芎芷地龍湯不同時(shí)間預(yù)防給藥對(duì)偏頭痛動(dòng)物模型iNOS mRNA、c-fos mRNA表達(dá)的影響*

趙永烈王永麗胡 坤岳廣欣王玉來(lái)

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院，北京 100078；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，北京 100029；3.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院，北京 100053）

·研究報(bào)告·

芎芷地龍湯不同時(shí)間預(yù)防給藥對(duì)偏頭痛動(dòng)物模型iNOS mRNA、c-fos mRNA表達(dá)的影響*

趙永烈1，2王永麗2胡 坤2岳廣欣3王玉來(lái)1

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院，北京 100078；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，北京 100029；3.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院，北京 100053）

目的 觀察芎芷地龍湯不同時(shí)間預(yù)給藥對(duì)偏頭痛動(dòng)物模型iNOS mRNA、c-fos mRNA表達(dá)的影響。方法 將健康雄性SD大鼠36只，隨機(jī)分為0.9%氯化鈉注射液組（6只）、模型組（6只）、舒馬普坦組（6只）、中藥1 d預(yù)給藥組（6只），中藥3 d預(yù)給藥組（6只）、中藥7 d預(yù)給藥組（6只），按照預(yù)定給藥，造模結(jié)束后2 h取材，real-time PCR法測(cè)定三叉神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)脊束核丘腦、硬腦膜c-fos mRNA、iNOS mRNA表達(dá)情況。結(jié)果 與0.9%氯化鈉注射液組比較，模型組iNOS mRNA在三叉神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)脊束核、硬腦膜表達(dá)水平明顯升高，在丘腦表達(dá)水平明顯降低（P＜0.01），給藥干預(yù)后，三叉神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)脊束核、硬腦膜iNOS mRNA表達(dá)水平均降低，其中以預(yù)防給藥7日組和舒馬普坦組明顯降低（P＜0.01）；丘腦iNOS mRNA表達(dá)水平有所升高，但各組與模型組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與0.9%氯化鈉注射液組比較，模型組c-fos mRNA在三叉神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)脊束核表達(dá)水平明顯升高，在丘腦、硬腦膜表達(dá)水平降低；給藥干預(yù)后，c-fos mRNA在三叉神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)脊束核表達(dá)水平降低，以預(yù)防給藥7 d組和舒馬普坦組降低明顯（P＜0.05或P＜0.01）；c-fos mRNA在丘腦、硬腦膜表達(dá)水平升高，其中以預(yù)防給藥7 d組和舒馬普坦組升高幅度顯著（P＜0.05）。結(jié)論 芎芷地龍湯預(yù)防給藥可以減少NTG誘發(fā)的三叉神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)脊束核c-fos mRNA、i-NOS mRNA表達(dá)，可以減少硬腦膜iNOS mRNA表達(dá)，而以預(yù)防給藥7 d效果好于預(yù)防給藥3 d、1 d。

偏頭痛 芎芷地龍湯 預(yù)防給藥 iNOS mRNA c-fosmRNA

偏頭痛是一種反復(fù)發(fā)作的神經(jīng)功能障礙性疾病，為具有多種神經(jīng)系統(tǒng)和非神經(jīng)系統(tǒng)表現(xiàn)的綜合征。世界衛(wèi)生組織把嚴(yán)重的偏頭痛、癱瘓、精神障礙、癡呆列為最嚴(yán)重的慢性神經(jīng)功能障礙性疾病。有關(guān)偏頭痛的治療根據(jù)其發(fā)作的過(guò)程，可分為發(fā)作期治療和預(yù)防性治療，對(duì)于患者本身來(lái)說(shuō)，偏頭痛的預(yù)防性治療是十分重要的治療方法。早在《黃帝內(nèi)經(jīng)》中就提出治未病的思想，如《素問(wèn)·四氣調(diào)神大論》所言“圣人不治已病治未?。徊恢我褋y治未亂……夫病已成而后藥之，亂已成而后治之，譬如渴而穿井，斗而鑄錐，不亦晚乎”。因此對(duì)于偏頭痛的預(yù)防性治療的研究是我們應(yīng)重點(diǎn)研究的問(wèn)題。

前期我們觀察了應(yīng)用芎芷地龍湯1 d、3 d、7 d預(yù)防給藥對(duì)偏頭痛模型痛閾及血管活性物質(zhì)的影響［1］。為進(jìn)一步明確芎芷地龍湯對(duì)偏頭痛的預(yù)防治療機(jī)理，本實(shí)驗(yàn)擬研究芎芷地龍湯不同時(shí)間點(diǎn)預(yù)防給藥后，三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)中三級(jí)神經(jīng)元中iNOS；c-fos mRNA表達(dá)情況。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)成年雄性SD大鼠，體質(zhì)量（200±20）g；由維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供。動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（京）2012-0001。

1.2 藥劑與儀器 芎芷地龍湯（川芎、白芷、生石膏、地龍、延胡索）由北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院制劑室提取（每毫升含生藥2.0 g）；硝酸甘油注射液，5 mg/mL，北京益民藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；琥珀酸舒馬普坦片，25 mg/片，海南先聲藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；DEPC（焦碳酸二乙酯），購(gòu)于北京欣經(jīng)科生物技術(shù)有限公司；氯仿（三氯甲烷），購(gòu)于北京化工廠；異丙醇，購(gòu)于無(wú)錫縣化學(xué)試劑廠；TRIZOL Reagent（Invitrogen）；High Pure RNA Tissue Kit（Roche REF12033674001）；Go Taq 2-Step RT-qPCRsystem（Promega A6010）；Go TaqqPCR Master Mix（Promega A6002）。手持電動(dòng)勻漿器（KONTES）；高速低溫離心機(jī)（SIGMA 3K15）；分光光度計(jì)（Nano Vue plus）；三用電子恒溫水箱（SHH.W21北京中興偉業(yè)器儀有限公司）；恒溫震蕩金屬?。˙ioer，MB-102）；PCR儀（Bio-RAD CFX96 Real-Time System）。

1.3. 分組 SD大鼠隨機(jī)分為6組：0.9%氯化鈉注射液對(duì)照組（Saline）、偏頭痛模型組（Migraine）、舒馬普坦組（Sumatriptan）、芎芷地龍湯1 d預(yù)給藥組（1 d XZDLT）、芎芷地龍湯3 d預(yù)給藥組（3 d XZDLT）、芎芷地龍湯7 d預(yù)給藥組（7 d XZDLT）。

1.4 造模及給藥 Saline組：給予10 mL/kg 0.9%氯化鈉注射液灌胃（1 d，3 d，7 d），普通飼養(yǎng)，灌胃30 min后頸背部皮下注射2 mL/kg 0.9%氯化鈉注射液。Migraine組：給予10 mL/kg 0.9%氯化鈉注射液灌胃，末次灌胃30 min后頸背部皮下注射10 mg/kg（5 mg/mL）硝酸甘油。芎芷地龍湯組：其他處理同偏頭痛模型組，給予10.8 mL/kg芎芷地龍湯灌胃（1 d，3 d，7 d），末次灌胃30 min后頸背部皮下注射10 mg/kg（5 mg/mL）硝酸甘油。Sumatriptan組：其他處理同偏頭痛模型組，給予琥珀酸舒馬普坦6 mg/kg灌胃，灌胃30 min后頸背部皮下注射10 mg/kg（5 mg/mL）硝酸甘油。

1.5 取材 于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后2 h，用2%戊巴比妥鈉腹腔注射進(jìn)行深度麻醉（40 mg/kg），迅速斷頭，在超凈臺(tái)內(nèi)冰上取腦，分別剝離出丘腦，三叉神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)脊束核、硬腦膜分別放入1.5 mL滅菌的離心管中，埋入液氮中迅速冷凍，-70℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.6 觀察指標(biāo) 檢測(cè)各組iNOS和c-fos的mRNA表達(dá)，方法如下。1）總RNA的提取，按試劑盒（High Pure RNA Tissue Kit）說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格操作：盛有標(biāo)本組織的離心管中各加400 μL Trizol裂解細(xì)胞，之后依次加入適量氯仿、異丙醇、75%的預(yù)冷乙醇、DEPC水，分別純化、沉淀、洗滌、溶解總RNA。微量分光光度計(jì)測(cè)定RNA的濃度和純度。根據(jù)A260的值計(jì)算RNA濃度（單位：μg/μL），并根據(jù)A260/A280比值計(jì)算其純度，要求為1.8～2.0，比值低于1.6者棄去。2）逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（RT）步驟。按試劑盒說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格操作，20 μL反應(yīng)體系，步驟如下，取1.5 mL離心管配制模板，加入RNA 11 μL，引物（Random Primer）1 μL，加入總RNA量1.1 μg；放入震蕩型恒溫金屬浴，70℃，5 min，迅速轉(zhuǎn)至冰上至少1 min；離心使液體收集于管底，加入5×Reaction buffer 4 μL，Mgcl225 mM 2 μL，PCR，Nucleotide Mix 10 mM 1 μL，RNase Inhibitor 0.5 μL，GoScrpt RT 0.5 μL；RNA引物混合液12 μL與逆轉(zhuǎn)錄混合液8 μL充分混合，放入震蕩型恒溫金屬浴，25℃ 5 min，放入三用恒溫電子水箱，42℃1 h，放入震蕩型恒溫金屬浴，70℃15 min，冷卻；立即PCR反應(yīng)，放入-20℃冰箱保存。3）PCR引物設(shè)計(jì)。根據(jù)Genebank的序列和文獻(xiàn)參考，設(shè)計(jì)c-fos、iNOS、GAPDH的引物序列。引物委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成。引物序列如下。c-fos-F：5′-GGGAGCTGACAGATACGCTC-3′。c-fos-R：5′-TCAAGTCCAGGGAGGTCACA-3′。擴(kuò)增長(zhǎng)度：195 bp。iNOS-F：5′-AACCCAAGGTCTACGTTCAAG-3′，iNOS-R：5′-AAAGTGGTAGCCACATCCCG-3′。擴(kuò)增長(zhǎng)度：133 bp。GAPDH-F：5′-GTTACCAGGGCT GCCTTCTC-3′。GAPDH-R：5′-GATGGTGATGGGTTT CCCGT-3′。擴(kuò)增長(zhǎng)度：177 bp。4）實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real-time PCR）。取等量的RT反應(yīng)產(chǎn)物，分別擴(kuò)增c-fos、iNOS、GAPDH基因。5倍稀釋RT反應(yīng)產(chǎn)物 cDNA：Nuclease-Free Water 40 μL，cDNA原液10 μL。real-time PCR體系：（20 μL反應(yīng)體系）：cDNA稀釋液，4 μL，primer F（20 pmol/μL），0.5 μL，primer R（20 pmol/μL），0.5 μL，Mix，10 μL，加Nuclease-Free Water至20 μL；輕輕混勻，2000 r/min離心20 s后進(jìn)行PCR擴(kuò)增；在95℃30 s，95℃10 s，60℃30 s，15℃30 s下擴(kuò)增共40個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，讀取每份樣品中的相應(yīng)目的基因的Ct值，減去GAPDH的Ct值，得出相對(duì)Ct值作為n值，再作1/2^n運(yùn)算，得到每份樣品中目的基因的相對(duì)表達(dá)量即 Qμantity（目的基因/ GAPDH），校正后得到每份樣品中目的基因c-fos、iNOS的相對(duì)表達(dá)量。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。計(jì)量資料以（±s）表示。采用單因素方差分析（ANOVA）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，組間比較采用LSD-t檢驗(yàn)。運(yùn)用SigmaPlot 13.0繪制統(tǒng)計(jì)圖。P＜0.05為差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的界限。

2 結(jié) 果

2.1 應(yīng)用real-time PCR方法檢測(cè)大各組大鼠鼠三叉神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)脊束核、丘腦、硬腦膜的iNOS mRNA的表達(dá) 見(jiàn)表1。注射硝酸甘油后Migraine組iNOS mRNA在三叉神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)脊束核、硬腦膜表達(dá)水平明顯升高，在丘腦表達(dá)水平明顯降低，與Saline組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），給藥干預(yù)后三叉神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)脊束核、硬腦膜iNOS mRNA表達(dá)水平均降低，其中以預(yù)防給藥7 d組和舒馬普坦組降低明顯（P＜0.01）；給藥干預(yù)后，丘腦iNOS mRNA表達(dá)水平有所升高，但各組與Migraine組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 應(yīng)用real-time PCR方法檢測(cè)各組大鼠三叉神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)脊束核、丘腦、硬腦膜的c-fos mRNA的表達(dá) 見(jiàn)表2。注射硝酸甘油后Migraine組c-fos mRNA在三叉神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)脊束核表達(dá)水平明顯升高，與Saline組比較 （P＜0.01，三叉神經(jīng)節(jié)），（P＜0.05，三叉神經(jīng)脊束核）；在丘腦、硬腦膜表達(dá)水平降低，與Saline組比較（P＜0.05，丘腦），（P＜0.01，硬腦膜）；給藥干預(yù)后，c-fos mRNA在三叉神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)脊束核表達(dá)水平降低，以7 d XZSGT組和Sumatriptan組降低明顯（P＜0.01）；給藥干預(yù)后，c-fos mRNA在丘腦、硬腦膜表達(dá)水平升高，其中以7 d XZSGT組和Sumatriptan組升高水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 各組大鼠不同組織中iNOS mRNA表達(dá)情況（±s）

表1 各組大鼠不同組織中iNOS mRNA表達(dá)情況（±s）

與Migraine組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與Saline組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

組別 n Saline 6 Migraine 6 1 d XZSGT 6三叉神經(jīng)節(jié) 三叉頸復(fù)合體 丘腦 硬腦膜0.9167±0.06059**0.8267±0.06576**1.1067±0.04185**0.8917±0.07587**1.5433±0.14205△△1.3583±0.09148△△0.7383±0.04729△△1.3517±0.09810△△1.3750±0.12044△1.2167±0.10822△△0.9167±0.07706 1.1367±0.04417**3 d XZSGT 6 1.2333±0.10938 1.0450±0.08314**0.7433±0.34556 0.8733±0.03955**7 d XZSGT 6 1.0167±0.13478**0.5383±0.06789**△1.0617±0.07337 0.7200±0.14000**Sumatriptan 6 0.9583±0.13295**0.4483±0.02442**1.1383±0.09235 0.7050±0.10158**

表2 各組大鼠不同組織中c-fos mRNA表達(dá)情況（±s）

表2 各組大鼠不同組織中c-fos mRNA表達(dá)情況（±s）

組別 n Saline 6 Migraine 6 1 d XZSGT 6三叉神經(jīng)節(jié) 三叉頸復(fù)合體 丘腦 硬腦膜0.9117±0.12240**0.9800±0.04195**1.0417±0.04571*1.0300±0.17043**1.4900±0.11978△△1.3983±0.13016△0.6917±0.07670△0.5533±0.09922△△1.3150±0.17318△1.1133±0.10484 0.8117±0.09192 0.7900±0.07465 3 d XZSGT 6 1.2200±0.14189 1.1050±0.17291 0.8933±0.15132 0.8350±0.07693 7 d XZSGT 6 0.8433±0.04410**1.0067±0.08019**0.9983±0.10403*0.8767±0.08114**Sumatriptan 6 0.9167±0.07614**0.9500±0.13051**1.0550±0.09226*0.9250±0.11523**

3 討 論

偏頭痛的病理生理機(jī)制復(fù)雜，近年研究認(rèn)為，偏頭痛發(fā)生相關(guān)的解剖結(jié)構(gòu)是三叉神經(jīng)血管系［2-4］。三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)包括三級(jí)神經(jīng)元：一級(jí)神經(jīng)元是接受源自硬腦膜血管傳入沖動(dòng)的三叉神經(jīng)節(jié)（TG），它將沖動(dòng)繼續(xù)傳至二級(jí)神經(jīng)元——三叉神經(jīng)尾核（TNC）及Cl，C2節(jié)段的脊髓后角表淺層，兩者共同構(gòu)成三叉頸復(fù)合體（TCC）。二級(jí)神經(jīng)元再將沖動(dòng)傳導(dǎo)至丘腦的三級(jí)神經(jīng)元。因此研究三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)中三級(jí)神經(jīng)元的激活狀態(tài)在偏頭痛發(fā)病的研究中具有重要的意義。

NO被認(rèn)為是在偏頭痛發(fā)病過(guò)程中起至關(guān)重要作用的一種活性分子，它既可以通過(guò)擴(kuò)張硬腦膜等部位的血管激活三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)，又可以作為信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子傳導(dǎo)痛覺(jué)，還可以促使腦干中的TNC神經(jīng)元出現(xiàn)痛覺(jué)過(guò)敏［5］。同時(shí)，一些研究者證實(shí)給予偏頭痛患者NO合酶（NOS）抑制劑可緩解偏頭痛的發(fā)作［6］。NO體內(nèi)供體包括鈣/鈣調(diào)蛋白依賴(lài)的結(jié)構(gòu)型NOS（eNOS，nNOS）以及不依賴(lài)Ca的誘導(dǎo)型NOS（iNOS）［7-8］，iNOS只有當(dāng)受到一定程度的刺激時(shí)才發(fā)揮作用，也是內(nèi)源性NO的主要來(lái)源。在體內(nèi)NO釋放可擴(kuò)張腦膜血管［9］并激活神經(jīng)元［10］，進(jìn)而增加痛覺(jué)的傳導(dǎo)，導(dǎo)致中樞敏化［11-12］。NO信號(hào)傳導(dǎo)激活可溶性鳥(niǎo)苷環(huán)化酶（sGC）產(chǎn)生環(huán)鳥(niǎo)苷酸（cGMP），進(jìn)而引起蛋白激酶的磷酸化。而蛋白激酶是重要的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)分子，是作為第二信使通路與c-fos（即早基因蛋白表達(dá)）偶聯(lián)，被廣泛應(yīng)用作為神經(jīng)元和痛覺(jué)激活的標(biāo)志，在調(diào)節(jié)疼痛中發(fā)揮著重要的作用［13］。c-fos蛋白的表達(dá)已被廣泛用于識(shí)別神經(jīng)元激活區(qū)域，并研究傷害性刺激與神經(jīng)的相關(guān)性［14］，三叉神經(jīng)脊束核尾側(cè)亞核（TNC）c-fos蛋白表達(dá)的增加，可以作為三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)激活的標(biāo)志［15］。最近相關(guān)研究報(bào)道，由硝酸甘油誘發(fā)的小鼠偏頭痛模型表現(xiàn)為對(duì)熱和機(jī)械刺激敏化［16-17］，同時(shí)三叉神經(jīng)脊束核尾側(cè)亞核c-fos達(dá)增加［16，18］。

本實(shí)驗(yàn)研究觀察到，注射硝酸甘油后，c-fos mRNA在三叉神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)脊束核表達(dá)水平明顯升高，與既往研究結(jié)果相一致［19-21］；給藥干預(yù)后，c-fos mRNA在三叉神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)脊束核表達(dá)水平降低，以7 d XZSGT組和Sumatriptan組降低明顯。注射硝酸甘油后iNOS mRNA在三叉神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)脊束核、硬腦膜表達(dá)水平明顯升高，與既往研究結(jié)果［21-22］及相關(guān)研究相一致［23-24］，給藥干預(yù)后三叉神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)脊束核、硬腦膜iNOS mRNA表達(dá)水平均降低，其中以預(yù)7 d XZSGT組和Sumatriptan組降低明顯。而在丘腦，c-fos mRNA和iNOS mRNA的表達(dá)與三叉神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)脊束核中表達(dá)不一致，可能與丘腦復(fù)雜的功能有關(guān)，因丘腦是感覺(jué)傳導(dǎo)的接替站，偏頭痛反復(fù)發(fā)作的過(guò)程中，頭痛的感覺(jué)傳導(dǎo)通路需要更為頻繁地通過(guò)丘腦完成中繼，并投射到大腦皮層中，丘腦在偏頭痛患者的疼痛處理中的重要性反映在復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)上就是較大的介數(shù)中心度［25］，可能在偏頭痛復(fù)雜感覺(jué)傳遞過(guò)程中，丘腦起著調(diào)節(jié)作用。

綜上所述，芎芷地龍湯預(yù)防給藥可以減少NTG誘發(fā)的三叉神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)脊束核c-fos mRNA、iNOS mRNA表達(dá)，可以減少硬腦膜iNOS mRNA表達(dá)，而以預(yù)防給藥7 d效果好于預(yù)防給藥3 d、1 d。

［1］ 趙永烈，劉金民，岳廣欣，等.芎芷地龍湯不同時(shí)間預(yù)防給藥對(duì)偏頭痛動(dòng)物模型痛閾及血管活性物質(zhì)的影響［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2016，44（5）：28-35.

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Effect of Xiongzhi Dilong Decoction Preadministration at Different Time on iNOS mRNA，c-fos mRNA Expression in Migraine Animal

ZHAO Yonglie，WANG Yongli，HU Kun，et al. Dongfang Hospital，BeijingUniversity of Traditional Chinese Medicine，Beijing 100078，China.

Objective：To study the effect of Xiongzhi Dilong decoction preadministration at different time on i-NOS mRNA，c-fos mRNA expression in migraine animal.Methods：36 healthy male SD rats were randomly divided into six groups：saline group（n＝6），migraine model group（n＝6），sumatriptan group（n＝6），1 day preadministration group（n＝6），3 day preadministration group（n＝6），7 day preadministration group（n＝6）.The drug was administered according to different groups，tissues were collected after subcutaneous injection of corresponding drug given 2h later.The c-fos mRNA，iNOS mRNA expression in trigeminal ganglion，spinal trigeminal nucleus，thalamus，dura mater was assayed by real-time PCR method.Results：Compared with saline group，the iNOS mRNA expression in trigeminal ganglion，spinal trigeminal nucleus，dura mater increased significantly，and the iNOS mRNA expression in thalamus decreased significantly in the model group（P＜0.01）；after the drug intervention，the iNOS mRNA expression in trigeminal ganglion，spinal trigeminal nucleus，dura mater was decreased，and the preadministration of 7days group and sumatriptan group decreased significantly（P＜0.01）.The iNOS mRNA expression in thalamus was increased，but there were no statistical significance compared with the model group（P＞0.05）.Compared with saline group，the c-fos mRNA expression increased significantly in trigeminal ganglion（P＜0.01），and spinal trigeminal nucleus（P＜0.05），and the c-fos mRNA expression decreased significantly in thalamus（P＜0.05）and dura mater（P＜0.01）；after the drug intervention，the c-fos mRNA expression in trigeminal ganglion，spinal trigeminal nucleus was decreased，and the preadministration of 7days group and sumatriptan group decreased significantly（P＜0.01）.The c-fos mRNA expression in thalamus and dura mater was increased，and theresults in the preadministration of 7days group and sumatriptan group were statistically significant（P＜0.05）. Conclusion：Preadministration of Xiongzhi Dilong decoction can reduce the c-fos mRNA，iNOS mRNA expression in trigeminal ganglion，spinal trigeminal nucleus which were induced by NTG，and can reduce the iNOS mRNA expression in dura mater.The prevention of preadministration of 7 days is better than the prevention of preadministration of 3 days and 1 day.

Migraine animal model；Xiongzhi Dilong decoction；Preadministration；iNOS mRNA；c-fos mRNA

R285.5

A

1004-745X（2017）04-0568-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.04.002

2016-12-29）

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81373591）