不同濃度酒精對(duì)小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力及海馬GFAP/NEUN的影響

夏天 袁鳳娟 靳興越 陳惠東 江潤益 段盛順 張家興 張然

不同濃度酒精對(duì)小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力及海馬GFAP/NEUN的影響

夏天 袁鳳娟 靳興越 陳惠東 江潤益 段盛順 張家興 張然

目的探究長期飲酒對(duì)小鼠行為學(xué)能力以及空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響。方法雄性KM小鼠45只，隨機(jī)分成對(duì)照組（Con），低劑量組（Low）和高劑量組（High）。分別每天對(duì)照組0.10 ml/10 g自來水，低劑量組0.05 ml/10 g的56度紅星二鍋頭，高劑量組0.10 ml/10 g的56度紅星二鍋頭進(jìn)行灌胃。連續(xù)灌胃13 d后進(jìn)行衣架實(shí)驗(yàn)測行為學(xué)能力，最后取海馬做免疫熒光染色觀察海馬神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞。結(jié)果衣架實(shí)驗(yàn)得分，自主活動(dòng)數(shù)值總體顯示Low組高于其他兩組，而且與Con組差異顯著；免疫熒光結(jié)果顯示無論是CA3區(qū)，還是DG區(qū)，海馬的星形膠質(zhì)細(xì)胞含量與神經(jīng)元細(xì)胞含量比值上Con，Low，High三組依次升高，而且Con，High之間對(duì)比，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論長期大量飲酒會(huì)損傷學(xué)習(xí)記憶能力，但適量飲酒可以促進(jìn)機(jī)體興奮性和活動(dòng)度。

紅星二鍋頭；飲酒；GFAP/NEUN；海馬

酩酊（醉）與血液中的酒精濃度成正比關(guān)系[1]。蔣慧等人所做的實(shí)驗(yàn)中，空間搜索實(shí)驗(yàn)中酒精組大鼠原平臺(tái)所在象限的搜索時(shí)間高于對(duì)照組[2-3]。李子朋在急性酒精暴露腦功能改變的靜息態(tài)fMRI研究中，表示酒精刺激會(huì)使腦部分區(qū)域功能增強(qiáng)[4]。

1 資料與方法

1.1 資料

KM小鼠45只，雄性，體質(zhì)量20～35 g。

1.2 實(shí)驗(yàn)器材與藥品

器材：天平，1 ml注射器配灌胃針頭×3，小燒杯，塑料箱與玩具（新奇實(shí)驗(yàn)用），衣架與橫桿（衣架實(shí)驗(yàn)用），自主實(shí)驗(yàn)記錄儀，計(jì)時(shí)器，冰凍切片機(jī)，包埋盒，Olympus IX51倒置熒光顯微鏡，玻片，鑷子等。藥品：56度紅星二鍋頭，自來水，O.C.T.包埋液，免疫熒光抗體（NEUN，GFAP），10×PBS，4%多聚甲醛等。

1.3 方法

1.3.1 建立模型 取45只健康KM小鼠（雄性，體質(zhì)量相近）。隨機(jī)分為三組，每組15只。第一組為對(duì)照組，每天以0.010 ml/g的水灌胃；第二組為低劑量組，每天以0.005 ml/g的56度紅星二鍋頭灌胃；第三組為高劑量組，每天以0.010 ml/g的56度紅星二鍋頭灌胃。連續(xù)灌胃13 d，1次/d（同一時(shí)刻），每2 d測1次并記錄所有的小鼠的體重變化。

1.3.2 測試 （1）衣架實(shí)驗(yàn)：記錄項(xiàng)目為分?jǐn)?shù)、掉下時(shí)間、爬到水平部末端的時(shí)間。（2）新奇實(shí)驗(yàn)[5]：分辨指數(shù)計(jì)算公式為：DI=N/（N + F）×100 %，式中N為在探索新物體所用的時(shí)間，F(xiàn)為探索舊物體所用的時(shí)間。（3）取海馬做冰凍切片；免疫熒光染色觀察分析。

1.4 圖像分析

每只小鼠取1張免疫熒光染色玻片，每張玻片上列4張切片并取其中2張切片進(jìn)行拍片，在Olympus IX51倒置熒光顯微鏡下觀察海馬CA1，CA3，DG區(qū)免疫反應(yīng)結(jié)果并攝像，用Imagej圖像分析軟件測定免疫反應(yīng)陽性產(chǎn)物的平均灰度值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次研究用Graphpad Prism5統(tǒng)計(jì)軟件分析，樣本均數(shù)比較用Graphpad分析和檢驗(yàn)，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 衣架實(shí)驗(yàn)結(jié)果

對(duì)照組衣架實(shí)驗(yàn)結(jié)果與低劑量組相比，P=0.010 1，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；對(duì)照組與高劑量組（P=0.089 8），低劑量組與高劑量組對(duì)比（P=0.244 6），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 新奇實(shí)驗(yàn)結(jié)果

低劑量組與高劑量組在探索時(shí)間與探索次數(shù)上均少于對(duì)照組，且高劑量組最低。Con和High組P=0.024 0，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Con和Low組P=0.017 9，Con和High組P=0.017 1，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3 免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果

CA3區(qū)和DG區(qū)的GFAP/NEUN，低劑量組略低于高劑量組且兩組都高于對(duì)照組。且DG與CA3區(qū)域的Con，High組的P值分別為0.012 3和0.013 3，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖1。

圖1 CA3區(qū)熒光染色結(jié)果

3 討論

海馬主要與學(xué)習(xí)記憶有關(guān)，CA1，CA3和DG是海馬三個(gè)重要的區(qū)域，所以通過這三個(gè)區(qū)域的不同，觀察酒精是否影響小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力。而GFAP/NEUN與神經(jīng)元損傷呈正相關(guān)[6-8]。神經(jīng)元數(shù)目的多少可影響小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力。而新奇實(shí)驗(yàn)是通過宏觀方面觀察小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶。兩者可相互論證，互為論據(jù)。

低劑量組，高劑量組均有上升趨勢說明飲酒能使小鼠興奮，使其自主活動(dòng)性增強(qiáng)，但高劑量組的興奮程度會(huì)比低劑量組弱，可能是因?yàn)檫^高劑量的酒精劑量會(huì)反過來抑制大腦興奮性，這需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。衣架實(shí)驗(yàn)說明適量飲酒對(duì)小鼠的平衡能力有提高，但當(dāng)飲酒超過一定量時(shí)則可影響小鼠的平衡能力。新奇實(shí)驗(yàn)說明飲酒可影響小鼠的學(xué)習(xí)記憶功能，或者與大腦神經(jīng)突觸減少，且影響程度與小鼠飲酒的酒精劑量成正相關(guān)。另外免疫熒光結(jié)果分析，低劑量組略低于高劑量組且兩組都明顯高于對(duì)照組。且DG與CA3區(qū)域的Con，High組的P值分析分別為0.0123和0.0133，均小于0.05，有明顯差異。故推測飲酒可以使小鼠大腦神經(jīng)元減少，從而影響空間學(xué)習(xí)記憶能力的降低。

綜上所述，長期大量飲酒會(huì)損傷平衡能力和學(xué)習(xí)記憶能力，適量飲酒可以促進(jìn)機(jī)體活動(dòng)能力和興奮性。

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醫(yī)學(xué)論著的寫作要求

論著是醫(yī)學(xué)論文體裁中常見的一種表現(xiàn)形式，具有特定的概念。它是作者將自己的科研、臨床、教學(xué)的成果、經(jīng)驗(yàn)、體會(huì)，以嚴(yán)密的邏輯論證、規(guī)范形成的文字作品，是醫(yī)學(xué)論文中最具典型性和代表性的文體。醫(yī)學(xué)論著應(yīng)具有四大特點(diǎn)：

一、在寫作的形式上有比較規(guī)范的要求，包括文題、作者姓名、作者單位、屬地、郵編，符合問題內(nèi)容要求的中文摘要、英文摘要、關(guān)鍵詞（3～8個(gè)）、前言（引言）、資料（材料）與方法、結(jié)果、討論（體會(huì)）和參考文獻(xiàn)等各項(xiàng)內(nèi)容（論著字?jǐn)?shù)應(yīng)在2500～3000字）。

二、醫(yī)學(xué)論著是作者從自己已占有的基本素材（第一性資料）出發(fā)，經(jīng)過科學(xué)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)卣?、加工、分析、論證，得出論點(diǎn)并形成規(guī)范性的文字作品。

三、醫(yī)學(xué)論著所表達(dá)的結(jié)論比較明確、可信，論文質(zhì)量與學(xué)術(shù)價(jià)值較高。

四、醫(yī)學(xué)論著應(yīng)為一次性文獻(xiàn)（含循證醫(yī)學(xué)的系統(tǒng)評(píng)價(jià)）。

E ff ects of Di ff erent Concentrations of Alcohol On Spatial Learning and Memory Ability and Hippocampal GFAP/NEUN in Mice

XIA Tian YUAN Fengjuan JIN Xingyue CHEN Huidong JIANG Runyi DUAN Shengshun ZHANG Jiaxing ZHANG Ran Basical Medicine Department of Xiamen University Medical School, Xiamen Fujian 361000, China

ObjectiveTo investigated the effects of long-term alcohol drinking on the ability of learning and memory in mice.Methods45 male KM mice were randomly divided into control group (Con), low dose group (Low) and high dose group (High). The control group were daily 0.10 ml/10 g tap water, low dose group 0.05 ml/10 g, 56 degree star erguotou, high dose group 0.10 ml/10 g, 56 degree star Erguotou by intragastric administration. After 13 days of continuous feeding, the experiment was conducted to test the behavior of the horse's tail, and the hippocampus was observed by immuno fl uorescence staining.ResultsThe hanger score, numerical display Low overall locomotor activity was higher than the other two groups, and group Con; immuno fl uorescence results showed that both the CA3 region or DG region, astrocytes and neurons of hippocampus content ratio on Con, Low, High three group were significantly increased, and Con, High had significant difference.ConclusionA large number of long-term drinking will damage the ability of learning and memory, but moderate alcohol consumption can promote the body excitability and activity.

red star erguotou; alcohol; GFAP/NEUN; hippocampus

R-33

A

1674-9308（2017）10-0194-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2017.10.0108

廈門大學(xué)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部，福建 廈門 361000

張然