髓樣分化因子88基因rs7744多態(tài)性與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病易感性及嚴(yán)重程度的關(guān)系

孫丹丹，吳玉鵬，劉文，閆虹，王紅鵠，楊軍

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院1.心血管超聲科；2.神經(jīng)外科，沈陽(yáng)110001）

髓樣分化因子88基因rs7744多態(tài)性與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病易感性及嚴(yán)重程度的關(guān)系

孫丹丹1，吳玉鵬2，劉文1，閆虹1，王紅鵠1，楊軍1

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院1.心血管超聲科；2.神經(jīng)外科，沈陽(yáng)110001）

目的探討中國(guó)北方漢族人群髓樣分化因子88（MyD88）基因3’非編碼區(qū)（3’-UTR）rs7744多態(tài)性與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。–AD）發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)及嚴(yán)重程度的關(guān)系。方法收集2013年9月至2015年9月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院血液標(biāo)本810例。CAD組540例，對(duì)照組270例，采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）技術(shù)檢測(cè)rs7744多態(tài)性，并收集臨床資料。結(jié)果MyD88基因rs7744符合Hardy-Weiberg平衡（P＞0.1）。對(duì)MyD88基因rs7744多態(tài)性與CAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系進(jìn)行總體和分層分析。MyD88基因rs7744多態(tài)位點(diǎn)，年齡＜50歲，AG突變雜合型攜帶者CAD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)是AA野生純合型攜帶者的0.38倍（95%CI:0.17～0.93；P=0.029）。對(duì)MyD88基因rs7744多態(tài)性與CAD嚴(yán)重程度的關(guān)系進(jìn)行冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)及改良Gensini評(píng)分分析。在改良Gensini評(píng)分分析中，MyD88基因rs7744多態(tài)位點(diǎn)，GG突變純合型攜帶者的改良Gensini評(píng)分顯著低于AA野生純合型攜帶者（5.23±3.85 vs 7.49±4.96；P=0.011）。結(jié)論MyD88基因3’-UTR區(qū)rs7744多態(tài)性與CAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)及嚴(yán)重程度存在關(guān)聯(lián)關(guān)系。攜帶rs7744突變基因型的年齡＜50歲人群，CAD的發(fā)病率比較低。rs7744突變基因型攜帶者的改良Gensini評(píng)分顯著低于野生型攜帶者。

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病；發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)或易感性；改良Gensini評(píng)分；髓樣分化因子88；基因多態(tài)性

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病（coronary artery disease，CAD）是冠狀動(dòng)脈發(fā)生粥樣硬化，形成斑塊，造成血管狹窄或阻塞，從而導(dǎo)致心肌缺血、缺氧［1］。慢性炎癥反應(yīng)是其發(fā)生的主要機(jī)制之一［2］。髓樣分化因子88（myeloid differentiation factor 88，MyD88）是炎癥反應(yīng)通路中的重要配體，參與Toll樣受體（Toll-like receptor，TLR）和白細(xì)胞介素1受體（interleukin-1 receptor，IL-1R）介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，上調(diào)炎性細(xì)胞因子（IL-1、IL-6、IL-8、IL-12、TNF-α、干擾素和黏附因子等）的表達(dá)［3-5］。研究［6］表明，MyD88基因rs7744多態(tài)性與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生相關(guān)。因此推測(cè)MyD88基因rs7744多態(tài)性可能也與CAD的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。本研究以中國(guó)北方漢族人群為對(duì)象，探討MyD88基因3’非編碼區(qū)（3’-untranslated region，3’-UTR）rs7744多態(tài)性與CAD易感性及嚴(yán)重程度的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

采用以醫(yī)院為基礎(chǔ)的病例-對(duì)照研究，收集2013年9月至2015年9月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院810例血液標(biāo)本。所有入選者均行冠狀動(dòng)脈造影術(shù)，并簽署知情同意書。CAD組540例（男239例，女301例），年齡27～84（59.14±9.51）歲，CAD診斷均符合1997年國(guó)際心臟病學(xué)會(huì)、協(xié)會(huì)及WHO臨床命名及診斷標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照組270例（男115例，女155例），年齡26～87（58.58±10.47）歲，冠狀動(dòng)脈造影結(jié)果顯示冠狀動(dòng)脈狹窄＜50%。所有研究對(duì)象均排除嚴(yán)重的肝腎疾病、血液病、自身免疫性病、急性腦血管疾病及急性外周血管血栓病。以電話咨詢或病歷記錄方法收集入選者性別、年齡及其他相關(guān)臨床資料（吸煙史、飲酒史、高血壓史、糖尿病史、血壓、血脂、血糖和冠狀動(dòng)脈造影等）。

1.2 冠狀動(dòng)脈病變程度評(píng)價(jià)

1.2.1 冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)：一支病變，一支主要冠狀動(dòng)脈（左前降支、回旋支、右冠狀動(dòng)脈）阻塞≥50%；兩支病變，兩支主要冠狀動(dòng)脈阻塞≥50%；三支病變，三支主要冠狀動(dòng)脈阻塞≥50%。左主干阻塞≥50%歸為兩支病變。

1.2.2 改良Gensini評(píng)分系統(tǒng)：冠狀動(dòng)脈分為8個(gè)主要節(jié)段，對(duì)每個(gè)節(jié)段中最重的狹窄病變進(jìn)行定量評(píng)分。0分，無(wú)任何狹窄；1分，1%～＜50%狹窄；2分，50%～＜75%狹窄；3分，75%～＜100%狹窄；4分，100%狹窄。各段評(píng)分之和為總積分。

1.3 基因組DNA提取及基因分型

5 mL外周靜脈血置于促凝試管內(nèi)，分離血清和凝血塊。酚-氯仿法提取血凝塊中人基因組DNA。采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP）技術(shù)對(duì)MyD88基因rs7744進(jìn)行基因分型。上游引物為5’-AGGGAGCCTAACCA TGTCACTGA-3’，下游引物為5’-AGGGTCTGTCGTG GGGCACA-3’。PCR反應(yīng)體系包括：10×Buffer 2.5 μL（含MgC l 225 nmol/L），4種dNTP混合物2 μL，10 μmol/L的上下游引物各0.5 μL，2.5 U的Taq DNA酶0.25 μL，模板DNA 0.5 μL，最后加去離子水至25 μL。PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性3 min，然后按94℃30 s，61℃30 s，72℃30 s，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，72℃延伸10 min。取10 μL PCR產(chǎn)物與限制性核酸內(nèi)切酶37℃過(guò)夜。全部酶切產(chǎn)物于3.0%瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像系統(tǒng)分析電泳結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料以x±s表示，組間計(jì)量資料比較采用ANOVA檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以頻率表示，組間計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；MyD88基因rs7744多態(tài)性與CAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)及與CAD病變支數(shù)的關(guān)聯(lián)關(guān)系采用多因素logistic回歸模型。不同基因型之間，改良Gensini評(píng)分的比較采用ANOVA檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床資料比較

CAD組及對(duì)照組，年齡、性別、飲酒與否均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。與對(duì)照組相比，CAD組吸煙、高血壓、糖尿病、高血脂均增加（P＜0.05），見表1。

MyD88基因rs7744 3種基因型之間，年齡、性別、吸煙、飲酒、高血壓、高血脂、糖尿病均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），見表2。

表1 CAD組與對(duì)照組一般臨床資料比較Tab.1 Clinical data of subjects in the CAD and control groups

表2 MyD88 rs7744 3種基因型一般臨床資料比較Tab.2 Clinical data of subjects carrying the three genotypes of MyD88 rs7744

2.2 MyD88基因rs7744多態(tài)性分型

MyD88基因rs7744野生型AA為1個(gè)片段，291 bp；突變雜合型AG為3個(gè)片段，分別為291 bp、172 bp和119 bp；完全突變型GG為2個(gè)片段，172 bp和119 bp（圖1）。3種基因型在對(duì)照組中的分布為AA型99例（36.6%），AG型126例（46.8%），GG型45例（16.6%）；在CAD組中的分布為：AA型212例（39.3%），AG型256例（47.4%），GG型72例（13.3%）；rs7744符合Hardy-Weiberg平衡（P＞0.1）。

2.3 MyD88基因rs7744多態(tài)性與CAD發(fā)病率的關(guān)系

對(duì)MyD88基因rs7744多態(tài)性與CAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系進(jìn)行總體和分層分析。總體分析結(jié)果顯示，rs7744多態(tài)性與CAD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表3。在年齡分層中，年齡＜50歲人群，MyD88基因rs7744多態(tài)性AG突變雜合型攜帶者CAD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)是AA野生純合型攜帶者的0.38倍（95%CI：0.17～0.93；P=0.029），見表4。

圖1 MyD88 rs7744多態(tài)性的PCR-RFLP瓊脂糖凝膠電泳圖譜Fig.1 PCR-RFLP assay for analyzing MyD88 rs7744 polymorphism

表3 MyD88基因rs7744多態(tài)性與CAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系Tab.3 Relationship of the MyD88 rs7744 polymorphism with CAD risk

2.4 MyD88基因rs7744多態(tài)性與CAD嚴(yán)重程度的關(guān)系

對(duì)MyD88基因rs7744多態(tài)性與CAD嚴(yán)重程度的關(guān)系進(jìn)行冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)及改良Gensini評(píng)分?？傮w分析結(jié)果顯示，rs7744多態(tài)性與冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，表5）。在改良Gensini評(píng)分分析中，MyD88基因rs7744多態(tài)位點(diǎn)，GG突變純合型攜帶者的改良Gensini評(píng)分顯著低于AA野生純合型攜帶者（5.23±3.85 vs 7.49±4.96；P= 0.011），見表6。

表4 MyD88基因rs7744多態(tài)性與CAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)關(guān)系的分層分析Tab.4 Stratification analysis of the association between MyD88 rs7744 and CAD risk

3 討論

研究［7］發(fā)現(xiàn)中國(guó)CAD發(fā)病率逐年增加，已經(jīng)成為我國(guó)人口死亡的主要原因。近來(lái)研究［8］表明，多種分子機(jī)制參與CAD的發(fā)生發(fā)展，如炎癥細(xì)胞因子損害、心肌細(xì)胞代謝障礙、細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載、氧自由基損傷、興奮性氨基酸毒性損傷等，其中，炎癥反應(yīng)是重要的機(jī)制之一。MyD88分子是TLR介導(dǎo)的先天免疫反應(yīng)以及IL-1受體和IL-8受體介導(dǎo)的信號(hào)通路中一個(gè)重要的接頭蛋白，參與活化NF-κB信號(hào)通路及RAS/ERK信號(hào)通路，誘導(dǎo)炎性細(xì)胞因子（IL-1、IL-6、IL-8、IL-12、TNF-α、干擾素和黏附因子等）的表達(dá)［5，9］，在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)，MyD88基因rs7744多態(tài)性與CAD的易感性相關(guān)，并參與影響CAD的嚴(yán)重程度。

表5 MyD88基因rs7744多態(tài)性與冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)的關(guān)聯(lián)關(guān)系Tab.5 Relationship of the MyD88 rs7744 polymorphism with the number of coronary stenosis

表6 MyD88基因rs7744多態(tài)性與改良Gensini評(píng)分的關(guān)聯(lián)關(guān)系Tab.6 Relationship of the MyD88 rs7744 polymorphism with the modified Gensini score

有研究［10］表明MyD88基因敲除或基因突變與動(dòng)脈粥樣硬化及其并發(fā)癥密切相關(guān)。FAN等［11］研究顯示敲除MyD88基因或者抑制MyD88基因表達(dá)后可起到減少大鼠缺血大腦炎癥反應(yīng)；DOWNES等［12］研究報(bào)道敲除MyD88基因后大鼠腦梗死面積擴(kuò)大。古聯(lián)等［13］研究表明MyD88基因rs7744多態(tài)性與缺血性中風(fēng)患者LDL水平顯著相關(guān)。而CHEN等［6］對(duì)131例動(dòng)脈粥樣硬化閉塞癥患者及270例健康對(duì)照者的研究中發(fā)現(xiàn)，MyD88基因rs7744多態(tài)性與動(dòng)脈粥樣硬化閉塞癥的發(fā)生相關(guān)。其分子機(jī)制可能是：（1）基因3’-UTR區(qū)轉(zhuǎn)錄后的mRNA可以與小RNA結(jié)合，從而使靶標(biāo)的mRNA降解或翻譯抑制，該區(qū)域發(fā)生變異可能會(huì)通過(guò)影響靶基因的表達(dá)而改變其生物學(xué)功能［14］。rs7744位點(diǎn)位于MyD88基因的3’-UTR區(qū)，在該位點(diǎn)100 bp范圍內(nèi)，具有與miR-150-3p和miR-1236結(jié)合的位點(diǎn)［15］。因此推測(cè)在rs7744位點(diǎn)由A等位基因突變?yōu)镚等位基因時(shí)，miR-150-3p和miR-1236與MyD88mRNA結(jié)合能力發(fā)生改變，使MyD88表達(dá)受到影響。（2）MyD88基因rs7744多態(tài)位點(diǎn)與ACAA1基因rs156265多態(tài)位（啟動(dòng)子區(qū)）點(diǎn)高度連鎖不平衡（r2=0.9）。ACAA1基因rs156256多態(tài)位點(diǎn)可以影響內(nèi)毒素的生成［16］。rs7744多態(tài)位點(diǎn)與rs156256多態(tài)位點(diǎn)相互作用，可能影響基因的表達(dá)，進(jìn)而影響CAD的易感性及嚴(yán)重程度。

本研究表明，在年齡＜50歲人群中，MyD88基因rs7744多態(tài)位點(diǎn)AG突變雜合型的攜帶者發(fā)生CAD概率顯著低于AA野生純合型的攜帶者。FU等［17］研究表明，血清中MyD88的表達(dá)隨著年齡的增長(zhǎng)逐漸降低。這可以部分解釋本研究的結(jié)果，MyD88基因rs7744多態(tài)性可能對(duì)年齡較小人群CAD的易感性影響更為顯著。本研究還表明，MyD88基因rs7744多態(tài)位點(diǎn)，GG突變純合型攜帶者的改良Gensini評(píng)分顯著低于AA野生純合型攜帶者。改良Gensini評(píng)分不但能評(píng)價(jià)CAD患者血管阻塞的數(shù)目，還可以評(píng)價(jià)血管阻塞的程度及范圍。以往的研究［18］表明，MyD88與動(dòng)脈血管重構(gòu)、內(nèi)膜增生及脂質(zhì)沉積有關(guān)。因此，MyD88基因rs7744多態(tài)位點(diǎn)突變型可能會(huì)通過(guò)影響冠狀動(dòng)脈內(nèi)膜增生及重構(gòu)來(lái)影響CAD的嚴(yán)重程度，即改良Gensini評(píng)分。

綜上所述，本研究首次報(bào)道了MyD88基因3’-UTR區(qū)rs7744多態(tài)性與CAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)存在關(guān)聯(lián)關(guān)系。其中，攜帶rs7744突變基因型的年齡＜50歲人群CAD的發(fā)病率比較低。rs7744多態(tài)性與CAD的嚴(yán)重程度相關(guān)。rs7744突變基因型攜帶者的改良Gensini評(píng)分顯著低于野生型攜帶者。本研究為臨床易發(fā)生CAD的人群提供早期預(yù)警，并對(duì)CAD進(jìn)展的治療提供理論基礎(chǔ)；但樣本量相對(duì)較小，仍需要大樣本多中心的相關(guān)研究來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證結(jié)果。

［1］WANG Y，MAO LH，JIA EZ，et al.Relationship between diagonal earlobe creases and coronary artery disease as determined via angiography［J］.BMJ Open，2016，6（2）：e008558.DOI：10.1136/bmjopen-2015-008558.

［2］HANSSON GK.Inflammation，atherosclerosis，and coronary artery disease［J］.N Engl J Med，2005，352（16）：1685-1695.DOI：10.1056/NEJMra043430.

［3］MCALEER JP，VELLA AT.Understanding how lipopolysaccharide impacts CD4 T-cell immunity［J］.Crit Rev Immunol，2008，28（4）：281-299.DOI：10.1615/CritRevImmunol.v28.i4.20.

［4］TAKEUCHI O，AKIRA S.MyD88 as a bottle neck in Toll/IL-1 signaling［J］.Curr Top Microbiol Immunol，2002，270：155-167.DOI：10.1007/978-3-642-59430-4_10.

［5］WARNER N，NUNEZ G.MyD88：a critical adaptor protein in innate immunity signal transduction［J］.J Immunol，2013，190（1）：3-4.DOI：10.4049/jimmunol.1203103.

［6］CHEN Z，NAKAJIMA T，INOUE Y，et al.A single nucleotide polymorphism in the 3’-untranslated region ofMyD88gene is associated with Buerger disease but not with Takayasu arteritis in Japanese［J］.J Hum Genet，2011，56（7）：545-547.DOI：10.1038/ jhg.2011.44.

［7］龔艷君，霍勇.64排CT冠狀動(dòng)脈成像的臨床應(yīng)用現(xiàn)況［J］.中國(guó)介入心臟病學(xué)雜志，2005，13（6）：416-416.DOI：10.3969/j. issn.1004-8812.2005.06.027.

［8］FRANGOGIANNIS NG.Chemokines in ischemia and reperfusion［J］.Thromb Haemost，2007，97（5）：738-747.DOI：10.1160/TH07-01-0022.

［9］COSTE I，LE CORF K，KFOURY A，et al.Dual function of MyD88 in RAS signaling and inflammation，leading to mouse and human cell transformation［J］.J Clin Invest，2010，120（10）：3663-3667. DOI：10.1172/JCI42771.

［10］GUO J，LIANG W，LI J，et al.Knockdown of FSTL1 inhibits oxLDL-induced inflammation responses through the TLR4/MyD88/NF-κB and MAPK pathway［J］.Biochem Biophys Res Commun，2016，478（4）：1528-1533.DOI：10.1016/j.bbrc.2016.08.138.

［11］FAN H，LI L，ZHANG X，et al.Oxymatrine downregulates TLR4，TLR2，MyD88，and NF-kappaB and protects rat brains against focal ischemia［J］.Mediators Inflamm，2009，2009：704706.DOI：10.1155/2009/704706.

［12］DOWNES CE，WONG CH，HENLEY KJ，et al.MyD88 is a critical regulator of hematopoietic cell-mediated neuroprotection seen after stroke［J］.PloS One，2013，8（3）：e57948.DOI：10.1371/journal. pone.0057948.

［13］古聯(lián)，韋湫桂，謝娟娟，等.髓樣分化因子基因（MYD88）多態(tài)性影響中風(fēng)風(fēng)痰瘀阻證的血脂代謝［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2016，27（5）：1266-1268.DOI：10.3969/j.issn.1008-0805.2016.05.096.

［14］KHVOROVA A，REYNOLDS A，JAYASENA SD.Functional siRNAs and miRNAs exhibit strand bias［J］.Cell，2003，115（2）：209-216.DOI：10.1016/S0092-8674（03）00801-8

［15］MATSUNAGA K，TAHARA T，SHIROEDA H，et al.The*1244 A＞G polymorphism of MyD88（rs7744）is closely associated with susceptibility to ulcerative colitis［J］.Mol Med Rep，2014，9（1）：28-32.DOI：10.3892/mmr.2013.1769.

［16］POTTER C，CORDELL HJ，BARTON A，et al.Association between anti-tumour necrosis factor treatment response and genetic variants within the TLR and NF{kappa}B signalling pathways［J］. Ann Rheum Dis，2010，69（7）：1315-1320.DOI：10.1136/ard.2009. 117309.

［17］FU GX，CHEN AF，ZHONG Y，et al.Decreased serum level of HMGB1 and MyD88 during human aging progress in healthy individuals［J］.Aging Clin Exp Res，2016，28（2）：175-180.DOI：10.1007/s40520-015-0402-8.

［18］MCRAE MM，GALLO A，SAAD A，et al.The role of the MyD88 pathway in arterial remodeling［J］.J Am College Surg，2006，203（3）：S104-S104.DOI：10.1016/j.jamcollsurg.2006.05.273.

（編輯 武玉欣）

Relationship of MyD88 rs7744 Polymorphism with the Risk and Severity of Coronary Artery Disease

SUN Dandan1，WU Yupeng2，LIU Wen1，YAN Hong1，WANG Honghu1，YANG Jun1

（1.Department of Cardiovascular Ultrasound，The First Hospital，China Medical University，Shenyang 110001，China；2.Department of Neurosurgery，The First Hospital，China Medical University，Shenyang 110001，China）

Objective To investigate the association between rs7744 polymorphism in the 3’-untranslated region（3’-UTR）of myeloid differentiation factor 88（MyD88）gene and the risk and severity of coronary artery disease（CAD）in a North Chinese Han population.MethodsThe CAD and control groups consisted of 540 patients and 270 subjects，respectively.The genotypes of rs7744 were detected by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism（PCR-RFLP），and clinical data were collected.ResultsThe distributions ofMyD88rs7744 were in HWE（P＞0.1）.In the＜50-year-old age group，a lower risk of CAD was observed for subjects carrying the variant AG genotype in comparison to subjects carrying the wild AA genotype（OR=0.38，95%CI:0.17-0.93，P=0.029）.TheMyD88rs7744 polymorphism was also related to the modified Gensini score（P=0.011），which was lower in subjects carrying the variant GG genotype than the wild AA genotype（5.23±3.85 vs 7.49± 4.96）.ConclusionOur results revealed thatMyD88rs7744 polymorphism in the 3’-UTR is correlated with the risk and severity of CAD.

coronary artery disease；disease risk or susceptibility；modified Gensini score；myeloid differentiation factor 88；polymorphism

R541.4

A

0258-4646（2017）06-0519-05

10.12007/j.issn.0258-4646.2017.06.009

遼寧省自然科學(xué)基金（2015020506）

孫丹丹（1983-），女，主治醫(yī)師，博士.

楊軍，E-mail：yangjun@cmu1h.com

2017-01-06

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