豬籠草組織培養(yǎng)

廖偉+王勝男+劉勤云

[摘 要] 本實(shí)驗選用攀枝花常見的豬籠草幼嫩莖和幼嫩葉柄為外植體進(jìn)行組織擴(kuò)繁研究，探究豬籠草組織培養(yǎng)各階段的理想培養(yǎng)基成分。結(jié)果表明，豬籠草在1/2MS+ 6-BA1.0mg/L +NAA0.1mg/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)2-3周生長的幼芽最多，效果最好。以1/2MS+ 6-BA2.2mg/L +NAA0.1mg/L培養(yǎng)基為增殖培養(yǎng)基，其增殖率最高。而理想的生根培養(yǎng)基為1/4MS+ 6-BA0.1mg/L +NAA0.5mg/L，培養(yǎng)3-4周后生根率能達(dá)到94%。

[關(guān)鍵詞] 豬籠草，培養(yǎng)基，細(xì)胞分裂素，萘乙酸

[中圖分類號] S682 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1003-1650（2017）05-0061-02

豬籠草是多年生草本食蟲植物，又名食蟲草，屬于豬籠草科（Nepenthaceae）豬籠草屬（Nepenthes）。有1個屬，85個種[1]，起源于亞洲東南部、馬達(dá)加斯加島及澳大利亞.其中大多數(shù)的種分布于蘇門答臘島和婆羅洲[2]，屬于熱帶食蟲植物，其擁有一個獨(dú)特的吸取營養(yǎng)的器官——捕蟲籠，捕蟲籠呈圓筒形，下半部稍膨大，籠口上具有蓋子，因其形狀像豬籠而得名。

豬籠草葉片的構(gòu)造比較復(fù)雜，分為葉身，卷須和葉柄。其卷須尾部擴(kuò)大并向上反卷形成瓶狀的捕蟲籠，可捕食幼小的昆蟲。豬籠草的花序為總狀，開有紫色或綠色小花，捕食昆蟲的工具是葉頂?shù)钠繝铙w。瓶狀體的瓶蓋復(fù)面能分秘香味，引誘昆蟲。利用光滑的瓶口，使昆蟲滑落瓶狀內(nèi)，昆蟲被瓶底分泌的液體淹死，并被分解為對豬籠草生長有用的營養(yǎng)物質(zhì)，逐漸消化吸收。

就目前所發(fā)現(xiàn)的豬籠草的品種而言，其具有較高的藥用價值和觀賞價值。因而豬籠草受到大多數(shù)人喜愛。由于豬籠草具有很高的價值，市場對豬籠草的需求量也在日益增加，但豬籠草種子發(fā)芽率極低，主要采用扦插繁殖 [3] ，難以滿足市場需求，需要尋求一種快速繁殖的方法，才能滿足市場的需求。

1 實(shí)驗方案

選用攀枝花本地1-2年生的豬籠草幼苗莖段，首先用自來水反復(fù)沖洗，沖洗中可加適量的洗衣粉，洗去莖，葉上的泥沙。去除葉片，在超凈工作臺上用75%的酒精進(jìn)行20-30S浸泡消毒，之后立即用無菌水沖洗2-3次，然后用0.1%的升汞溶液消毒8-10min，然后無菌水沖洗4-5次，切除莖段與消毒液接觸面，每個小莖段保留1-2個芽點(diǎn)。將處理好的莖段接種到1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1gm/L的培養(yǎng)基上，每5-6天跟換一次新的相同培養(yǎng)基，減少褐化。大概2周后長出側(cè)芽，切取帶有1-3個節(jié)點(diǎn)的側(cè)芽作為外植體接種到設(shè)置好不同激素配比的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)實(shí)驗。

培養(yǎng)基篩選：基本培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA+NAA，生根培養(yǎng)基選用 1/4MS+6-BA+NAA，PH均為為5.8。然后分別用不同濃度配比的6-BA和NAA對不同階段分別處理。每種激素濃度配比接種30個外植體，

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度6-BA對芽增殖的影響

在附加濃度分別為1.0mg/L、1.5 mg/L、1.8mg/L、2.0 mg/L、2.2mg/L、2.5mg/L以及3.0mg/L的6-BA培養(yǎng)基上，由表2.1可得，都可以使外植體增殖，只是增殖率不同。隨著6-BA濃度的增加，增殖率增加。當(dāng)6-BA濃度為2.0mg/L時，最高到達(dá)270%。

2.2 不同濃度NAA對芽增殖的影響

在附加濃度分別為0.01 mg/L、0.05 mg/L、0.08mg/L、0.1 mg/L、0.12 mg/L、0.15mg/L以及0.2mg/L的NAA培養(yǎng)基上，由表2.2可得，都可以使外植體增殖，只是增殖率不同。隨著NAA濃度的增加，增殖率增加。當(dāng)NAA濃度達(dá)到0.1mg/L時增殖率達(dá)到最高243%，隨著NAA濃度進(jìn)一步增加，增殖率反而降低。

據(jù)表2.1和表2.2數(shù)據(jù)可以看出，豬籠草芽增殖培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基與NAA和6-BA的理想組合為：1/2MS+6-BA2.2mg/L+NAA0.1gm/L

2.3 不同激素濃度配比對芽增殖的影響

選取帶有2-3個節(jié)點(diǎn)的側(cè)芽，使用相同的方法接種到不同激素配比的培養(yǎng)基上，每周記錄一次芽增殖數(shù)目，培養(yǎng)4周左右增殖數(shù)達(dá)到最大?；旌霞に嘏囵B(yǎng)基培養(yǎng)的外植體比單一激素培養(yǎng)的外植體生長較快，長勢較好，增殖倍數(shù)明顯增加。據(jù)表2.3數(shù)據(jù)顯示，當(dāng)培養(yǎng)基激素配比為1/2MS+6-BA2.2mg/L+NAA0.1gm/L時最適合芽的繼代培養(yǎng)，其增殖率最高達(dá)到323%。

2.4 不同濃度的生長素對生根培養(yǎng)的影響

選取長度為2-3cm，長勢較好的繼代培養(yǎng)叢生芽，接種到1/4MS+6-BA0.1mg/L+NAA培養(yǎng)基上，添加不同濃度的NAA進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)3-4周后，絕大部分均能長出幼根。幼跟剛長出是為乳白色，大約一周后長出黑色須根。據(jù)表3.4數(shù)據(jù)顯示，隨著NAA濃度的不斷增加，新生跟的數(shù)量也在增加，當(dāng)NAA濃度達(dá)到0.5mg/L時生根數(shù)和生根率達(dá)到最大。隨著NAA濃度進(jìn)一步增加，生根數(shù)和生根率反而降低。因此可選用1/4MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5gm/L作為理想的生根培養(yǎng)基。

2.5 移栽

當(dāng)幼跟長至2.0cm以上時，將培養(yǎng)箱中的幼苗轉(zhuǎn)移到自然光照下煉苗，煉苗周期為1-2周，再打培養(yǎng)瓶蓋煉苗2-3天，然后用鑷子從培養(yǎng)瓶中小心取出幼苗，放入盛有無菌水的大燒杯中，輕輕洗去跟部附著的殘留培養(yǎng)基，但一定不要對根系造成傷害，根系出現(xiàn)損害會影響成活率。野生豬籠草能適應(yīng)于各種生長基質(zhì)，而人工栽培時宜選用疏松肥沃、排水透氣性好、微酸性的混合基質(zhì)[4]。所以我們選用由沙和珍珠巖各半混合成的基質(zhì)進(jìn)行移栽，注意保持水分、進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼谑a和保溫處理，成活率可達(dá)85%以上。

3 結(jié)論與討論

3.1 結(jié)論

豬籠草幼莖作為離體培養(yǎng)材料，利用組織培養(yǎng)技術(shù)，大量獲取植株國類外的研究均不完整，本實(shí)驗初步探討了豬籠草組織培養(yǎng)各階段培養(yǎng)基成分，利用實(shí)驗結(jié)果可以在短期內(nèi)獲得大量優(yōu)質(zhì)植株。實(shí)驗表明，影響豬籠草組織培養(yǎng)的因素很多，但是首先要控制的就是污染情況，在控制污染率的情況下，不同激素濃度配比對豬籠草幼莖生長也有較大的影響，本次實(shí)驗初步探究了6-BA和NAA不同濃度配比對培養(yǎng)的影響。添加不同濃度NAA能夠獲得不同情況的增殖率，并且在與6-BA配比的使用情況下增殖效果更佳。通過實(shí)驗得出，誘導(dǎo)幼芽生長的理想激素配比為6-BA1.0mg/L +NAA0.1mg/L且1/2MS比MS誘導(dǎo)效果更好。而6-BA和NAA混合使用，對豬籠草芽的增殖率提高也有明顯效果，芽增殖效果最好的培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA2.2mg/L +NAA0.1mg/L。而生根效果最理想培養(yǎng)基為1/4MS+6-BA0.1mg/L +NAA0.5mg/L生根率最高能達(dá)到94%

3.2 討論

當(dāng)前世界花卉產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，人們對于花卉的需求也越來越高。豬籠草因具有獨(dú)特的捕蟲籠，因其可愛、獨(dú)特的外形深受盆栽市場偏愛，豬籠草在現(xiàn)代生活當(dāng)中，其可以算是一種裝飾性、觀賞性能非常強(qiáng)的一種植物，適合做吊盆裝飾家居。吊掛在走廊、室內(nèi)窗邊、或者庭院的小樹上，象征著無憂無慮美好的生活。而且豬籠草莖葉均可入藥，對于感冒咳嗽，甚至是高血壓、糖尿病都有一定療效。但用種子來繁殖豬籠草并不容易。因為豬籠草是雌雄異株的植物，要豬籠草結(jié)種子，必須要擁有兩種性別的植株。然而，雌性的豬籠草數(shù)量較少，因此少量種植的栽培者不易使豬籠草結(jié)出種子。所以利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)使豬籠草大量快速的繁殖具有很好的研究意義

本實(shí)驗在試驗期間出現(xiàn)明顯的褐變現(xiàn)象，謝怡青，謝雄輝等人利用多次轉(zhuǎn)瓶縮短轉(zhuǎn)瓶周期，有效的降低了褐變現(xiàn)象[5]。此次實(shí)驗使用6-BA與NAA初步探究了豬籠草培養(yǎng)各階段的培養(yǎng)基，如需進(jìn)一步探究則需再使用其他激素，如ZT，IAA，2，4-D等，且還應(yīng)更加細(xì)化激素濃度梯度，從而尋找最適培養(yǎng)基成分。除了激素影響外，還有如外植體取材部位、外植體年份、培養(yǎng)箱培養(yǎng)溫度、光照強(qiáng)度、光照時長、濕度、各種材料處理方法等各方面都對豬籠草生長有待探究。

參考文獻(xiàn)

[1]Clark C.A Guide to the Pitcher Plants of Peninsula Malaysia[M].Borneo：Natural History Publications，2002.

[2]Mokkamul P，Chaveerach A，Sudmoon R，et a1.Species Identification and Sex Determination of the Genus Nepenthes[J].Pakistan Journal of Biological Sciences，2007，10（4）：561—567.

[3]王清連.植物組織培養(yǎng)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社， 2002.

[4]徐遲默.豬籠草[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，2003.23（5）.

[5]謝怡青，謝雄輝，丘亮偉，黃愉光.豬籠草組培快繁技術(shù)研究[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007.28（2）