x擇提取時間為75、80、85 min為響應(yīng)面研究水平。
2.1.3 料液比對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊?/p>
料液比對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊懸妶D3。
圖3 料液比對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊慒ig.3 Effect of material/liquid ratio on total triterpenoid yield of Antrodia cinnamomea
由圖3可知，當(dāng)料液比為1∶10（g/mL）時，牛樟芝總?cè)频寐首畹?，隨著溶劑的增多，牛樟芝總?cè)频寐氏壬吆蠼档?，?dāng)料液比為1∶20（g/mL）時牛樟芝總?cè)频寐首罡?，隨著溶劑的增多后，得率又逐漸下降，因此選擇料液比為1∶15、1∶20、1∶25（g/mL）為響應(yīng)面研究水平。
2.2 牛樟芝總?cè)铺崛」に噮?shù)的優(yōu)化
2.2.1 牛樟芝總?cè)茢?shù)學(xué)模型的建立與顯著性檢驗
根據(jù)單因素試驗結(jié)果，應(yīng)用響應(yīng)面軟件進一步優(yōu)化提取工藝參數(shù)。考察乙醇濃度（A）、提取時間（B）、料液比（C）對牛樟芝總?cè)频寐剩╕）的影響，試驗設(shè)計方案及結(jié)果見表2。
表2 Box-Benhnken的中心組合試驗設(shè)計及結(jié)果Table 2 Box-Benhnken the central composite experimental design and results
采用Design-Expert8.0.6軟件對表2數(shù)據(jù)進行多元回歸擬合、方差分析及顯著性檢驗，得到以牛樟芝總?cè)频寐蕿槟繕撕瘮?shù)，關(guān)于各條件編碼值的二次回歸方程為：Y=4.89＋0.98A＋0.71B＋0.23C＋0.55AB＋0.065AC－0.37BC－1.48A2－1.17B2－0.78C2。對數(shù)據(jù)進行顯著性檢驗，方差結(jié)果見表3，可信度分析結(jié)果見表4。
表3 回歸方程方差分析表Table 3 Analysis of variance table for regression model
續(xù)表3 回歸方程方差分析表Continue table 3 Analysis of variance table for regression model
表4 回歸模型的可信度分析Table 4 Reliability analysis of the established regression model
由表3、4可知，此模型P值遠小于0.01，能夠得出此模型極顯著，誤差很小，故能夠用此模型代替真實值對牛樟芝總?cè)频寐首龀龇治觯琑2=98.61%，試驗值與理論值相關(guān)性高，此模型可靠性高。在回歸模型中，一次項A、B，交互項AB，二次項A2、B2、C2，均極顯著，一次項C，交互項BC，均顯著。方差分析表明，影響牛樟芝總?cè)频寐视纱蟮叫〉囊蛩貫橐掖紳舛?提取時間>料液比。
2.2.2 因素間相互作用響應(yīng)面分析結(jié)果
因素間相互作用響應(yīng)面分析結(jié)果見圖4。
圖4 響應(yīng)面及等高線圖Fig.4 Response surfaces and contour plots.
響應(yīng)面圖能夠反映出各個因素之間的相互關(guān)系以及相互作用程度[12-13]。通過響應(yīng)面軟件對數(shù)據(jù)進行分析，可得到圖4。等高線能夠更清晰直觀反映兩因素之間關(guān)系。橢圓形表示兩因素之間影響極顯著，圓形表示因素間影響不顯著。乙醇濃度（A）與提取時間（B）為橢圓形，影響極顯著，提取時間（B）與料液比（C）為橢圓形，影響顯著，而乙醇濃度（A）與料液比（C）為圓形，影響不顯著。
2.2.3 優(yōu)化牛樟芝總?cè)铺崛」に噮?shù)
為確定最佳參數(shù)，對擬合的回歸方程求分別一階偏導(dǎo)數(shù)，并設(shè)其為0，得到三元一次方程如下：
求解得：A＝0.533、B＝0.200、C＝0，根據(jù)生產(chǎn)實際的水平，調(diào)整最佳參數(shù)為乙醇濃度為78%、提取時間為81 min、料液比為1∶20（g/mL），在此條件下，根據(jù)三次平行驗證試驗可得，牛樟芝總?cè)频寐蕿?.26%。
3 結(jié)論
以牛樟芝為原料，利用乙醇浸出法從其中提取牛樟芝總?cè)祁惢衔?。根?jù)單因素和響應(yīng)面試驗得出，牛樟芝總?cè)铺崛∽罴压に噮?shù)為乙醇濃度78%、提取時間81 min、料液比1∶20（g/mL），在此條件下，牛樟芝總?cè)频寐蕿?.26%。方差分析表明，影響牛樟芝總?cè)频寐视纱蟮叫〉囊蛩貫橐掖紳舛龋咎崛r間＞料液比。說明響應(yīng)面法可用來優(yōu)化牛樟芝總?cè)频奶崛」に嚕ㄟ^牛樟芝總?cè)频奶崛】蔀榕Ｕ林タ側(cè)铺峁﹨⒖?，為進一步開發(fā)藥食同源類產(chǎn)品提供借鑒作用。
[1]蘇志誠,阮時寶.臺灣牛樟芝的性味、歸經(jīng)與功效的探討[J].中醫(yī)臨床研究,2013(20)：26-27,30
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Response Surface Test Optimization of Extraction Process of Total Triterpenoids from Antrodia cinnamomea
HUANG Hong-yu1，ZHAO Hu2，JIN Xiao-yan1
（1.Changji Vocational and Technical College，Changji 831100，Xinjiang，China；2.Changji Chinese Medicine Hospital，Changji 831100，Xinjiang，China）
The extraction parameters of total triterpenoids from Antrodia cinnamomea were optimized.The optimum conditions were optimized by single factor and response surface method.The results showed that the optimum extraction conditions were as follows：the concentration of ethanol was 78%，the extraction time was 81min，and the ratio of material to liquid was 1：20（g/mL）.Under this condition，the total triterpenes yield was 5.26%.The variance analysis showed that the factors influencing the yield of total triterpenes from Antrodia cinnamomea were ethanol concentration＞extraction time＞ratio of material to liquid.The results showed that the response surface method could be used to optimize the extraction process of triterpenoids from Antrodia cinnamomea，and the extraction of triterpenoids from Antrodia cinnamomea could provide a reference for the further development of medicinal and edible homologous products.
Antrodia cinnamomea；totaltriterpenes；response surface；process optimization
10.3969/j.issn.1005-6521.2017.12.008
2017-03-14
新疆維吾爾自治區(qū)高等學(xué)?？蒲许椖浚╔JEDU2014S081）
黃紅雨（1976—），女（漢），講師，本科，研究方向：天然藥物及中藥開發(fā)。
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黃紅雨，趙虎，金曉艷
（1.昌吉職業(yè)技術(shù)學(xué)院，新疆昌吉831100；2.昌吉州中醫(yī)醫(yī)院，新疆昌吉831100）
響應(yīng)面試驗優(yōu)化牛樟芝總?cè)铺崛」に?/p>
黃紅雨1，趙虎2，金曉艷1
（1.昌吉職業(yè)技術(shù)學(xué)院，新疆昌吉831100；2.昌吉州中醫(yī)醫(yī)院，新疆昌吉831100）
對牛樟芝總?cè)铺崛」に噮?shù)進行優(yōu)化研究。采用單因素和響應(yīng)面法優(yōu)化最佳工藝條件。結(jié)果表明，牛樟芝總?cè)铺崛∽罴压に噮?shù)為乙醇濃度78%、提取時間81 min、料液比1∶20（g/mL），在此條件下，牛樟芝總?cè)频寐蕿?.26%。方差分析表明，影響牛樟芝總?cè)频寐视纱蟮叫〉囊蛩貫橐掖紳舛龋咎崛r間＞料液比。研究結(jié)果表明響應(yīng)面法可用來優(yōu)化牛樟芝總?cè)频奶崛」に?，通過牛樟芝總?cè)频奶崛】蔀檫M一步開發(fā)藥食同源類產(chǎn)品提供借鑒作用。
牛樟芝；總?cè)疲豁憫?yīng)面；工藝優(yōu)化
牛樟芝（Antrodia cinnamomea）又被稱作牛樟菇，產(chǎn)于我國臺灣，主要在牛樟樹上，生長海拔較高[1-2]，是一種名貴藥材，藥用部分為子實體，形狀不規(guī)則，具有大量的藥用活性成分[3-4]，其中包括多糖、黃酮類化合物，三萜類化合物，核酸類物質(zhì)，免疫蛋白等，有專家研究得出，多糖類化合物雖然含量很少[5]，但具有提高機體免疫力、抗腫瘤、抗血栓等功效，核酸類物質(zhì)能夠抑制血小板凝聚，預(yù)防和治療動脈硬化等功效[6-7]。三萜類化合物能夠起到抗氧化作用以及抑制癌細胞的繁殖，還具有降血壓、降血糖等功效[8]，因此，牛樟芝總?cè)祁惢衔锞哂兄匾乃幱醚芯績r值，提取牛樟芝總?cè)瞥蔀槟壳凹毙杞鉀Q的問題。本研究以牛樟芝為原料，利用單因素和響應(yīng)面試驗優(yōu)化提取牛樟芝總?cè)谱罴压に噮?shù)，為開發(fā)利用牛樟芝總?cè)祁愃幨惩串a(chǎn)品提供技術(shù)參考。
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BOEN型紫外-可見分光光度計：費爾伯恩精密儀器（上海）有限公司；ScienTZ-10N冷凍干燥機：臨安匯發(fā)機械設(shè)備有限公司；熊果酸標品（批號100080-200306，質(zhì)量分數(shù)≥98.5%）：北京華諾信得科技有限公司；牛樟芝：臺灣亞芯生物科技有限公司；乙醇、高氯酸、5%香草醛-冰乙酸：臨沂商城冠林化工產(chǎn)品有限公司。
1.2 試驗方法
1.2.1 牛樟芝總?cè)铺崛」に嚵鞒?/p>
牛樟芝→清洗→瀝水→烘干→破碎→超微粉碎→乙醇浸提→牛樟芝總?cè)?/p>
1.2.2 牛樟芝總?cè)铺崛我蛩卦囼?/p>
1.2.2.1 乙醇濃度對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊?/p>
在提取時間80 min、料液比1∶20（g/mL）的條件下，乙醇濃度分別為65%、70%、75%、80%、85%時，以牛樟芝總?cè)频寐蕿榭己酥笜?，考察乙醇濃度對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊憽?/p>
1.2.2.2 提取時間對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊?/p>
在乙醇濃度75%、料液比1∶20（g/mL）的條件下，提取時間分別為70、75、80、85、90 min時，以牛樟芝總?cè)频寐蕿榭己酥笜?，考察提取時間對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊憽?/p>
1.2.2.3 料液比對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊?/p>
在乙醇濃度75%、提取時間80 min的條件下，料液比分別為1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30（g/mL）時，以牛樟芝總?cè)频寐蕿榭己酥笜耍疾炝弦罕葘εＵ林タ側(cè)频寐实挠绊憽?/p>
1.2.3 牛樟芝總?cè)铺崛」に図憫?yīng)面試驗
綜合考察單因素試驗結(jié)果，以乙醇濃度（A）、提取時間（B）、料液比（C）作為因素，以牛樟芝總?cè)频寐剩╕）為考察值，設(shè)計三因素三水平的響應(yīng)面試驗，確定飲料最佳工藝參數(shù)。試驗設(shè)計因素水平見表1。
表1 因素與水平Table1 Factors and levels
1.2.4 牛樟芝總?cè)茩z測[9-10]
1.2.4.1 對照樣的制備
準確量取熊果酸對照樣10.00 mg，使用乙醇定容至100 mL，得到濃度為0.10 mg/mL的熊果酸對照樣液，備用。
1.2.4.2 標準曲線的制作
準確取 0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20 mL熊果酸對照樣液，用水浴法將其干燥后，向其中加入0.2 mL 5%香草醛-冰醋酸溶液和1 mL高氯酸，70℃水浴35 min，立即冰浴10 min，加入5.00 mL冰醋酸，搖勻，直到室溫條件，同時做空白試驗。采用紫外-可見分光光度計于548 nm處測定其吸光度（A）值，以熊果酸質(zhì)量濃度（X）作為橫坐標，以吸光度A值（Y）作為縱坐標，做出曲線，得標準曲線方程為Y=57.327 X+ 0.002 3，r=0.999 7，表明熊果酸在10 μg～120 μg線性關(guān)系良好。
1.2.4.3 待測樣液的制備
準確稱牛樟芝細粉末1 g，使用20 mL 90%乙醇溶液根據(jù)單因素試驗規(guī)定進行浸提，過濾后，將濾液定容為250 mL。再精確量取1 mL于10 mL容量瓶中進行定容，測其吸光度，根據(jù)標準曲線即可得出牛樟芝總?cè)频寐省?/p>
1.3 數(shù)據(jù)分析
數(shù)據(jù)處理時，各個數(shù)據(jù)均采用平均數(shù)±標準差（x± s）的形式表示，并且通過SPSS 16.0數(shù)據(jù)分析軟件進行分析處理[11]。
2 結(jié)果
2.1 牛樟芝總?cè)铺崛我蛩卦囼灲Y(jié)果
2.1.1 乙醇濃度對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊?/p>
乙醇濃度對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊懸妶D1。
圖1 乙醇濃度對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊慒ig.1 Effect of ethanol concentration on the total triterpenoid yield of Antrodia cinnamomea
由圖1可得，當(dāng)乙醇濃度為65%時，牛樟芝總?cè)频寐首畹停?dāng)乙醇濃度升高后，牛樟芝總?cè)频寐手饾u升高，當(dāng)乙醇濃度達到75%時，牛樟芝總?cè)频寐首罡撸瑸?.52%。繼續(xù)增大乙醇濃度后，牛樟芝總?cè)频寐蕩缀醪蛔儯虼诉x擇乙醇濃度為70%、75%、80%為響應(yīng)面研究水平。
2.1.2 提取時間對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊?/p>
提取時間對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊懸妶D2。
圖2 提取時間對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊慒ig.2 Effect of extraction time on total triterpenoid yield of Antrodia cinnamomea
由圖2可得，當(dāng)提取時間為70 min時，牛樟芝總?cè)频寐首畹停?dāng)延長提取時間后，牛樟芝總?cè)频寐噬撸?dāng)提取時間為80 min時，牛樟芝總?cè)频寐首罡撸瑸?.50%。繼續(xù)延長提取時間后，牛樟芝總?cè)频寐蕩缀醪蛔儯虼诉x擇提取時間為75、80、85 min為響應(yīng)面研究水平。
2.1.3 料液比對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊?/p>
料液比對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊懸妶D3。
圖3 料液比對牛樟芝總?cè)频寐实挠绊慒ig.3 Effect of material/liquid ratio on total triterpenoid yield of Antrodia cinnamomea
由圖3可知，當(dāng)料液比為1∶10（g/mL）時，牛樟芝總?cè)频寐首畹?，隨著溶劑的增多，牛樟芝總?cè)频寐氏壬吆蠼档?，?dāng)料液比為1∶20（g/mL）時牛樟芝總?cè)频寐首罡?，隨著溶劑的增多后，得率又逐漸下降，因此選擇料液比為1∶15、1∶20、1∶25（g/mL）為響應(yīng)面研究水平。
2.2 牛樟芝總?cè)铺崛」に噮?shù)的優(yōu)化
2.2.1 牛樟芝總?cè)茢?shù)學(xué)模型的建立與顯著性檢驗
根據(jù)單因素試驗結(jié)果，應(yīng)用響應(yīng)面軟件進一步優(yōu)化提取工藝參數(shù)。考察乙醇濃度（A）、提取時間（B）、料液比（C）對牛樟芝總?cè)频寐剩╕）的影響，試驗設(shè)計方案及結(jié)果見表2。
表2 Box-Benhnken的中心組合試驗設(shè)計及結(jié)果Table 2 Box-Benhnken the central composite experimental design and results
采用Design-Expert8.0.6軟件對表2數(shù)據(jù)進行多元回歸擬合、方差分析及顯著性檢驗，得到以牛樟芝總?cè)频寐蕿槟繕撕瘮?shù)，關(guān)于各條件編碼值的二次回歸方程為：Y=4.89＋0.98A＋0.71B＋0.23C＋0.55AB＋0.065AC－0.37BC－1.48A2－1.17B2－0.78C2。對數(shù)據(jù)進行顯著性檢驗，方差結(jié)果見表3，可信度分析結(jié)果見表4。
表3 回歸方程方差分析表Table 3 Analysis of variance table for regression model
續(xù)表3 回歸方程方差分析表Continue table 3 Analysis of variance table for regression model
表4 回歸模型的可信度分析Table 4 Reliability analysis of the established regression model
由表3、4可知，此模型P值遠小于0.01，能夠得出此模型極顯著，誤差很小，故能夠用此模型代替真實值對牛樟芝總?cè)频寐首龀龇治觯琑2=98.61%，試驗值與理論值相關(guān)性高，此模型可靠性高。在回歸模型中，一次項A、B，交互項AB，二次項A2、B2、C2，均極顯著，一次項C，交互項BC，均顯著。方差分析表明，影響牛樟芝總?cè)频寐视纱蟮叫〉囊蛩貫橐掖紳舛?提取時間>料液比。
2.2.2 因素間相互作用響應(yīng)面分析結(jié)果
因素間相互作用響應(yīng)面分析結(jié)果見圖4。
圖4 響應(yīng)面及等高線圖Fig.4 Response surfaces and contour plots.
響應(yīng)面圖能夠反映出各個因素之間的相互關(guān)系以及相互作用程度[12-13]。通過響應(yīng)面軟件對數(shù)據(jù)進行分析，可得到圖4。等高線能夠更清晰直觀反映兩因素之間關(guān)系。橢圓形表示兩因素之間影響極顯著，圓形表示因素間影響不顯著。乙醇濃度（A）與提取時間（B）為橢圓形，影響極顯著，提取時間（B）與料液比（C）為橢圓形，影響顯著，而乙醇濃度（A）與料液比（C）為圓形，影響不顯著。
2.2.3 優(yōu)化牛樟芝總?cè)铺崛」に噮?shù)
為確定最佳參數(shù)，對擬合的回歸方程求分別一階偏導(dǎo)數(shù)，并設(shè)其為0，得到三元一次方程如下：
求解得：A＝0.533、B＝0.200、C＝0，根據(jù)生產(chǎn)實際的水平，調(diào)整最佳參數(shù)為乙醇濃度為78%、提取時間為81 min、料液比為1∶20（g/mL），在此條件下，根據(jù)三次平行驗證試驗可得，牛樟芝總?cè)频寐蕿?.26%。
3 結(jié)論
以牛樟芝為原料，利用乙醇浸出法從其中提取牛樟芝總?cè)祁惢衔?。根?jù)單因素和響應(yīng)面試驗得出，牛樟芝總?cè)铺崛∽罴压に噮?shù)為乙醇濃度78%、提取時間81 min、料液比1∶20（g/mL），在此條件下，牛樟芝總?cè)频寐蕿?.26%。方差分析表明，影響牛樟芝總?cè)频寐视纱蟮叫〉囊蛩貫橐掖紳舛龋咎崛r間＞料液比。說明響應(yīng)面法可用來優(yōu)化牛樟芝總?cè)频奶崛」に嚕ㄟ^牛樟芝總?cè)频奶崛】蔀榕Ｕ林タ側(cè)铺峁﹨⒖?，為進一步開發(fā)藥食同源類產(chǎn)品提供借鑒作用。
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Response Surface Test Optimization of Extraction Process of Total Triterpenoids from Antrodia cinnamomea
HUANG Hong-yu1，ZHAO Hu2，JIN Xiao-yan1
（1.Changji Vocational and Technical College，Changji 831100，Xinjiang，China；2.Changji Chinese Medicine Hospital，Changji 831100，Xinjiang，China）
The extraction parameters of total triterpenoids from Antrodia cinnamomea were optimized.The optimum conditions were optimized by single factor and response surface method.The results showed that the optimum extraction conditions were as follows：the concentration of ethanol was 78%，the extraction time was 81min，and the ratio of material to liquid was 1：20（g/mL）.Under this condition，the total triterpenes yield was 5.26%.The variance analysis showed that the factors influencing the yield of total triterpenes from Antrodia cinnamomea were ethanol concentration＞extraction time＞ratio of material to liquid.The results showed that the response surface method could be used to optimize the extraction process of triterpenoids from Antrodia cinnamomea，and the extraction of triterpenoids from Antrodia cinnamomea could provide a reference for the further development of medicinal and edible homologous products.
Antrodia cinnamomea；totaltriterpenes；response surface；process optimization
10.3969/j.issn.1005-6521.2017.12.008
2017-03-14
新疆維吾爾自治區(qū)高等學(xué)?？蒲许椖浚╔JEDU2014S081）
黃紅雨（1976—），女（漢），講師，本科，研究方向：天然藥物及中藥開發(fā)。
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