替米考星自微乳口服液的制備及性狀研究

岳耀輝 朱術(shù)會 王加才 孫新堂 宿志民 方文軍 （山東省濰坊市宇洋藥業(yè)有限公司 山東 高密 山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院 山東 濰坊）

替米考星自微乳口服液的制備及性狀研究

岳耀輝①朱術(shù)會②王加才②孫新堂②宿志民②方文軍①（①山東省濰坊市宇洋藥業(yè)有限公司 山東 高密 ②山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院 山東 濰坊）

本研究依據(jù)自微乳工藝制備了替米考星自微乳口服液，并對其基本性狀進行了考察，實驗發(fā)現(xiàn)本研究制備的替米考星自微乳為淡黃色透明粘稠液體，室溫放置90d后外觀無變化，可以用水任意稀釋，無沉淀析出；適口性實驗發(fā)現(xiàn)，該制劑的適口性要強于市售替米考星普通粉劑。（1）替米考星[1](Tilmicosin) 是20世紀80年代開發(fā)的是一種由泰樂菌素半合成的大環(huán)內(nèi)醋類畜禽專用抗生素[2]，性狀為白色或類白色粉未，味苦，在甲醇、乙腈中易溶，在乙醇、丙二醇中溶解，在水中不溶。化學(xué)名為4A-O-脫(2，6-二脫氧-3-C-甲基-L-核糖-吡喃己基)-20-脫氧-20-(3,5-二甲基-1-哌啶基)-[20(順式：反式)]泰樂菌素(如圖1所示)，分子式為C46H80N2O13，分子量是869.13。（2）替米考星內(nèi)服和皮下注射吸收快，但不完全，表觀分布容積大，肺組織中的藥物濃度高。具有良好的組織穿透力，能迅速而完全地從血液進入乳房，乳中藥物濃度較高，維持時間長，乳中半衰期長達1～2d。因此，替米考星特殊的藥動學(xué)特性使其適合于家畜肺炎、乳房炎等感染性疾病的治療。替米考星不適合于靜注，靜脈注射可引起動物死亡，牛一次靜注5mg/kg即可致死，對豬、馬和靈長類也易致死，其毒作用的靶器官是心臟，可引起負性心力效應(yīng)。因此，獸醫(yī)臨床應(yīng)用當(dāng)中替米考星主要使用預(yù)混劑、可溶性粉和口服液等劑型[3]。（3）替米考星適口性比較差，味道苦，對胃黏膜具有刺激性，動物厭食，影響畜禽的采食。市售常規(guī)的預(yù)混劑和粉劑，難以有效的掩蓋本藥的不良氣味，替米考星適口性差的難題一直沒有妥善解決[4,5]；另外該藥物水溶性較差，分散性較低，群體直接混飼或飲水給藥存在一定的困難，這嚴重制約了替米考星在畜禽疾病預(yù)防和治療上的應(yīng)用。有研究報道制備了替米考星分子微囊，可有效掩味，對解決替米考星本身的苦味問題有一定解決，但是該工藝存在技術(shù)要求較高，只能混飼給藥，水溶性沒有解決的問題。因此，研制一種水溶性好，適口性佳，適合于群體給藥的替米考星制劑是十分迫切和必要的。（4）自微乳給藥系統(tǒng)[6,7](self-microemulsifying drug delivery system，SMEDDS)是由油、表面活性劑和助表面活性劑或少量水組成的均一透明溶液，可作為疏水性、難吸收或易水解藥物的載體。通過將藥物包裹在油滴中，藥物的不良氣味能夠有效掩蓋，兌水或口服后遇體液在胃腸蠕動下自發(fā)分散形成 O/W 型微乳[8]。該系統(tǒng)可通過提高藥物的溶解度，降低表面張力，形成易通過胃、腸壁的水化層，增加對腸道上皮細胞的穿透性等優(yōu)勢顯著提高藥物生物利用度[9,10]。由于自微乳的制備一些難溶藥物或苦味較大的藥物的水溶性，適口性，生物利用度等方面都得到了較大的改善，查閱相關(guān)文獻關(guān)于替米考星自微乳的報道很少，獸醫(yī)臨床使用更是鮮有。本研究將替米考星制備成自微乳制劑，以有效掩蓋替米考星的不良氣味，增加畜禽的適口性，同時增加藥物在水中的溶解性，以拓展替米考星臨床使用的范圍。

圖1 替米考星分子結(jié)構(gòu)

1 材料與方法

1.1 材料

（1）基本材料：替米考星原料藥(山東天宇生物科技有限公司贈送)、電子天平(上海永琪儀器設(shè)備有限公司)、MYP11-2數(shù)顯恒溫磁力攪拌器(上海華巖儀器設(shè)備有限公司)、萬用電烤爐(上海永琪儀器設(shè)備有限公司)、酸度計(PHS-3C，上海越磁電子科技有限公司)、高壓勻質(zhì)機(上海生化儀器有限公司)、膠體磨(濰坊生化儀器有限公司)、高速離心機(江蘇海門市其林貝爾儀器制造有限公司)。（2）主要試劑：乙酸乙酯AR(國藥集團化學(xué)試劑有限公司)、肉豆寇酸異丙酯(化學(xué)純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司)、吐溫-80(tween-80，AR，天津大茂化學(xué)試劑廠)、聚氧乙烯(40)氫化蓖麻油(RH240，AR，國藥集團化學(xué)試劑有限公司)、丙二醇、無水乙醇(AR，國藥集團化學(xué)試劑有限公司)、PVP—K30(博愛新開源制藥股份有限公司)、PBS(pH=7.0)、磷酸(AR，天津大茂化學(xué)試劑有限公司)。其他藥品、試刺均為國產(chǎn)分析純。

1.2 制備方法 制備過程。制備油相：將替米考星投至磁力攪拌器中，加入乙酸乙酯、丙二醇及吐溫-80乳化劑，混合加熱至溶解，維持溫度50～60℃，備用。制備水相：將聚氧乙烯(40)氫化蓖麻油、無水乙醇和水加入到另一磁力攪拌罐中，攪拌混合并加熱，維持溫度50～60℃，備用；將溶解后的水相加入到油相容器中，攪拌至乳液透明，經(jīng)過勻質(zhì)機循環(huán)10min，冷卻至常溫，即獲得替米考星自微乳。

2 替米考星自微乳性狀分析

2.1 粒徑分析 取替米考星自微乳加蒸餾水稀釋，待自乳化完全后，取適量滴在銅網(wǎng)上，用的磷鎢酸負染色，驚干后電鏡觀察見圖，并用粒徑測定儀測定微乳的粒徑和電位。

2.2 穩(wěn)定性性考察 取替米考星自微乳常溫放置6個月，分別于第1、2、3、4、5、6個月取樣，考察樣品的穩(wěn)定性。取3組試樣，分別放置于4℃、40℃和60℃的環(huán)境中，分別于1h、2h、3h、4h后取樣，觀察樣品的穩(wěn)定性。

2.3 強光照射考察 取本實驗制備的樣品放置于25 ℃、光照4500土500LX條件下，分別與第1、3、5天取樣考察樣品穩(wěn)定性。

2.4 水溶性及水溶性考察 取本實驗制備的替米考星自微乳分別進行10倍、100倍、1000倍和10000倍稀釋，觀察有無沉淀和破乳現(xiàn)象產(chǎn)生。同時將稀釋好的替米考星自微乳以12000r/min離心20min，觀察乳液是否分層或是否變渾濁。

2.5 適口性考察 實驗取20日齡、體重650g左右的健康肉雞300只，平均分為3組，每組100只，3組實驗雞給予等量的水，其中1～2組水中分別給予相同劑量的本實驗制備的替米考星自微乳、市售替米考星口服液；第3組作為對照組，不給予藥物。3組實驗雞給予空白全價飼料，自由采食、自由飲水，12h后計算3組雞的飲水量，實驗連續(xù)4d，同時計算增重量。

3 結(jié)果分析

圖2 替米考星自微乳透射電鏡照片

3.1 替米考星自微乳性質(zhì)考察結(jié)果 （1）取替米考星自微乳加蒸餾水稀釋50倍，待自乳化完全后，取0.5ml滴在銅網(wǎng)上，用磷鎢酸負染色，自然驚干后電鏡觀察見圖2所示，本實驗制備出的替米考星自微乳在透射電鏡下觀察其液滴呈球形，用粒徑分析儀測定其粒徑為15～28nm之間，符合納米乳的范疇[11]。（2）取替米考星自微乳常溫放置6個月，分別于第1、2、3、4、5、6個月取樣，考察樣品的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示液體仍然為透明的黃色液體，無沉淀和絮狀物質(zhì)，電鏡觀察液滴分布均勻，無團聚現(xiàn)象。在4℃、40℃和60℃放置4h內(nèi)，替米考星自微乳仍然保持澄明的黃色液體，無渾濁和沉淀產(chǎn)生，這說明本研究制備的替米考星自微乳性質(zhì)較穩(wěn)定，在60℃的高溫和4℃的低溫4h無明顯變化。（3）考察強光照射對本實驗替米考星自微乳的影響，實驗設(shè)置取本實驗制備的樣品放置于25℃、光照4500土500LX條件下，分別與第1、3、5天取樣考察樣品穩(wěn)定性。結(jié)果顯示本實驗制備的替米考星自微乳強光照射后第3天無明顯變化，第5天出現(xiàn)少量沉淀物，這可能與替米考星藥物本身對光較敏感的原因所致，建議本制劑避光室溫放置。（4）制劑的水溶性與群體給藥有一定的相關(guān)，水溶性較好可以通過飲水給藥，可以達到群體給藥的均一性，也可以節(jié)約一定的勞動成本，因此對替米考星自微乳進行了水稀釋考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)替米考星自微乳分別10倍、100倍、1000倍和10000倍稀釋，均沒有沉淀和破乳現(xiàn)象產(chǎn)生，這說明自微乳在與水的接觸瞬間成為了水包油型的納米乳制劑。

3.2 適口性實驗結(jié)果 替米考星苦味較大，適口性是臨床應(yīng)用的一大困難，微乳制劑可以有效包裹藥物，掩蓋不良氣味，增進適口性，本實驗制備的替米考星自微乳適口性結(jié)果如附表所示，從結(jié)果來看，使用本實驗制備的替米考星自微乳的雞飲水量與對照組無明顯差異，而使用市售替米考星口服液的實驗雞飲水量明顯低于第1組和對照組，這說明本實驗制備的替米考星自微乳可有效掩蓋主藥的不良氣味，有效的改善了適口性。

附表 替米考星自微乳適口性實驗結(jié)果 (ml、g)

4 結(jié)論

本研究采用藥物乳化工藝法制備了替米考星自微乳，納米乳經(jīng)過電鏡粒徑分析顯示，納米乳粒徑在15～28nm之間，符合納米乳的范疇，經(jīng)過稀釋和穩(wěn)定性考察顯示本研究制備的替米考星納米乳能夠用水稀釋，稀釋后迅速成為水包油型納米乳，長時間放置無破乳、沉淀和藥物析出現(xiàn)象，強光照射后發(fā)現(xiàn)有藥物析出現(xiàn)象，因此本制劑應(yīng)避光保存。臨床實驗證明本研究制備的替米考星自微乳適口性要好于市售普通替米考星制劑，這說明替米考星原藥被制備成自微乳后不良氣味被很好的掩蓋，解決了替米考星適口性問題，這為拓展替米考星臨床使用提供了新的劑型。

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