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    黃曲霉毒素B1致肉仔雞肝損傷的氧化應(yīng)激機制研究

    2017-06-10 06:01:37王勝軍汪文俊
    中國畜牧雜志 2017年6期
    關(guān)鍵詞:膜電位偶聯(lián)緩沖液

    余 程,劉 妍,王勝軍,汪文俊

    (武陵山區(qū)特色資源植物種質(zhì)保護與利用湖北省重點實驗室,中南民族大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,湖北武漢430074)

    黃曲霉毒素B1致肉仔雞肝損傷的氧化應(yīng)激機制研究

    余 程,劉 妍,王勝軍,汪文俊*

    (武陵山區(qū)特色資源植物種質(zhì)保護與利用湖北省重點實驗室,中南民族大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,湖北武漢430074)

    本試驗旨在研究黃曲霉毒素B1(AFB1)對肉雞原代肝臟細(xì)胞線粒體氧化磷酸化、線粒體膜電位、活性氧(ROS)、細(xì)胞凋亡、抗氧化酶及其相關(guān)基因表達的影響。選取18~20日齡健康愛拔益加(AA)肉雞分離的肉雞原代肝臟細(xì)胞(BPHs),分為3個處理組,每個處理組5個重復(fù),試驗組分別添加1 μmol/L和2 μmol/L的AFB1,對照組添加等量的DMSO。結(jié)果表明:隨著AFB1濃度的升高,線粒體Ⅲ和Ⅳ呼吸作用顯著增強(P<0.05),而線粒體呼吸控制率卻顯著下降(P<0.05);隨著AFB1濃度的升高,線粒體電位下降,并呈現(xiàn)濃度依賴型模式,當(dāng)AFB1為2.5 μmol/L時BPHs線粒體電位顯著下降(P<0.05);AFB1極顯著引發(fā)了ROS的產(chǎn)生(P<0.01);高濃度的AFB1(2.5 μmol/L)處理使得BPHs細(xì)胞凋亡率明顯上升(P<0.05)以及caspase-3、caspase-9表達明顯增加(P<0.05);AFB1顯著提高了Nrf2的mRNA表達水平(P<0.05);與對照組相比,HO-1、SOD的mRNA表達量顯著下降(P<0.05);高濃度的AFB1(2.5 μmol/L)顯著提高了NQO1的mRNA表達水平(P<0.05)。以上研究結(jié)果顯示,AFB1使線粒體氧化磷酸化過程解偶聯(lián),線粒體膜電位下降,ROS大量產(chǎn)生,抗氧化酶活力降低,細(xì)胞發(fā)生凋亡,抗氧化酶相關(guān)基因mRNA表達下降,而Nrf2基因mRNA表達增強。AFB1導(dǎo)致胞內(nèi)ROS上升引發(fā)氧化應(yīng)激,可能與Nrf2信號通路有關(guān)。

    黃曲霉毒素B1;線粒體功能;活性氧;凋亡;抗氧化酶基因;肉雞

    飼料、食品及其原料廣泛受到霉菌毒素污染是一個全球性問題。世界糧農(nóng)組織發(fā)現(xiàn)作物受黃曲霉毒素的污染,尤其是黃曲霉毒素B1(AFB1),每年造成大量的畜牧業(yè)損失[1-2]。AFB1對肝臟有特殊的親和性,經(jīng)肝臟代謝為毒性極強的AFB1-8,9-環(huán)氧化物(AFBO)等,進入機體后產(chǎn)生活性氧簇(Reactive Oxygen Species,ROS)而引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng),造成毒性反應(yīng),導(dǎo)致畸形、突變甚至癌癥的發(fā)生[3-5]。肝細(xì)胞線粒體中氧化磷酸化電子傳遞鏈?zhǔn)侵匾哪芰看x過程,也是胞內(nèi)ROS產(chǎn)生的主要場合,藥物誘導(dǎo)肝損傷(Drug Induced Liver Injury,DILI)時線粒體氧化磷酸化會發(fā)生解偶聯(lián)[6-7],ROS大量產(chǎn)生而引發(fā)氧化應(yīng)激。很多研究表明,AFB1誘導(dǎo)肝細(xì)胞產(chǎn)生ROS,進而引發(fā)氧化應(yīng)激而導(dǎo)致肝損傷及一系列毒害反應(yīng),可能與Keap1-Nrf2-ARE(Kelch-like ECH-associated protein-1, Keap1;NF-E2-ralated factor 2, Nrf2; antioxidant-responsive element, ARE)、NF-κB (Nuclear Factor Kappa-lightchain-enhancer of Activated B cells)等信號通路激活等有關(guān)[3,8-10]。前期研究表明,AFB1導(dǎo)致肉雞肝臟炎癥、出血甚至細(xì)胞壞死,肝損傷嚴(yán)重[11],然而AFB1致肉雞肝損傷中的氧化應(yīng)激機制并不清楚。本試驗采用愛拔益加(AA)肉雞分離的肉雞原代肝臟細(xì)胞(Broiler Primary Hepatocytes,BPHs)為研究對象,進行AFB1對肉雞肝損傷的氧化應(yīng)激機制研究,闡明AFB1誘導(dǎo)肝損傷的機制,找到阻止或緩解AFB1的方法,減少與肝臟相關(guān)的疾病發(fā)生。

    1 材料與方法

    1.1 材料 AFB1、HEPES、膠原酶、牛血清蛋白、JC-1購自Sigma,總SOD、ROS、BCA 蛋白質(zhì)測定試劑盒購自碧云天生物技術(shù)有限公司,caspase-3、caspase-9、β-actin抗體購自Santa Cruz公司,William's E培養(yǎng)基購自Caisson公司,Percoll細(xì)胞分離液購自南京森貝伽生物科技有限公司。其他試劑均為分析純。

    1.2 試驗方法

    1.2.1 肉雞原代肝臟細(xì)胞分離 先取18~20日齡健康的AA肉雞,在腹部注射麻醉劑,然后固定,用乙醇對胸腹部全面消毒,并剪開露出肝臟,泵入緩沖液 A(10 mmol/L HEPES,137 mmol/L NaCl,3 mmol/L KCl,3 mmol/L Na2HP04,pH 7.5),隨后剪斷另一脈管,緩沖液A約剩50 mL時,將緩沖液B(0.6 g/L CaCl2和0.4 g/L IV型膠原酶的緩沖液A)倒入與之混合,繼續(xù)灌注15 min,將肝臟取出放入無菌平皿剪碎、清洗,搗碎,100目無菌尼龍網(wǎng)過濾,培養(yǎng)液清洗,收集細(xì)胞濾液,離心清洗2次,然后用10×緩沖液A和Percoll液按1:1比例配制的混合液,離心,加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,細(xì)胞計數(shù)后稀釋到2×105cells/mL,分裝到預(yù)先用膠原蛋白處理的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板,于CO2培養(yǎng)箱39℃培養(yǎng)[11]。試驗中設(shè)置對照試驗,其中試驗組培養(yǎng)液分別添加1、2.5 μmol/L的AFB1(AFB1以DMSO為溶劑,DMSO終濃度<0.1%),不同時間取樣做相關(guān)分析。對照組采用無AFB1的培養(yǎng)液培養(yǎng),不同時間取樣做相關(guān)分析。試驗分為5個重復(fù),每次重復(fù)3個平行試驗,下述試驗組進行相同重復(fù)和平行試驗數(shù)。

    1.2.2 線粒體氧呼吸試 采用配備有Clark型氧電極的Oxytherm 氧呼吸系統(tǒng)(Hansatech公司)測定氧消耗。對各組培養(yǎng)的BPHs勻漿,600 r/min離心5 min,沉淀用線粒體提取緩沖液懸浮,10 000 r/min離心10 min,沉淀懸浮在0.5 mL線粒體提取緩沖液中,制備成線粒體懸液備用,BCA法測定線粒體懸液蛋白質(zhì)的濃度。將獲得的線粒體等分為2份,分別用于同時測定谷氨酸鈉/蘋果酸鈉(5 mmol/L /2.5 mmol/L)和琥珀酸二鈉(5 mmol/L) 的呼吸試驗。測氧儀反應(yīng)槽中加入測定緩沖液穩(wěn)定2 min后,加入新鮮分離的肝臟線粒體懸液20 μL,記錄3 min,加入外源底物琥珀酸二鈉20 μL,出現(xiàn)Ⅳ態(tài)呼吸;記錄約2 min后,加入ADP (50 mmol/L)8 μL,出現(xiàn)Ⅲ態(tài)呼吸,待ADP完全消耗后線粒體又恢復(fù)到IV態(tài)呼吸;加入ADP時(Ⅲ態(tài))的呼吸速率與ADP耗竭后(Ⅳ態(tài))的呼吸速率的比值即為線粒體呼吸控制率(Respiratory Control Ratios,RCR),能夠反映線粒體膜的完整性和氧化磷酸化的偶聯(lián)程度。

    1.2.3 線粒體膜電位分析 JC-1(5,5',6,6'-tetrachlo ro-1,1',3,3'-tetraethylbenzimi dazolycarbocyanine iodide)是檢測線粒體膜電位的熒光探針。在處理好的BPHs懸液中加入1 mL濃度為5 mg/mL的JC-1染色工作液,充分混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中39℃孵育20 min,吸除上清,用JC-1染色緩沖液 (1×) 洗滌2次,Nikon C1SI全光譜激光共聚焦顯微鏡下觀察。檢測JC-1單體,激發(fā)光為488 nm,發(fā)射光為530 nm。檢測JC-1聚合物時,激發(fā)光為525 nm,發(fā)射光為590 nm。

    1.2.4 流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡 取試驗組培養(yǎng)的BPHs(細(xì)胞濃度為0.2~1×107cells/mL),預(yù)冷PBS清洗后離心,100 μL 1×binding緩沖液重懸細(xì)胞,加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL propidium iodide(PI)染色液,使熒光染料和細(xì)胞充分接觸,25℃避光處理20 min,PBS液清洗,600 r/min離心3 min,小心去上清,再加入200 μL 1×binding緩沖液重懸細(xì)胞,上BDⅢ流式細(xì)胞儀測定,至少檢測10 000個細(xì)胞。

    1.2.5 超氧化物歧化酶(SOD)測定 采用總SOD測定試劑盒進行測定SOD活力。

    1.2.6 ROS測定 ROS采用DCFH-DA(2,7-dichl orofluorescein diacetate,二氯熒光素二乙酸酯)法測定。取各試驗組BPHs,用100 μL含10 μmol/L DCFH-DA的培養(yǎng)液37℃孵育20 min,PBS清洗3次,采用DCFH-DA試劑盒按照說明測定ROS。

    1.2.7 免疫雜交 取各試驗組BPHs,加入0.5 mL含蛋白酶抑制劑并預(yù)凍的裂解緩沖液4℃分別裂解10~15 min,裂解液4℃、13 000 r/min離心20 min,上清液變性處理即為蛋白樣品。在制備好的凝膠上樣,電泳結(jié)束將凝膠取出用適量TBS液平衡5 min,將凝膠上的蛋白轉(zhuǎn)移到預(yù)先用甲醇激活的PVDF上(轉(zhuǎn)膜),用TBS液洗膜,室溫下用封閉液封閉1.5 h,將膜分別放入相應(yīng)的一抗稀釋液中(按說明書的比例稀釋),4℃脫色搖床孵育過夜,用TBST液洗膜3次,然后加入相應(yīng)二抗(按說明書的比例稀釋),室溫脫色搖床孵育1~2 h,TBST液清洗3次,曝光拍片,以β-actin抗體所得結(jié)果為對照組并標(biāo)準(zhǔn)化。

    1.2.8 定量RT-PCR分析 對試驗各組BPHs采用Trizol法提取總RNA。取適量細(xì)胞,用1 mL的Trizol勻漿、渦旋后,室溫孵育3 min,加入0.2 mL氯仿,渦旋30 s,室溫孵育1 min,4℃、12 000 r/min離心10 min,小心將約400~450 μL上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中,加入等體積預(yù)凍的70%乙醇,輕輕顛倒幾次混勻。將混勻液加入到RNA分離柱,緩沖液清洗,然后將RNA分離柱和離心管一起于4℃、12 000 r/min離心1 min以除去多余液體。往RNA分離柱(置于1.5 mL收集管)中加入50 μL無RNase水,4℃、13 000 r/min離心5 min,收集管中即得到要分離的總mRNA,取上述mRNA溶液1 μL用NanoDrop 1 000儀器測定mRNA濃度與純度,確保所有RNA樣品的OD260/OD280在1.8~2.0,用于實驗室定量RT-PCR分析,基因及其引物見表1。

    表1 用于定量RT-PCR的基因及其引物

    1.2.9 統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,使用SPSS 13.0進行分析,顯著性分析采用t檢驗,P<0.05為差異顯著,P<0.01為差異極顯著。

    2 結(jié) 果

    2.1 AFB1誘導(dǎo)BPHs線粒體呼吸鏈的解偶聯(lián)效應(yīng)隨著AFB1濃度的升高,線粒體Ⅲ和Ⅳ呼吸作用明顯增強(P<0.05),并呈現(xiàn)濃度依賴型模式,而線粒體RCR卻顯著下降(P<0.05),當(dāng)AFB1濃度1 μmol/L時為1.09,2.5 μmol/L時為1.02(圖1),這表明AFB1具有很強的線粒體呼吸作用、解偶聯(lián)作用,使得線粒體氧化磷酸化過程發(fā)生了嚴(yán)重的解偶聯(lián)效應(yīng)。

    2.2 AFB1對BPHs線粒體膜電位的影響 如圖2所示,隨著AFB1濃度升高,線粒體電位下降,并呈現(xiàn)濃度依賴型模式,當(dāng)AFB1為2.5 μmol/L時BPHs線粒體電位極顯著下降(P<0.01)。隨著AFB1對線粒體呼吸鏈的解偶聯(lián),線粒體膜電位發(fā)生去極化效應(yīng)。隨著AFB1濃度的升高,JC-1的紅綠熒光值之比顯著下降(P<0.05),證實了線粒體膜電位發(fā)生去極化,也進一步表明AFB1是一種作用明顯的氧化磷酸化解偶聯(lián)劑。

    2.3 AFB1引發(fā)的氧化應(yīng)激效應(yīng) 為了研究不同濃度的AFB1誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激,測定了BPHs在AFB1誘導(dǎo)下ROS產(chǎn)生和SOD活力的變化。如圖3所示,SOD活力隨著AFB1濃度增加而呈濃度依賴型降低(圖3A)。AFB1極顯著地引發(fā)了ROS的產(chǎn)生(P<0.01),隨著AFB1濃度的增加,ROS也呈濃度依賴型增加(圖3B)。

    圖1 AFB1對BPHs線粒體呼吸作用的影響

    2.4 AFB1引發(fā)BPHs凋亡 相比對照組,低濃度的AFB1(1 μmol/L)處理后,前期凋亡、后期凋亡和細(xì)胞壞死率無明顯區(qū)別;而高濃度的AFB1(2.5 μmol/L)處理后,BPHs細(xì)胞凋亡率明顯上升,前期凋亡率為24.5%,后期凋亡率也達到12%,可見細(xì)胞受損嚴(yán)重(P<0.05)(圖4 A)。2.5 μmol/L的AFB1處理組使得caspase-3、caspase-9表達明顯增加,而低濃度的AFB1(1 μmol/L)處理組與對照組相比無明顯差異(P>0.05)(圖4 B,4C)。此結(jié)果也與流式細(xì)胞檢測結(jié)果互為印證,表明高濃度的AFB1導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。

    2.5 AFB1對BPHs氧化應(yīng)激基因表達的影響 如圖5所示,低濃度的AFB1(1 μmol/L)顯著提高了Nrf2的mRNA表達水平(P<0.05);高濃度的AFB1(2.5 μmol/L)極顯著提高了Nrf2的mRNA表達水平(P<0.01)。與對照組相比,HO-1、SOD的mRNA表達量顯著下降(P<0.05)。與對照組相比,低濃度的AFB1(1 μmol/L)對NQO1的mRNA表達無明顯影響,而高濃度的AFB1(2.5 μmol/L)顯著提高了NQO1的mRNA表達水平(P<0.05)。

    圖 2 AFB1對BPHs線粒體膜電位的影響

    圖3 AFB1對BPHs氧化應(yīng)激的影響

    圖4 AFB1對肉雞肝臟原代細(xì)胞凋亡的影響

    圖5 AFB1對肉雞肝臟原代細(xì)胞中二相酶和Nrf2表達的影響

    3 討 論

    AFB1對肝臟具有獨特的親和性,大量文獻表明AFB1會導(dǎo)致嚴(yán)重的肝損傷[3-5,11-12],然而AFB1誘導(dǎo)肉雞肝損傷的機制并不明確。具有肝毒性的藥物以多種方式損傷肝臟線粒體[5-6],AFB1是眾所周知的肝毒性化學(xué)物質(zhì),石達友等[4,12]研究了AFB1對肉雞肝線粒體自由基代謝及線粒體膜滲透性變化,表明AFB1因線粒體滲透性增強,導(dǎo)致氧自由基增加。為獲得阻止或緩解AFB1的新方法,更清楚的闡明AFB1誘導(dǎo)肝損傷機制顯得十分重要。

    3.1 AFB1誘導(dǎo)BPHs線粒體呼吸鏈的解偶聯(lián)效應(yīng)研究表明,肝細(xì)胞線粒體中氧化磷酸化電子傳遞鏈?zhǔn)侵匾哪芰看x過程,藥物誘導(dǎo)肝損傷時線粒體氧化磷酸化會發(fā)生解偶聯(lián)[6-7]。RCR是Ⅲ態(tài)呼吸率與Ⅳ態(tài)呼吸率的比值,可反映線粒體的完整性和氧化磷酸化的偶聯(lián)程度。RCR下降表明線粒體氧化磷酸化偶聯(lián)程度下降,線粒體功能受損。本研究表明,線粒體Ⅲ和Ⅳ呼吸作用明顯增強,而RCR顯著下降,表明AFB1具有很強的線粒體呼吸作用解偶聯(lián)作用。

    3.2 AFB1對BPHs線粒體膜電位的影響 線粒體能量代謝障礙導(dǎo)致膜電位下降,線粒體膜電位是反映線粒體功能的重要指標(biāo)[13-14]。JC-1是一種用于檢測線粒體膜電位的熒光探針,在線粒體膜電位較高時(細(xì)胞處于正常狀態(tài)),JC-1聚集在線粒體的基質(zhì)中,形成聚合物,可以產(chǎn)生紅色熒光,在線粒體膜電位較低時,JC-1不能聚集在線粒體的基質(zhì)中,此時JC-1為單體,可以產(chǎn)生綠色熒光,用紅綠熒光的相對比例來衡量線粒體去極化的比例。本研究表明,隨著AFB1濃度的升高,JC-1的紅綠熒光值之比顯著下降,證實了線粒體膜電位發(fā)生去極化,也進一步表明AFB1是一種作用明顯的氧化磷酸化解偶聯(lián)劑。

    3.3 AFB1引發(fā)的氧化應(yīng)激效應(yīng) AFB1誘導(dǎo)ROS的產(chǎn)生,誘導(dǎo)肝臟細(xì)胞損傷[3-5]。前期研究結(jié)果表明,肉雞飼喂含AFB1(0.4 mg/kg)的飼料使得SOD活力降低,而隨過氧化物酶(MPO)活力上升,血樣的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活力上升,肝臟組織病理學(xué)表明肝組織惡化,肉雞肝損傷嚴(yán)重[11]。本研究表明,AFB1極顯著地引發(fā)了ROS的產(chǎn)生,而SOD活力顯著下降,表明ROS的產(chǎn)生可能抑制抗氧化酶(如SDO)的活力。AFB1對SOD活力的抑制效應(yīng)也表明AFB1導(dǎo)致了細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激效應(yīng),可能是其細(xì)胞毒性的原因之一。

    3.4 AFB1引發(fā)BPHs凋亡 半胱氨酸蛋白酶(caspase)家族是直接導(dǎo)致凋亡細(xì)胞解體的蛋白酶系統(tǒng),在細(xì)胞凋亡機制中起主要作用。目前,已發(fā)現(xiàn)該蛋白酶家族共有13個(caspase1-13),其中起凋亡啟動子作用的有caspase8、9、10,起凋亡效應(yīng)子作用的有caspase3、6、7。Caspase-3 被稱作“死亡蛋白酶”,是凋亡的關(guān)鍵蛋白酶,一旦被激活,可產(chǎn)生一系列反應(yīng),使凋亡不可避免[15]。本研究免疫雜交試驗表明,AFB1處理后,caspase-3、caspase-9表達明顯增加,說明AFB1誘導(dǎo)了肝細(xì)胞的凋亡,這一結(jié)果與Brahmi等[16]研究結(jié)果一致。此結(jié)果也與流式細(xì)胞檢測結(jié)果互為印證,表明高濃度的AFB1導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。

    3.5 AFB1對BPHs氧化應(yīng)激基因表達的影響 氧化應(yīng)激是導(dǎo)致細(xì)胞損傷甚至惡變的重要因素,Nrf2是參與氧化應(yīng)激的重要轉(zhuǎn)錄因子。ROS的存在會激活Nrf2轉(zhuǎn)位到核內(nèi)后結(jié)合到抗氧化反應(yīng)單元(Antioxidant Response Elements,ARE)結(jié)合,而誘導(dǎo)一系列的二相解毒酶基因(如NQO1、HO-1、SOD等)表達。研究表明,AFB1引起肉雞肝臟細(xì)胞內(nèi)ROS大量產(chǎn)生,引發(fā)氧化損傷,導(dǎo)致與氧化應(yīng)激相關(guān)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Nrf2表達增加[3,17]。本研究結(jié)果表明,Nrf2的mRNA表達顯著增加,而NQO1、HO-1、SOD等基因在高濃度AFB1作用下有所降低。結(jié)合前述研究結(jié)果,可能是細(xì)胞凋亡或壞死引起表達量的下降。

    4 結(jié) 論

    本研究表明,AFB1是線粒體氧化磷酸化解偶聯(lián)劑,肉雞原代肝臟細(xì)胞胞內(nèi)ROS增加,SOD活力下降,引發(fā)氧化應(yīng)激,導(dǎo)致Nrf2基因的mRNA表達增強,而與肝臟解毒相關(guān)的二相解毒酶基因如NQO1、HO-1、SOD的mRNA表達下降。

    [1] Council ofr Agricultural Science and Technology. Mycotoxins: Economic and Health Risks[R]. Ames Iowa USA: CAST,1989, 116: 91.

    [2] Smiley R D, Draughon F A. Preliminary evidence that degradation of aflatoxin B1 by Flavobacterium aurantiacum is enzymatic[J]. J Food Prot, 2000, 63(3): 415-418.

    [3] 芮小麗, 陳思潭, 李春梅. 硒對黃曲霉毒素B1暴露肉雞肝臟氧化損傷的保護作用[J]. 動物營養(yǎng)學(xué)報, 2014, 26(8): 2281-2288.

    [4] 石達友, 李燕華, 黃墁玲, 等. 黃曲霉毒素B-1對肉雞肝線粒體自由基代謝的影響[J]. 中國獸醫(yī)雜志, 2011, 47(3): 9-12.

    [5] Adedara I A, Owumi S E, Uwaifo A O, et al. Aflatoxin B1 and ethanol co-exposure induces hepatic oxidative damage in mice[J]. Toxicol Ind Health, 2010, 26(10): 717-724.

    [6] Pessayre D, Fromenty B, Berson A, et al. Central role of mitochondria in drug-induced liver injury[J]. Drug Metab Rev, 2012, 44(1): 34-87.

    [7] Sekine S, Ichijo H. Mitochondrial Proteolysis: Its emerging roles in stress responses[J]. Biochim Biophys Acta, 2014, 185(2): 274-280.

    [8] Jain M, Rivera S, Monclus E A, et al. Mitochondrial reactive oxygen species regulate transforming growth factor-β signaling[J]. J Biol Chem, 2013, 288(2): 770-777.

    [9] Fang Y, Feng Y J, Wu T J, et al. Aflatoxin B1 negatively regulates wnt/β-Catenin signaling pathway through activating miR-33a[J]. PLoS One, 2013, 8 (8): e73004.

    [10] Josse R, Dumont J, Fautrel A, et al. Identification of early target genes of aflatoxin B1 in human hepatocytes, interindividual variability and comparison with other genotoxic compounds[J]. Toxicol Appl Pharmacol, 2012, 258(2): 176-187.

    [11] Cao J G, Wang W J. Effects of astaxanthin and esterified glucomannan on hematological and serum Parameters, and liver pathological changes in broilers fed aflatoxin-B1-contaminated feed[J]. Anim Sci J, 2014, 85: 150-157.

    [12] Shi D Y, Liao S Q, Guo S N, et al. Protective effects of selenium on aflatoxin B1-induced mitochondrial permeability transition, DNA damage, and histological alterations in duckling liver[J]. Biol Trace Elem Res, 2015, 163: 162-168.

    [13] Hill M M, Adrain C, Martin S J, et al. Portrait of a killer: the mitochondrial apoptosome emerges from the shadows[J]. Mol Interv, 2003, 3(1): 19-26.

    [14] Saprunova V B, Bakeeva L E, Iaguzhinski?L S. Ultrastructure of mitochondria apparatus of cardiomyocytes in apoptosis induced by long-term anoxia in rats[J]. Tsitologiia, 2003, 45(11):1073-1082.

    [15] 趙瑞杰, 李引乾, 王會, 等. Caspase家族與細(xì)胞凋亡的關(guān)系[J]. 中國畜牧雜志, 2010, 46(17):73-78.

    [16] Brahmi D, Bouaziz C, Ayed Y, et al. Chemopreventive effect of cactus Opuntia ficus indica on oxidative stress and genotoxicity of aflatoxin B1[J]. Nutr Metab (Lond), 2011, 8:73.

    [17] Vriend J, Reiter R J. The Keap1-Nrf2-antioxidant response element pathway: A review of its regulation by melatonin and the proteasome[J]. Mol Cell Endocrinol, 2015, 401: 213-220.

    S831.5

    A

    10.19556/j.0258-7033.2017-06-092

    2016-11-04;

    2017-01-29

    湖北省自然科學(xué)基金(2016CFB487);中央高?;究蒲袠I(yè)務(wù)費專項資金重點項目(CZZ16003)

    余程(1991-),女,湖北武漢人,碩士,主要從事天然產(chǎn)物與動物營養(yǎng)研究,E-mail:1463816568@qq.com

    * 通訊作者:汪文俊,E-mail:hustwsir@126.com

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