基于代謝組學(xué)研究黃連—黃芩藥對治療腦缺血大鼠的作用機(jī)制

曹慧婷+朱華旭+張啟春+郭立瑋

[摘要] 運用代謝組學(xué)方法研究黃連-黃芩藥對對腦缺血模型大鼠代謝的作用機(jī)制。采用線栓法致大腦中動脈阻塞復(fù)制缺血再灌腦損傷大鼠模型（MCAO）。通過超高效液相色譜-串聯(lián)四級桿飛行時間質(zhì)譜（UPLC-Q-TOF/MS）的方法、Markerlynx軟件、以及主成分分析法和偏最小二乘判別法分析正常大鼠、腦缺血模型大鼠以及分別給予黃連（HL）、黃芩（HQ）和黃連-黃芩藥對（LQ）干預(yù)后大鼠尿液樣本中的內(nèi)源性代謝物的差異，結(jié)合內(nèi)源性代謝物的一級及二級碎片離子的精確信息，檢索并鑒定可能的生物標(biāo)志物，進(jìn)而在MetPA數(shù)據(jù)庫中構(gòu)建代謝通路。結(jié)果在腦缺血模型大鼠的尿液中發(fā)現(xiàn)并鑒定出了20種生物標(biāo)志物，并對其相對含量及代謝途徑進(jìn)行分析。主要涉及神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)節(jié)、氨基酸代謝、能量代謝、脂質(zhì)代謝等。這些代謝通路在腦缺血模型大鼠的體內(nèi)發(fā)生紊亂，主成分分析表明，正常與腦缺血模型得到明顯區(qū)分，而給予HL，HQ，LQ后可以使之向著正常狀態(tài)轉(zhuǎn)變。此研究對腦缺血大鼠代謝組及黃連-黃芩藥對干預(yù)的作用機(jī)制進(jìn)行闡釋，體現(xiàn)代謝組學(xué)可反映生物體的生理及代謝狀態(tài)，能較好地體現(xiàn)藥對是中醫(yī)遣方用藥的特色優(yōu)勢，具有內(nèi)在的組合變化規(guī)律以及中醫(yī)藥的整體觀、系統(tǒng)觀以及多成分協(xié)同或拮抗作用的特點。

[關(guān)鍵詞] 腦缺血；黃連-黃芩藥對；代謝組學(xué)；UPLC-Q-TOF/MS

[Abstract] The metabolic effect of Huanglian-Huangqin herb pairs on cerebral ischemia rats was studied by using metabolomic method. The rat model of ischemia reperfusion injury induced by introduction of transient middle cerebral artery occlusion （MCAO） followed by reperfusion. Ultra high performance liquid chromatography-series four pole time of flight mass spectrometry method（UPLC-Q-TOF/MS），Markerlynx software，and principal component analysis and partial least-squares discriminant analysis were used to analyze the different endogenous metabolites among the urine samples of sham rats，cerebral ischemia model rats，Huanglian groups （HL），Huangqin groups （HQ） and Huanglian-Huangqin herb pairs groups （LQ） was achieved，combined with accurate information about the endogenous metabolites level and secondary fragment ions，retrieval and identification of possible biological markers，metabolic pathway which build in MetPA database. The 20 potential biomarkers were found in the urine of rats with cerebral ischemia，which mainly involved in the neurotransmitter regulation，amino acid metabolism，energy metabolism，lipid metabolism and so on. Those metabolic pathways were disturbed in cerebral ischemia model rats，the principal component analysis showed that the normal and cerebral ischemia model is clearly distinguished，and the compound can be given to the normal state of change after HL，HQ，LQ administration. This study index the interpretation of cerebral ischemia rat metabolism group and mechanism，the embodiment of metabonomics can reflect the physiological and metabolic state，which can better reflect the traditional Chinese medicine as a whole view，system view and the features of multi ingredient synergistic or antagonistic effects.

[Key words] cerebral ischemia；Huanglian-Huangqin herb pairs；metabolomics；UPLC-Q-TOF/MS

藥對是單味中藥與若干方劑之間的橋梁，是許多方劑隱含的規(guī)律性特征與辨證施治內(nèi)涵體現(xiàn)[1]。黃連和黃芩作為黃連解毒湯中的君藥和臣藥是其重要的組成部分，方中黃連與黃芩配伍比例為3∶2。黃連-黃芩屬清熱燥濕配伍的經(jīng)典藥對，兩藥配伍主治上、中二焦，火邪去而熱毒清，均能清熱燥濕、瀉火解毒[2-3]。代謝組學(xué)是對一個生物系統(tǒng)的細(xì)胞在給定時間和條件下所有小分子代謝物質(zhì)的定性定量分析，從而描述生物內(nèi)源性代謝物質(zhì)的整體規(guī)律，并且將在內(nèi)外因素作用下產(chǎn)生的代謝物質(zhì)的動態(tài)變化與病理生理相關(guān)聯(lián)。代謝組學(xué)處于生命信息傳遞的終端，它是能表現(xiàn)出生物體系整體功能或狀態(tài)的最終結(jié)果而拋開體內(nèi)復(fù)雜的生理過程的一種系統(tǒng)生物學(xué)科學(xué)[4-6]。本實驗室前期研究黃連解毒湯在腦缺血模型大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)和藥效學(xué)，探究其在體內(nèi)的分布及代謝特點，尋找中藥復(fù)方中蘊含的潛在規(guī)律和方證對應(yīng)的合理性，結(jié)果黃連解毒湯中有效成分對腦缺血病癥大鼠具有一定的調(diào)節(jié)作用。在此基礎(chǔ)上本實驗以大腦中動脈栓塞（middle cerebral artery occusion，MCAO）模型大鼠為研究對象，采用代謝組學(xué)技術(shù)、模式識別方法并結(jié)合代謝組網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫對大鼠尿液中代謝物進(jìn)行研究，探討正常與模型大鼠其尿液中的內(nèi)源性代謝物的整體變化，分析鑒定潛在生物標(biāo)志物及代謝通路，尋找黃連解毒湯干預(yù)后代謝產(chǎn)物動態(tài)變化規(guī)律及抗腦缺血的生物學(xué)作用機(jī)制。

1 材料

1.1 儀器與試劑 美國Waters UPLC AcquityTM系統(tǒng)；BEH C₁₈色譜柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）；SynaptTMQ -TOF質(zhì)譜儀，配有Lock-spray接口，ESI離子源和MassLynx 4.1質(zhì)譜工作站軟件。 抗酸型冷凍離心濃縮儀（Labconco）；臺式冷凍離心機(jī)（Thermo Fisher）；真空冷凍干燥儀（Biocool）。純凈水由南京易普易達(dá)純水儀制得。乙腈（色譜純，Merck公司）；甲酸（色譜純，Merck公司）；水合氯醛（成都科龍化工試劑廠，批號20160225）；疊氮鈉（NaN₃，分析純，天津市福晨化學(xué)試劑廠）；TTC染色液（2%，南京邁博生物科技有限公司）。其他試劑均為分析純。黃連、黃芩及黃連-黃芩藥對水提液由實驗室自制。

1.2 動物 SPF級SD大鼠35只，雄性，體重（250±20） g，購自浙江省實驗動物中心，合格證號SCXK（浙）2014-0001。大鼠分籠飼養(yǎng)，飼養(yǎng)環(huán)境溫度20～25 ℃，相對濕度55%～65%。

1.3 藥材及樣本制備 黃連（批號151203）、黃芩（批號151202），均購于安徽福春堂中藥飲片有限公司，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)吳啟南教授鑒定，符合2015年版《中國藥典》規(guī)定。稱取黃連、黃芩飲片各500 g，按黃連解毒湯中黃連與黃芩的比例（3∶2）稱取藥材飲片，混合，共500 g，分別水煎煮2次，第1次10倍量水，煎煮1.5 h；第2次8倍量水，煎煮1 h；水提取液合并、濃縮、真空冷凍干燥，得3組凍干粉，含生藥分別為3.97，3.85，4.31 g·g^-1。精密稱取一定量提取物置研缽中，加入少許0.5%的羧甲基纖維鈉（CMC-Na）液，研磨后按照生藥量濃度加0.5% CMC-Na液制成混懸液。

2 方法

2.1 動物模型復(fù)制 大鼠MCAO模型復(fù)制方法：大鼠10%水合氯醛腹腔注射（1 g·kg^-1）麻醉，躺位固定，用碘伏消毒皮膚，在頸部偏右方切口，鈍性分離，分離右頸總動脈（CCA）、頸內(nèi)動脈（ICA）及頸外動脈（ECA）并掛線備用，結(jié)扎ECA，用動脈夾夾閉ICA遠(yuǎn)心端和CCA近心端后，迅速于分叉處下ECA上做一切口，從切口處插入MCAO線栓（直徑為0.125 mm，距球端18 mm處作標(biāo)記）。線插入ICA后，于入口處稍稍結(jié)扎線栓與入口處ICA段，至線栓插入深度為（18±0.5） mm左右。再次結(jié)扎入口處，線栓外留約1 cm，縫合皮膚。2 h后輕輕提拉所留線頭至有阻力，實現(xiàn)大腦中動脈再灌，則造模完成。動物入選的標(biāo)準(zhǔn)（按照Zea Longa 5級評分法取評分為2，3，4分的動物）：動物于缺血2 h后出現(xiàn)對側(cè)前肢倦曲、行走轉(zhuǎn)圈或行走向?qū)?cè)倒體征則納入，動物無此體征或于2 h后仍不清醒者棄去。

2.2 動物分組和給藥 實驗動物按體重隨機(jī)分為5組，每組7只，分為對照組（Sham）、模型組（MCAO）、黃連組（HL）、黃芩組（HQ）和黃連-黃芩藥對組（LQ）。按照實驗室前期做黃連解毒湯組給藥劑量為生藥20 g·kg^-1·d^-1換算相應(yīng)劑量，灌胃體積2 mL· 100 g^-1。對照組和模型組灌胃給藥等劑量的生理鹽水，連續(xù)灌胃7 d。

2.3 TTC染色 將各組大鼠生理鹽水、多聚甲醛灌注后取腦，-20 ℃速凍20 min后切片，37 ℃恒溫TTC染色。

2.4 尿液樣品的采集和處理 各組大鼠均于末次給藥后連同正常組大鼠禁食不禁水，收集尿液12 h，接尿管中加1 mL 1%NaN₃為抑菌劑和防腐劑，收集的尿液于4 ℃離心機(jī)3 000 r·min^-1離心10 min后，取2 mL上清液-80 ℃冷凍保存至分析。分析前將尿液樣品于室溫解凍，解凍后精密吸取尿液200 μL，加入甲醇600 μL，渦旋振蕩2 min，于4 ℃，13 000 r·min^-1離心10 min，取上清液，37 ℃離心濃縮至干，殘渣用200 μL 70%乙腈水溶液復(fù)溶，渦旋振蕩2 min，于4 ℃，13 000 r ·min^-1離心10 min，取上清液用于進(jìn)樣檢測。

2.5 色譜和質(zhì)譜條件 色譜條件：流動相A為0.1%甲酸水溶液，流動相B為乙腈。梯度洗脫： 0～1 min，95%A；1～13 min，95%～5%A；13～14 min，5%A；14～15 min，5%～95%A。柱溫35 ℃，流速0.4 mL·min^-1，進(jìn)樣量2 μL。質(zhì)譜條件： 毛細(xì)管電壓3.0 kV，離子源溫度120 ℃，脫溶劑氣溫度350 ℃，錐孔電壓45 V，離子能量1.0 V，錐孔氣流量50 L·h^-1，脫溶劑流量600 L·h^-1，碰撞能量4 eV，掃描時間為0.5 s，間隔掃描時間為0.02 s。

2.6 代謝組學(xué)數(shù)據(jù)處理與分析 樣品經(jīng)過Waters公司的UPLC-Q-TOF/MS分析得到代謝指紋輪廓圖譜。質(zhì)譜數(shù)據(jù)采用Waters公司的MassLynx軟件v4.1進(jìn)行總離子流提取、峰對齊及歸一化處理。主要參數(shù)包括：保留時間0～15 min；質(zhì)荷比m/z 100～1 000（±0.01），峰強(qiáng)度閾值50，質(zhì)量窗口0.05 Da，保留時間窗口0.20 min，自動檢測5%峰高及噪聲。利用MarkerLynx軟件對峰面積、樣品名稱和離子強(qiáng)度組成的數(shù)據(jù)表進(jìn)行分析。在進(jìn)行多元變量分析前要對每個檢測峰的離子強(qiáng)度進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，即對原始變量進(jìn)行Pareto標(biāo)尺化處理。將處理后的數(shù)據(jù)按照“一種用于代謝組學(xué)數(shù)據(jù)處理中消除外源性成分干擾的分析方法”[7-8]，然后將剔除后的數(shù)據(jù)導(dǎo)入EZinfo 2.0進(jìn)行有監(jiān)督的偏最小二乘判別法（PLS-DA）進(jìn)行分析。使用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，2組間比較采用t檢驗，檢驗標(biāo)志性代謝物組間差異的顯著性，顯著性標(biāo)準(zhǔn)界值定為P<0.05。

3 結(jié)果

3.1 TTC染色 結(jié)果顯示Sham組兩側(cè)大腦半球呈均勻一致紅色，MCAO組見右側(cè)紋狀體及額頂葉皮質(zhì)失染區(qū)呈白色，而且邊緣清晰；HL，HQ，LQ組失染區(qū)范圍均小于MCAO組，而且緣清晰，見圖1。

3.2 大鼠尿液樣品代謝指紋譜的建立和多變量數(shù)據(jù)分析 采用UPLC-Q-TOF/MS在正負(fù)離子模式下進(jìn)行尿液樣品的代謝分析，正負(fù)離子模式下對照組大鼠、腦缺血模型組大鼠、黃連組、黃芩組和黃連-黃芩藥對組大鼠的典型總離子流圖見圖2。為了考察腦缺血模型大鼠體內(nèi)代謝物的整體變化，采用PCA方法對正常組和模型組大鼠尿液代謝物譜數(shù)據(jù)進(jìn)行模式識別，得到樣品分布圖，它能夠反映樣品之間的相似性、差異程度，圖譜差異小的樣品在散點圖中的位置相互靠近；反之，差異較大的樣品距離較遠(yuǎn)。所得的PLS-DA模型的R2Y和Q2分別為0.935和0.627，表明該模型是可靠的。A1，A2為模型組小鼠尿液代謝譜的分類，可以看出，在正、負(fù)離子模式下，腦缺血模型組與對照組得到明顯區(qū)分，說明模型復(fù)制成功，與正常組相比腦缺血模型大鼠機(jī)體內(nèi)發(fā)生代謝異常，見圖3。

3.3 潛在生物標(biāo)志物的鑒定通過 PLS-DA 分析，正常組、腦缺血模型組大鼠、黃連組、黃芩組和黃連-黃芩藥對組的PLS-DA載荷圖中的每一個點代表一個變量，變量對分類的重要程度（variable importance in the projection，VIP）由其值的大小來衡量，并依據(jù)VIP對變量進(jìn)行篩選。VIP>1且具有統(tǒng)計學(xué)意義的變量被認(rèn)為對模型有顯著貢獻(xiàn)。距離中心越遠(yuǎn)的點對差異的貢獻(xiàn)度越大，越有可能是潛在的特征代謝物。

將潛在的生物標(biāo)志物根據(jù)其質(zhì)荷比及其串聯(lián)質(zhì)譜數(shù)據(jù)，在HMDB（http：//www.hmdb.ca/） 和KEGG （http：//www.genome.jp/kegg/） 公共數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行檢索和確認(rèn)[8]，并與文獻(xiàn)進(jìn)行比較，共鑒定出 20個潛在的生物標(biāo)志物，其質(zhì)譜數(shù)據(jù)信息以及在對照組與腦缺血模型組大鼠尿液中的變化見表1。與正常組比較，模型組大鼠尿液中有變化的代謝物包括：L-乳酸、L-蘇氨酸、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-精氨酸、L-犬尿氨酸、L-脯氨酸、牛磺酸、軟脂酸、褪黑素、肌苷呈上調(diào)趨勢，L-天冬酰胺、同型半胱氨酸、檸檬酸、硬脂酸、花生四烯酸、煙酰胺呈下降趨勢。在給予黃連、黃芩及黃連-黃芩藥對后，均有不同程度的回調(diào)現(xiàn)象，見圖4，5。

3.4 代謝通路分析與干預(yù)機(jī)制探討 將表1中的生物標(biāo)志物輸入MetPA（http：//www.metaboanalyst.ca/）數(shù)據(jù)庫中，構(gòu)建代謝通路。大腦中動脈栓塞（MCAO）所致腦缺血模型大鼠體內(nèi)的代謝紊亂主要與8條代謝途徑相關(guān)，見圖6。在給予HL，HQ，LQ后，代謝物的含量得到一定程度的回調(diào)，代謝通路的紊亂有所改善，從代謝層面體現(xiàn)HL，HQ，LQ對腦缺血模型有較好的治療作用。鑒定的20個生物標(biāo)志物中，苯丙氨酸參與苯丙氨酸，酪氨酸和色氨酸生物合成和苯丙氨酸代謝，?；撬釁⑴c?；撬岷蛠喤；撬岽x；花生四烯酸參與花生四烯酸代謝；檸檬酸參與乙醛酸和二羧酸代謝，煙酰胺參與煙堿和煙酰胺代謝；精氨酸、脯氨酸參與精氨酸和脯氨酸代謝，犬尿氨酸、褪黑素參與色氨酸代謝。

4 討論

4.1 神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)節(jié) γ-氨基丁酸（GABA）是一種抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，GABA代謝的改變可能是造成腦缺血引起的神經(jīng)元損傷的一個重要因素[9]，在腦缺血損傷早期GABA水平急劇升高，使突觸后神經(jīng)元處于保護(hù)性抑制狀態(tài)，并可通過突觸前抑制作用，減少谷氨酸的釋放協(xié)助Ca²⁺等離子的轉(zhuǎn)運，維持細(xì)胞內(nèi)外滲透壓[10] ，減輕細(xì)胞損傷，增強(qiáng)神經(jīng)元對缺血的耐受性，缺血導(dǎo)致血腦屏障損害，大量GABA進(jìn)入尿液，不能發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用[11]。郭昫等[12]采用此法造模給藥后，測定大鼠丘腦中谷氨酸和γ-氨基丁酸含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，黃連解毒湯藥材總黃酮可以促進(jìn)腦缺血模型大鼠丘腦中谷氨酸和GABA 含量恢復(fù)至正常水平。正常情況下，天冬氨酸 （Asp） 主要存在于神經(jīng)末梢內(nèi)的囊泡內(nèi)，當(dāng)末梢因膜去極化而興奮時被釋放到細(xì)胞間隙[13]。大腦局部缺血后，由于能量缺乏，從細(xì)胞內(nèi)釋放的谷氨酸數(shù)量增加，細(xì)胞外谷氨酸濃度迅速升高[14]。在給與黃連、黃芩、黃連-黃芩藥對干預(yù)后，GABA、天冬氨酸含量下調(diào)，與文獻(xiàn)報道一致。

4.2 氨基酸代謝 同型半胱氨酸是動脈粥樣硬化、血栓栓塞、血管損傷的獨立致病因素，并與腦缺血、冠狀動脈疾病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及阿爾茲海默病等疾病高度相關(guān)[15]。甜菜堿（Met）可作為甲基供體，完成再甲基化的替代過程，在體內(nèi)參與蛋氨酸循環(huán)，同型半胱氨酸含量升高可以在甜菜堿高半胱氨酸甲基

轉(zhuǎn)移酶作用下利用Met提供的一個甲基轉(zhuǎn)化為甲硫氨酸，導(dǎo)致肝代謝異?？赡芤鸶鞣N疾病，如冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、腦部肝部和血管病變[16]。?；撬幔═au）是腦內(nèi)的一種抑制性氨基酸，具神經(jīng)保護(hù)作用，腦缺血損傷時其胞外含量升高[16-17]，它可以調(diào)整腦內(nèi)興奮性氨基酸的含量。龍建飛等[18]采用MCAO模型大鼠為研究對象，結(jié)果表明黃連解毒湯水提取物、總生物堿總黃酮和總環(huán)烯醚萜可通過抑制神經(jīng)元中Caspase-3 活性，保護(hù)缺血半暗帶神經(jīng)元。

4.3 能量代謝 乳酸是厭氧糖酵解的終產(chǎn)物，也是腦缺血/缺氧后，神經(jīng)恢復(fù)有氧能量代謝的重要底物。腦缺血過程中，腦組織不能進(jìn)行正常的有氧代謝，有氧呼吸受到抑制，能量代謝紊亂，無氧酵解加重，葡萄糖通過無氧酵解的方式產(chǎn)生少量ATP，同時，丙酮酸經(jīng)乳酸脫氫酶（LDH）催化還原生成乳酸，乳酸含量上升[19-20]。張明發(fā)[21]發(fā)現(xiàn)黃連解毒湯中主要成分小檗堿可能有抗自由基作用，能增加整體小鼠耐缺氧能力，降低氧耗，并通過抑制腺許酸環(huán)化酶，對抗缺氧時兒茶酚胺釋放過多所造成的組織耗氧增加。因而推測小檗堿通過抗缺氧，降低腦組織耗氧等途徑抗氧自由基損傷。三羧酸循環(huán)（TCA）開端是在檸檬酸合成酶的催化下，草酰乙酸和乙酰輔酶A進(jìn)行不可逆反應(yīng)生成檸檬酸。三羧酸循環(huán)是細(xì)胞線粒體中重要的能量代謝途徑，大腦缺血時，能量代謝失衡，三羧酸循環(huán)的相關(guān)代謝物發(fā)生應(yīng)激性改變[22]。王月華等[23]觀察小續(xù)命湯有效成分組對慢性缺血大鼠腦線粒體的作用。結(jié)果表明小續(xù)命湯有效成分組能夠減輕缺血缺氧導(dǎo)致的線粒體功能異常及其結(jié)構(gòu)損傷，降低缺血缺氧損害后導(dǎo)致的線粒體活性氧產(chǎn)生和凋亡。

4.4 脂質(zhì)代謝 花生四烯酸（AA）是一種重要的人體必須脂肪酸，是人體前列腺素合成的重要前體物質(zhì)，具有舒張血管、激活和抑制血小板聚集、參與造血和免疫調(diào)節(jié)[24]、誘導(dǎo)和抵抗致炎作用、調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌和促進(jìn)細(xì)胞分裂等[25] 。近年來研究表明，在病理狀態(tài)下，花生四烯酸副產(chǎn)品可以阻塞星形膠質(zhì)細(xì)胞的縫隙連接通道，進(jìn)而增加神經(jīng)元對氧化損傷的易感性。

4.5 激素調(diào)節(jié) 褪黑素（M）T是一種主要由松果體分泌的神經(jīng)分泌激素，是高效的自由基清除劑和抗氧化劑[26]，并具有一定的抗炎作用，能夠修復(fù)腦缺血引起的DNA損傷，減輕腦缺血時的微血管損害，保護(hù)線粒體功能及阻止細(xì)胞能量耗竭等。Stefanova N A等[27]發(fā)現(xiàn)長期服用褪黑素可顯著減輕散發(fā)性阿爾茨海默病患者大腦中可能是神經(jīng)元突觸發(fā)生病變產(chǎn)生毒性Aβ-淀粉樣蛋白積累的破壞作用。

5 結(jié)論

本研究采用代謝組學(xué)方法揭示了大腦中動脈阻塞所致的腦缺血模型大鼠與空白大鼠的內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的差異，并探討了黃連-黃芩干預(yù)的作用機(jī)制。給予黃連-黃芩，對其內(nèi)源性代謝產(chǎn)物具有較明顯的調(diào)節(jié)作用，提示黃連、黃芩及黃連-黃芩藥對可能能夠一定程度的調(diào)整腦缺血所致的神經(jīng)遞質(zhì)紊亂（天冬氨酸含量下降，γ-氨基丁酸含量升高）、能量代謝不足（葡萄糖、檸檬酸含量下降，乳酸含量上升）、氨基酸代謝異常（同型半胱氨酸含量下降，甜菜堿、?；撬岷可撸?、脂質(zhì)代謝異常（花生四烯酸含量下降）等。其可能涉及的作用機(jī)制主要有興奮性氨基酸毒性；細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)（包括Ca²⁺超載和NO損傷）；線粒體損傷；氧自由基大量生成；星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)等?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明黃連解毒湯臨床研究多集中在腦血管病變和精神系統(tǒng)疾病領(lǐng)域，臨床上可用于抗腦缺血、抗氧化、降壓等疾病。此外，代謝組學(xué)為模型動物體內(nèi)代謝、循環(huán)狀態(tài)的變化及藥物可能的作用機(jī)制研究提供指導(dǎo)，并且它所反映的整體觀念與中藥整體思想和復(fù)雜體系的特點相吻合，對中藥作用機(jī)制、方證對應(yīng)依據(jù)、配伍規(guī)律等方面的研究提供技術(shù)支撐。

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[責(zé)任編輯 張燕]