免疫組化切片褪色再染HE方法探討

魯 波，包 磊，任麗芳，沈 寅，張 鵬，錢潔芳

免疫組化切片褪色再染HE方法探討

魯 波，包 磊，任麗芳，沈 寅，張 鵬，錢潔芳

免疫組織化學(xué)；褪色；再染

隨著人們生活水平的日益提高以及醫(yī)療條件的不斷改善，病理切片向高等級醫(yī)院會診也越來越多，患者不及時歸還HE切片及組織蠟塊的情況也時有發(fā)生，病理檔案資料僅存有一些免疫組化切片，如果想把此病例作為教學(xué)和學(xué)術(shù)交流將難以進(jìn)行。我們通過反復(fù)試驗，摸索出一種將免疫組化標(biāo)記褪色后，重新進(jìn)行HE染色的病理技術(shù)，現(xiàn)介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料 收集2015～2016年紹興市婦幼保健院病理科已經(jīng)做了免疫組化切片的10例標(biāo)本。

1.2 試劑 褪色劑為0.5%酸性高錳酸鉀，1%鹽酸乙醇，HE試劑為自配的蘇木精和伊紅染液。

1.3 方法

1.3.1 免疫組化標(biāo)記切片褪色為白片 將免疫組化標(biāo)記切片放入二甲苯中浸泡，去除蓋玻片和中性樹膠，梯度乙醇脫二甲苯入水，蒸溜水洗，入0.5%酸性高錳酸鉀水溶液氧化1～20 min，蒸餾水洗凈后入1%鹽酸乙醇漂白。此時還不能將切片中的顏色全部褪去，需晾干后再放入1%鹽酸乙醇中漂白，反復(fù)數(shù)次，即可將免疫組化標(biāo)記的棕黃色顆粒全部去掉，待組織完全變白后顯微鏡下觀察褪色效果，然后水洗。在褪色過程中要嚴(yán)防損壞組織切片，褪色徹底是重染HE的前提條件[1]。

1.3.2 HE染色 將漂白的免疫組化切片放入水中反復(fù)沖洗干凈，浸入蘇木精染液8 min，自來水洗，溫水返藍(lán)1 min，入伊紅染液1 min水洗，梯度乙醇分化，二甲苯透明，中性樹膠封固，鏡下觀察。

2 結(jié)果

10例免疫組化切片經(jīng)0.5%酸性高錳酸鉀、1%鹽酸乙醇多次分化后，褪色徹底，無掉片及組織缺損情況，顯微鏡下觀察無任何顏色，再行HE染色后，與原HE染色基本一致，形態(tài)結(jié)構(gòu)清楚，組織染色均勻(圖1、2)，再染效果良好。

①②

圖1 原免疫組化鏡下所見：陽性細(xì)胞定位準(zhǔn)確，無特異性染色，Ki-67(異型腺體20%陽性)，核呈棕褐色著色 圖2 褪色后行HE染色鏡下所見：小塊子宮頸黏膜組織，腺體結(jié)構(gòu)紊亂，異型增生，腺上皮單層或假復(fù)層，核大小不一，異性深染，胞質(zhì)嗜伊紅，間質(zhì)疏松，并有少量炎細(xì)胞浸潤

3 討論

日常病理工作中，會遇到以下情況。(1)患者不及時歸還HE切片及組織蠟塊，病理檔案資料僅存一些免疫組化切片。(2)有些子宮頸活檢組織標(biāo)本小，常規(guī)HE和免疫組化后組織所剩不多，難以再行切片。(3)鏡下有時會發(fā)現(xiàn)免疫組化切片中的病灶不同于原HE切片，需重新觀察其病變情況。由于無剩余切片，本實(shí)驗將免疫組化標(biāo)記的切片經(jīng)酸性高錳酸鉀、鹽酸乙醇褪色處理后，重新做HE染色。

免疫組化褪色后行HE染色是一種應(yīng)急措施，方法是否恰當(dāng)直接影響診斷質(zhì)量。其中，褪色劑的選擇非常重要，我們選用酸性高錳酸鉀作為褪色劑，其原理是高錳酸鉀可以氧化DAB上的-NH2，從而破壞辣根過氧化物酶催化DAB形成的色基沉淀物的結(jié)構(gòu)[2]；而1%鹽酸乙醇不僅可以去除組織上多余的酸性高錳酸鉀溶液，而且還能去除免疫組化陽性部位的棕黃色顆粒，因而經(jīng)兩種溶液處理后的組織切片處于偏中性環(huán)境，有利于著色。在以往褪色劑的選用上，通常會選

用酸性高錳酸鉀氧化-草酸漂白的方法。但基層醫(yī)院缺少草酸的情況時有發(fā)生，且在氧化漂白過程中，不恰當(dāng)?shù)牟僮骷白饔脮r間會使組織略帶酸性，破壞組織的正常結(jié)構(gòu)，形成空洞和脫落[3]。因酸能破壞蘇木精的醌型結(jié)構(gòu)，使色素與組織分離[4]，常發(fā)生組織著色能力偏弱的問題。而1%鹽酸乙醇正好解決了以上問題，其具有方法簡單、配置方便的特點(diǎn)，且在實(shí)驗過程中不用刻意掌握時間，組織漂白后在顯微鏡下觀察顏色即可。

綜上所述，該方法能夠用于免疫組化褪色再行HE染色，重染的教學(xué)和交流切片可以得到滿意的效果，且操作方法簡便，適用于基層醫(yī)院的推廣。

[1] 劉海芳. HE褪色后的免疫組化染色[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)生, 2011,49(17):81-82.

[2] 康佳蕊，楊 毅，王宏偉. 免疫組化標(biāo)記切片再行HE染色方法介紹[J]. 感染、炎癥、修復(fù), 2011,12(1):49-50.

[3] 李 璐. 蘇木素-伊紅染色切片褪色解決方法[J]. 實(shí)用醫(yī)技雜志, 2010,11(17):1079.

[4] 王伯沄，李玉松，黃高昇，等. 病理學(xué)技術(shù)[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社, 2000:129.

浙江省紹興市婦幼保健院病理科，紹興 312000

魯 波，男，主管技師。Tel:(0575)85206747，E-mail: pipilubo2014@163.com

R 446.8

B

1001-7399(2017)03-0341-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.03.029

時間：2017-3-16 14:23

http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170316.1423.030.html

接受日期：2017-01-05