魯 波,包 磊,任麗芳,沈 寅,張 鵬,錢潔芳
免疫組化切片褪色再染HE方法探討
魯 波,包 磊,任麗芳,沈 寅,張 鵬,錢潔芳
免疫組織化學(xué);褪色;再染
隨著人們生活水平的日益提高以及醫(yī)療條件的不斷改善,病理切片向高等級醫(yī)院會診也越來越多,患者不及時歸還HE切片及組織蠟塊的情況也時有發(fā)生,病理檔案資料僅存有一些免疫組化切片,如果想把此病例作為教學(xué)和學(xué)術(shù)交流將難以進(jìn)行。我們通過反復(fù)試驗,摸索出一種將免疫組化標(biāo)記褪色后,重新進(jìn)行HE染色的病理技術(shù),現(xiàn)介紹如下。
1.1 材料 收集2015~2016年紹興市婦幼保健院病理科已經(jīng)做了免疫組化切片的10例標(biāo)本。
1.2 試劑 褪色劑為0.5%酸性高錳酸鉀,1%鹽酸乙醇,HE試劑為自配的蘇木精和伊紅染液。
1.3 方法
1.3.1 免疫組化標(biāo)記切片褪色為白片 將免疫組化標(biāo)記切片放入二甲苯中浸泡,去除蓋玻片和中性樹膠,梯度乙醇脫二甲苯入水,蒸溜水洗,入0.5%酸性高錳酸鉀水溶液氧化1~20 min,蒸餾水洗凈后入1%鹽酸乙醇漂白。此時還不能將切片中的顏色全部褪去,需晾干后再放入1%鹽酸乙醇中漂白,反復(fù)數(shù)次,即可將免疫組化標(biāo)記的棕黃色顆粒全部去掉,待組織完全變白后顯微鏡下觀察褪色效果,然后水洗。在褪色過程中要嚴(yán)防損壞組織切片,褪色徹底是重染HE的前提條件[1]。
1.3.2 HE染色 將漂白的免疫組化切片放入水中反復(fù)沖洗干凈,浸入蘇木精染液8 min,自來水洗,溫水返藍(lán)1 min,入伊紅染液1 min水洗,梯度乙醇分化,二甲苯透明,中性樹膠封固,鏡下觀察。
10例免疫組化切片經(jīng)0.5%酸性高錳酸鉀、1%鹽酸乙醇多次分化后,褪色徹底,無掉片及組織缺損情況,顯微鏡下觀察無任何顏色,再行HE染色后,與原HE染色基本一致,形態(tài)結(jié)構(gòu)清楚,組織染色均勻(圖1、2),再染效果良好。
①②
圖1 原免疫組化鏡下所見:陽性細(xì)胞定位準(zhǔn)確,無特異性染色,Ki-67(異型腺體20%陽性),核呈棕褐色著色 圖2 褪色后行HE染色鏡下所見:小塊子宮頸黏膜組織,腺體結(jié)構(gòu)紊亂,異型增生,腺上皮單層或假復(fù)層,核大小不一,異性深染,胞質(zhì)嗜伊紅,間質(zhì)疏松,并有少量炎細(xì)胞浸潤
日常病理工作中,會遇到以下情況。(1)患者不及時歸還HE切片及組織蠟塊,病理檔案資料僅存一些免疫組化切片。(2)有些子宮頸活檢組織標(biāo)本小,常規(guī)HE和免疫組化后組織所剩不多,難以再行切片。(3)鏡下有時會發(fā)現(xiàn)免疫組化切片中的病灶不同于原HE切片,需重新觀察其病變情況。由于無剩余切片,本實(shí)驗將免疫組化標(biāo)記的切片經(jīng)酸性高錳酸鉀、鹽酸乙醇褪色處理后,重新做HE染色。
免疫組化褪色后行HE染色是一種應(yīng)急措施,方法是否恰當(dāng)直接影響診斷質(zhì)量。其中,褪色劑的選擇非常重要,我們選用酸性高錳酸鉀作為褪色劑,其原理是高錳酸鉀可以氧化DAB上的-NH2,從而破壞辣根過氧化物酶催化DAB形成的色基沉淀物的結(jié)構(gòu)[2];而1%鹽酸乙醇不僅可以去除組織上多余的酸性高錳酸鉀溶液,而且還能去除免疫組化陽性部位的棕黃色顆粒,因而經(jīng)兩種溶液處理后的組織切片處于偏中性環(huán)境,有利于著色。在以往褪色劑的選用上,通常會選
用酸性高錳酸鉀氧化-草酸漂白的方法。但基層醫(yī)院缺少草酸的情況時有發(fā)生,且在氧化漂白過程中,不恰當(dāng)?shù)牟僮骷白饔脮r間會使組織略帶酸性,破壞組織的正常結(jié)構(gòu),形成空洞和脫落[3]。因酸能破壞蘇木精的醌型結(jié)構(gòu),使色素與組織分離[4],常發(fā)生組織著色能力偏弱的問題。而1%鹽酸乙醇正好解決了以上問題,其具有方法簡單、配置方便的特點(diǎn),且在實(shí)驗過程中不用刻意掌握時間,組織漂白后在顯微鏡下觀察顏色即可。
綜上所述,該方法能夠用于免疫組化褪色再行HE染色,重染的教學(xué)和交流切片可以得到滿意的效果,且操作方法簡便,適用于基層醫(yī)院的推廣。
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浙江省紹興市婦幼保健院病理科,紹興 312000
魯 波,男,主管技師。Tel:(0575)85206747,E-mail: pipilubo2014@163.com
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1001-7399(2017)03-0341-02
10.13315/j.cnki.cjcep.2017.03.029
時間:2017-3-16 14:23
http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170316.1423.030.html
接受日期:2017-01-05