電針“足三里”“腎俞”穴對(duì)T2DM大鼠GLUT2、GCK的影響

賈 寧 李 瑞 曹昺焱 田環(huán)環(huán) 胡曉剛 馬艷佳 王躍穎

(北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院,北京,100029)

電針“足三里”“腎俞”穴對(duì)T2DM大鼠GLUT2、GCK的影響

賈 寧 李 瑞 曹昺焱 田環(huán)環(huán) 胡曉剛 馬艷佳 王躍穎

(北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院,北京,100029)

目的:探討電針不同穴位對(duì)2型糖尿病大鼠的療效差異及其機(jī)制。方法:40只雄性SD大鼠隨機(jī)選取8只作為空白組,其余大鼠予高糖高脂飼料喂養(yǎng)50 d后,按35 mg/kg質(zhì)量比腹腔注射2%鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)溶液進(jìn)行T2DM造模,并將造模成功的32只大鼠隨機(jī)分為模型組、電針足三里組、電針腎俞組、格列美脲灌胃組,每組8只。各電針組分別取雙側(cè)“足三里”“腎俞”穴進(jìn)行電針治療,電針參數(shù)為2 Hz,2 mA連續(xù)波20 min/次,1次/d,6 d/周,連續(xù)4周。于干預(yù)前及干預(yù)后,檢測(cè)各組大鼠灌胃前空腹血糖(Fasting Blood Glucose,FBG)、體質(zhì)量及OGTT實(shí)驗(yàn)。末次干預(yù)結(jié)束,處死大鼠取血,取胰腺組織,采用放免法測(cè)血清胰島素(FINS),計(jì)算胰島素分泌指數(shù)(HOMA-B),Real-time PCR檢測(cè)胰腺中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-2(Glucose Transporter-2,GLUT2)、葡萄糖激酶(Glucokinase,GCK)的mRNA表達(dá)水平,HE染色觀察胰腺的形態(tài)變化。結(jié)果:干預(yù)4周后,除空白組體質(zhì)量顯著增加(P<0.01),其余各組體質(zhì)量均顯著減輕(P<0.01);模型組FBG顯著高于干預(yù)前、空白組(P<0.01),格列美脲灌胃組顯著低于模型組(P<0.01),兩電針組比較模型組均有下降趨勢(shì)(P>0.05);葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)(Oralglucose Tolerance,OGTT)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與FBG同步;電針足三里組、格列美脲灌胃組FINS顯著低于空白組、模型組及電針腎俞組(P<0.01);模型組HOMA-B顯著低于空白組(P<0.01),各干預(yù)組比較模型組均有上升趨勢(shì)(P>0.05);模型組GLUT2的mRNA表達(dá)水平顯著低于空白組(P<0.01),電針足三里組、電針腎俞組顯著高于模型組(P<0.05,P<0.01);模型組GCK的mRNA表達(dá)水平顯著低于空白組(P<0.01),各干預(yù)組均顯著高于模型組(P<0.01,P<0.05),且電針足三里組顯著高于格列美脲灌胃組(P<0.01)。HE染色:模型組胰島邊界不清,體積明顯變小,胰島細(xì)胞數(shù)量減少且排列雜亂,細(xì)胞腫脹、壞死,可見細(xì)胞空泡變性。3個(gè)干預(yù)組與模型組比較,有不同程度的改善,胰島邊界較模型組清晰,體積增大,胰島內(nèi)細(xì)胞數(shù)量增加,排列也較均勻,細(xì)胞空泡變性減少。結(jié)論:電針足三里、腎俞穴可能是通過上調(diào)GLUT2、GCK mRNA的表達(dá)水平而改善T2DM大鼠的胰島B細(xì)胞的分泌功能、保護(hù)胰島B細(xì)胞的形態(tài)、降低FINS水平,其中足三里穴的效果更優(yōu)。

2型糖尿病;電針;足三里穴;腎俞穴;GLUT2;GCK

2型糖尿病(Type 2 Diabetes Melitus,T2DM)是以慢性高血糖為特征的一組異質(zhì)性代謝性疾病,其高發(fā)病率和高致殘率[1-2]造成了很大的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),迫切需要有效的治療手段。研究表明[3-5]針灸療法不僅可以降血糖,改善糖尿病癥狀,還可以改善糖尿病胃輕癱、糖尿病周圍神經(jīng)病等并發(fā)癥,具有廣泛的應(yīng)用前景。

近年來研究表明[6-8],胰島素抵抗可能不是T2DM的唯一致病因素,無糖尿患者群也存在胰島素抵抗,而胰島B細(xì)胞功能的衰退則總伴有高血糖出現(xiàn),說明胰島B細(xì)胞的異?？赡苁荰2DM發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。同時(shí)研究亦指出[9]針灸治療2型糖尿病在降低血糖的同時(shí),又能夠改善胰島B細(xì)胞分泌胰島素的功能,但其起效的具體機(jī)制尚不明確。研究指出GLUT2和GCK作為“葡萄糖感受器”與葡萄糖刺激胰島B分泌胰島素密切相關(guān)[10-12]。有鑒于此,本實(shí)驗(yàn)基于胰島B細(xì)胞功能異常這一發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié),通過觀察電針對(duì)T2DM大鼠胰島B細(xì)胞中葡萄糖代謝調(diào)節(jié)因子GLUT2和GCK的影響,旨在探索針刺干預(yù)T2DM的可能機(jī)制,為針刺治療T2DM提供科學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 40只清潔級(jí)雄性SD大鼠,體質(zhì)量(155±5)g,購于斯貝福(北京)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司(許可證號(hào):SCXK(京)2011-004),于室溫23 ℃,空氣流通,相對(duì)濕度60%,12 h循環(huán)光照的條件下飼養(yǎng)。飼料購自北京華阜康生物科技股份有限公司,許可證號(hào):SCXK(京)2014-0008。

1.1.2 分組與模型制備 所有動(dòng)物于1周適應(yīng)性飼養(yǎng)后,隨機(jī)抽取8只為空白組,并予普通飼料喂養(yǎng)。其余動(dòng)物參考文獻(xiàn)[13]并改進(jìn),制備T2DM模型。具體方法為:以高糖高脂飼料(含70%普通飼料、10%豬油、10%蔗糖、10%蛋黃粉)喂養(yǎng)50 d后,按35 mg/kg質(zhì)量比腹腔注射2% STZ溶液(溶劑為pH值4.2～4.5,濃度0.1 mol/L的檸檬酸、檸檬酸鈉混合液。注射需在30 min內(nèi)完成,且越快越好,操作均在冰浴中進(jìn)行)。參考文獻(xiàn)[14-15]并改進(jìn),注射STZ 72 h后尾靜脈取血測(cè)FBG,1周后對(duì)注射STZ 72 h FBG≥11.1 mmol/L的大鼠行OGTT,2 h后血糖仍≥11.1 mmol/L的大鼠納入后續(xù)實(shí)驗(yàn)。血糖<11.1 mmol/L的繼續(xù)喂養(yǎng)2周,待血糖降至正常水平,再次腹腔注射STZ 35 mg/kg,最終32只均達(dá)到成模標(biāo)準(zhǔn)。成模動(dòng)物按照空腹血糖值隨機(jī)區(qū)組分為模型組、電針足三里組、電針腎俞組、格列美脲灌胃組,每組8只。

1.1.3 干預(yù)方法 成模動(dòng)物自分組之日起仍以高糖高脂飼料喂養(yǎng),并進(jìn)行電針干預(yù)(1次/d,6 d/周,4周)。電針足三里組:與模型組同步、同法固定,以0.16 mm×7 mm中研太和無菌針灸針(Lot:031426),依據(jù)實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)[16]穴位定位,直刺雙側(cè)“后三里”穴(膝關(guān)節(jié)后外側(cè),腓骨小頭下約5 mm)4 mm,相當(dāng)于人的足三里,雙穴接通電針形成回路,電針參數(shù):2 Hz,2 mA連續(xù)波20 min(英迪KWD-808電針)。電針腎俞組:與模型組同步、同法固定,依據(jù)實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)[16]穴位定位,直刺雙側(cè)“腎俞”(第2腰椎棘突下兩旁)4 mm。每側(cè)穴位均與黏貼于同側(cè)后足上的,以0.9%氯化鈉溶液浸潤(rùn)的棉球形成電針回路,電針參數(shù)同上。格列美脲灌胃組:將化學(xué)純格列美脲以雙蒸水配成0.2 mg/mL溶液,將大鼠按體質(zhì)量(10 mL/kg)灌胃給藥,與電針干預(yù)同步?？瞻捉M:不干預(yù)。模型組:于鼠套中固定20 min,不干預(yù)。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法 末次干預(yù)行OGTT實(shí)驗(yàn)后,所有動(dòng)物禁食不禁水12 h過夜后稱量體質(zhì)量,并按體質(zhì)量30 mg/kg予戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉,以5 mL注射器腹主動(dòng)脈取血致死,將血液移至10 mL離心管,室溫靜置20 min后,4 ℃、3 000 r/min離心20 min提取血清,于冰浴狀態(tài)下取大鼠部分胰腺于波恩氏液中固定,另取部分大鼠胰腺組織于液氮中速凍后,-80 ℃冰箱中保存待檢。

1.2.4 一般情況 體質(zhì)量:在實(shí)驗(yàn)開始的前1 d、造模期間每周末、干預(yù)期間的每周末及干預(yù)結(jié)束后,對(duì)各組大鼠體質(zhì)量進(jìn)行稱量、記錄,觀察體質(zhì)量變化情況。FBG:在實(shí)驗(yàn)開始的前1 d、造模期間每周末、干預(yù)期間的每周末及干預(yù)結(jié)束后,對(duì)各組大鼠采用尾靜脈點(diǎn)刺取血,用羅氏血糖儀檢測(cè)大鼠空腹血糖水平。OGTT實(shí)驗(yàn)[17]:于開始干預(yù)前及末次干預(yù)后,按1 mL/100 g灌胃20%葡萄糖溶液,檢測(cè)灌胃30、60、120 min后血糖,并計(jì)算干預(yù)前OGTT曲線下面積(AUC-A)、干預(yù)4周后OGTT曲線下面積(AUC-B)。葡萄糖曲線下面積(AUC)=(血糖值0 min+血糖值30 min)×0.5/2+(血糖值30 min+血糖值60 min)×0.5/2+(血糖值60 min+血糖值120 min)×1/2。空腹胰島素(FINS):放免法測(cè)各組大鼠血清。胰島素分泌指數(shù)(HOMA-B)[18]:計(jì)算公式為:HOMA-B=20×FINS(mU/L)/[FBG(mmol/L)-3.5](%)。

1.2.5 形態(tài)學(xué)檢測(cè) HE染色:胰腺組織經(jīng)多聚甲醛溶液固定、石蠟包塊、切片、脫蠟等步驟后蘇木素-伊紅染色,光鏡下觀察各組胰島細(xì)胞形態(tài)。

1.2.6 Real-time PCR檢測(cè) 檢測(cè)胰腺中GLUT2、GCK mRNA表達(dá)水平,要點(diǎn)如下:將組織從-80 ℃冰箱中取出,TRizol一步法提取胰腺總RNA,嚴(yán)格按照PCR操作要求及Promega試劑盒說明書進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成cRNA,反應(yīng)條件:95 ℃預(yù)變性5 min,(95 ℃變性35 s,Tm:GLUT2 57 ℃,GCK 57 ℃,GADPH 55 ℃,退火35 s,72延伸35 s),32次循環(huán),凝膠圖像分析系統(tǒng)對(duì)RT-PCR產(chǎn)物電泳帶進(jìn)行密度分析,以GAPDH為內(nèi)參,計(jì)算GLUT2、GCK基因的相對(duì)表達(dá)量。

2 結(jié)果

造模前各組大鼠發(fā)育正常、生長(zhǎng)良好、反應(yīng)靈敏;造模后,造模各組大鼠逐漸出現(xiàn)精神萎靡、形體消瘦、攝食量、飲水量及排尿量明顯增多等糖尿病癥狀。

2.1 各組大鼠干預(yù)前、后體質(zhì)量、FBG比較 干預(yù)前,各組大鼠體質(zhì)量比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。干預(yù)4周后,各干預(yù)組體質(zhì)量比較正常組,均顯著減輕(P<0.01),模型組體質(zhì)量雖有所減輕,但差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);造模各組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與同組干預(yù)前比較,空白組體質(zhì)量顯著增加(P<0.01),其余各組體質(zhì)量均顯著減輕(P<0.01)。干預(yù)前,造模各組FBG均顯著高于空白組(P<0.01),且模型組與各干預(yù)組血糖比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。干預(yù)4周后,模型組顯著高于空白組(P<0.01);格列美脲灌胃組顯著低于模型組(P<0.01);電針腎俞組、電針足三里組FBG有下降趨勢(shì),且與格列美脲灌胃組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與同組干預(yù)前比較,模型組FBG顯著升高(P<0.01),各干預(yù)組血糖變化不顯著(P>0.05)。見表1。

表1 各組大鼠干預(yù)前后體質(zhì)量、FBG值比較

注:與空白組比較，*P<0.05,**P<0.01;與模型組比較，△P<0.05,△△P<0.01;與同組干預(yù)前比較，▲▲P<0.01。

2.2 干預(yù)前后OGTT 2 h曲線下面積AUC-A、AUC-B的情況 AUC-A:造模各組均顯著高于空白組(P<0.01);其余各組兩兩比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。AUC-B:模型組顯著高于空白組(P<0.01);電針足三里組、格列美脲灌胃組顯著低于模型組(P<0.05);3個(gè)干預(yù)組間兩兩比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與同組干預(yù)前比較,干預(yù)4周后,模型組OGTT 2 h曲線下面積顯著升高(P<0.05),其余各組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖1。

圖1 干預(yù)前后OGTT 2 h曲線下面積AUC-A、AUC-B的情況

注：與空白組比較，*P<0.05,**P<0.01;與模型組比較，△P<0.05,△△P<0.01;與同組干預(yù)前比較，▲P<0.05。

2.3 各組血清中FINS及HOMA-B的情況 FINS:電針足三里組、格列美脲灌胃組FINS顯著低于空白對(duì)照組、模型對(duì)照組及電針腎俞組(P<0.01)。HOMA-B:與正常組比較,模型組、電針足三里組、電針腎俞組、格列美脲灌胃組顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);各干預(yù)組與模型組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 各組血清中FINS及HOMA-B的情況

注:與正常組比較，*P<0.05,**P<0.01;與模型組比較，△P<0.05,△△P<0.01;與電針腎俞組比較，▲▲P<0.01。

2.4 各組GLUT2、GCK mRNA的表達(dá)情況 GLUT2的mRNA表達(dá)水平:模型組、電針足三里組、電針腎俞組、格列美脲灌胃組顯著低于空白組(P<0.01或P<0.05);電針足三里組、電針腎俞組顯著高于模型組(P<0.01或P<0.05);3個(gè)干預(yù)組間兩兩比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。GCK的mRNA表達(dá)水平:模型組、電針腎俞組、格列美脲灌胃組均顯著低于正常組(P<0.01或P<0.05);電針足三里組、電針腎俞組、格列美脲灌胃組均顯著高于模型組(P<0.01或P<0.05);3個(gè)干預(yù)組間兩兩比較,電針足三里組顯著高于格列美脲灌胃組(P<0.01)。見圖2。

圖2 各組GLUT2、GCK mRNA的表達(dá)情況

注：與正常組比較，*P<0.05,**P<0.01;與模型組比較，△P<0.05,△△P<0.01;與電針足三里組比較，□□P<0.01。

圖3 各組HE染色圖

2.5 各組HE染色結(jié)果 HE染色:空白組的胰島邊界清晰,呈較大的橢圓形或柱狀形,胰島細(xì)胞數(shù)量多,細(xì)胞胞質(zhì)豐富,排列緊密。模型組胰島邊界不清,體積明顯變小,胰島細(xì)胞數(shù)量減少且排列雜亂,細(xì)胞腫脹、壞死,可見細(xì)胞空泡變性。3個(gè)干預(yù)組與模型組比較,有不同程度的改善,胰島邊界較模型組清晰,體積增大,胰島內(nèi)細(xì)胞數(shù)量增加,排列也較均勻,細(xì)胞空泡變性減少。見圖3。

3 討論

糖尿病對(duì)應(yīng)中醫(yī)學(xué)中的消渴,病變臟腑在肺、脾、腎,又以腎為關(guān)鍵,病機(jī)以陰虛為本,燥熱為標(biāo),故針灸治療大法為養(yǎng)陰生津、清熱潤(rùn)燥[19]。樸耕希等[20]對(duì)近20年針灸治療糖尿病及其并發(fā)癥的文獻(xiàn)統(tǒng)計(jì),發(fā)現(xiàn)主穴選取特點(diǎn)為多取四肢部的五輸穴及背俞穴,其中足三里和腎俞分別被最頻繁應(yīng)用。《針灸甲乙經(jīng)》載有“陰氣不足,熱中,消谷善饑……足三里主之”。足三里穴為足陽明胃經(jīng)之合穴,陽明經(jīng)多氣多血,針之可以益氣生津、健脾益胃?！肚Ы鸱健吩啤跋市”銛?shù)……又灸背上脾俞下四十,腎俞兩處”。腎俞為腎之背俞穴,常用于治療相應(yīng)臟腑疾病,針之可滋陰補(bǔ)腎。故電針足三里、腎俞二穴均能滿足針灸治療T2DM的需要。

在早期胰島素抵抗出現(xiàn)時(shí),胰島B細(xì)胞代償性分泌更多的胰島素以維持正常的血糖,后期B細(xì)胞逐漸失代償,功能減退甚至衰竭,最終發(fā)展為T2DM[21-22]。同時(shí)研究表明T2DM患者胰島B細(xì)胞功能不僅在確診時(shí)已明顯降低且呈每年進(jìn)行性降低趨勢(shì),但胰島素抵抗水平卻沒有明顯變化[23-25],這表明進(jìn)行性的胰島B細(xì)胞功能衰竭是T2DM發(fā)生發(fā)展的中心環(huán)節(jié)。GLUT2是以葡萄糖為底物,鑲嵌在細(xì)胞膜上的一種低親和性、高容量的載體蛋白質(zhì),廣泛存在胰島B細(xì)胞內(nèi),是嚙齒類動(dòng)物具有吸收功能的上皮細(xì)胞最主要的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體[26],GCK是主要在胰島B細(xì)胞和肝細(xì)胞內(nèi)表達(dá),使葡萄糖磷酸化,是細(xì)胞利用葡萄糖的限速酶[27],兩者共同被稱為“葡萄糖感受器”。葡萄糖通過膜上的GLUT2進(jìn)入細(xì)胞,被GCK磷酸化引起一系列的氧化代謝過程,此過程中ATP/ADP比值升高,使ATP敏感性鉀通道關(guān)閉,細(xì)胞膜除極化,開放電壓依賴性Ca2+通道,使細(xì)胞內(nèi)Ca2+升高,與其他第二信使相協(xié)同,使胰島素顆粒釋放。當(dāng)血糖升高,B細(xì)胞功能失代償,GLUT2、GCK等基因表達(dá)降低,導(dǎo)致胰島素釋放減少,表現(xiàn)為胰島素脈沖式分泌受損,分泌時(shí)相改變,胰島素原分泌增加等[28-29]。綜上所述,本實(shí)驗(yàn)以胰島B細(xì)胞中GLUT2、GCK的基因表達(dá)水平為研究對(duì)象,以期探討電針不同穴位對(duì)T2DM大鼠的療效及機(jī)制。

既往本課題組實(shí)驗(yàn)人員發(fā)現(xiàn)造模后普通飼料喂養(yǎng)后大鼠模型易自我修復(fù)[30],故本次實(shí)驗(yàn)采用高糖高脂飼料聯(lián)合腹腔注射小劑量(按35 mg/kg)STZ,造模后繼續(xù)以高糖高脂飼料喂養(yǎng),并進(jìn)行血糖測(cè)量,結(jié)果示造模后造模各組大鼠體質(zhì)量先升高后降低,FBG均能顯著升高,符合T2DM診斷標(biāo)準(zhǔn),并且干預(yù)過程中模型組大鼠FBG能保持持續(xù)性高血糖狀態(tài),表明此模型成功且穩(wěn)定。干預(yù)4周后,模型組FBG較干預(yù)前升高顯著,各干預(yù)組FBG較模型組有下降趨勢(shì),但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,OGTT 2 h實(shí)驗(yàn)表現(xiàn)出與FBG相同的結(jié)果,考慮可能是此大鼠模型血糖的進(jìn)行性升高,對(duì)針刺和西藥的干預(yù)有對(duì)抗性有關(guān),可認(rèn)為電針療法和西藥均有降血糖的作用。電針足三里組、格列美脲灌胃組可顯著降低FINS水平,各干預(yù)組HOMA-B比較模型組均有上升趨勢(shì),HE染色結(jié)果顯示,兩電針組和西藥組均能改善胰島B細(xì)胞的形態(tài),使其大小、形態(tài)接近正常,說明電針療法可改善B細(xì)胞的功能和保護(hù)B細(xì)胞形態(tài)。模型組的GLUT2、GCK mRNA的表達(dá)均顯著降低,兩電針組GLUT2 mRNA的表達(dá)與模型組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,西藥組也有上升趨勢(shì),兩電針組和西藥組GCK mRNA的表達(dá)與模型組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且電針足三里組GCK mRNA的表達(dá)顯著高于西藥組,說明電針療法和西藥均可上調(diào)胰島B細(xì)胞中GLUT2、GCK mRNA的表達(dá),且足三里穴上調(diào)GCK mRNA的表達(dá)的效果更優(yōu)。研究結(jié)果中基礎(chǔ)指標(biāo)的改善與GLUT2、GCK mRNA表達(dá)水平并不對(duì)等,這可能與胰島素的分泌過程受到營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(KATP通道、Ca2+通道、AMPK)、內(nèi)分泌激素(GLP-1、瘦素)、細(xì)胞因子(IL-6、TGF-β)等多種因素共同調(diào)控的復(fù)雜性及胰島素抵抗的存在有密切關(guān)系[31]。可進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)觀察電針療法對(duì)GLUT2、GCK下游指標(biāo)Insulin的mRNA表達(dá)的影響,以便更好的完善電針療法的具體起效途徑。

綜上所述,可得結(jié)論:電針足三里、腎俞穴可能是通過上調(diào)GLUT2、GCK mRNA的表達(dá)水平而改善T2DM大鼠的胰島B細(xì)胞的分泌功能、保護(hù)胰島B細(xì)胞的形態(tài)、降低FINS水平,其中足三里穴的效果更優(yōu)。

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(2016-07-07收稿 責(zé)任編輯：王明)

Effects of Electroacupuncture at “Zusanli” and “Shenshu” on GLUT2 and GCK in T2DM Rats

Jia Ning，Li Rui，Cao Bingyan，Tian Huanhuan，Hu Xiaogang，Ma Yanjia，Wang Yueying

(BeijingUniversityofChineseMedicine，Bejing100029，China)

Objective:To observe the effects and mechanism of different acupuncture points on rats who were infected with type-2 diabetes mellitus(T2DM).Methods:Among forty male SD rats, 8 rats were randomly selected into a control group, and the rest rats were fed on high fat and sugar diet in 50 days.T2DM model was established by intraperitoneal perfusion with 2% STZ solution according to the mass ratio of 35 mg/kg after the diet. A total of 32 rats who were made as model successfully were randomly divided into the model group, the group of electroacupuncture at Zusanli(ST36), electroacupuncture at Shenshu (BL23) group and Glimepiride group, 8 rats in each. The rats in all the electroacupuncture groups were treated with electroacupuncture on Zusanli and Shenshu respectively. Electro-acupuncture (2 Hz, 2 mA) was applied as the intervention, 6 times per week, lasting for 4 weeks. Fasting blood glucose (FBG) and body mass were measured and OGTT experiment was conducted before intervention and after intervention respectively. After the last intervention, the rats were killed, and blood samples and pancreatic tissue were collected. Radioimmunoassay was used to test FINS, calculating the homeostasis model assessment-B(HOMA-B). The mRNA level of GLUT2 and GCK in the pancreas was tested with Real-time PCR. And the morphological changes of the pancreas were stained with HE. Results:After the 4 weeks′ intervention, except that the rat′s mass body in the control group continued increasing (P<0.01), body mass in other groups faced significant reduction (P<0.01). FBG of the model group was significantly higher than that before intervention and that of the blank group (P<0.01). FBG of the Glimepiride group was prominently lower than that of the model group(P<0.01).Compared with the model group, the two electroacupuncture groups showed a decrease tendency(P>0.05).The results of the OGTT experiment was in accord with FBG. FINS of electroacupuncture at Zusanli(ST36) group and Glimepiride group was markedly lower than the control group,model group and electroacupuncture at Shen-shu group(P<0.01).HOMA-B of the model group was significantly lower than the blank group(P<0.01) and all groups after intervention had an increase tendency in comparison with the model group(P>0.05). The mRNA level of GLUT2 in the blank group(P<0.01) was markedly higher than that of the model group(P<0.01),whose mRNA level of GLUT2 was significantly lower than that of electroacupuncture at Zusanni group and electroacupuncture at Shen-shu group(P<0.05,P<0.01).The mRNA level of GCK in the blank group(P<0.01) was significantly higher than that of the model group, whose GCK level was markedly lower than that of all other groups after intervention. And the GCK level of electroacupuncture at Zusanni group was significantly higher than that of Glimepiride group(P<0.01). HE staining：the islet boundary of the model group was not clear and the volume of the islet markedly became smaller.The islet cells whose number reduced arrayed disordered and appeared swelling and necrosis, which proved vacuolar degeneration.In comparison with the model group, the three groups after intervention all got improved to some degree. The islet boundary of theirs was clear and the volume of the islet appeared bigger.The islet cells whose number increased arrayed evenly and degeneration of which got reduced.Conclusion:Electroacupuncture at Zusanli(ST36) and Shenshu(BL23) could enhance the mRNA level of GLUT2 and GCK to improve islet B cell secretory function in rats with T2DM, protect islet B cell morphology and reduce the level of FINS, especially Zusanli point.

T2DM; Electroacupuncture; Point ST36 (Zusanli); Point BL23 (Shenshu);GLUT2;GCK

教育部科學(xué)技術(shù)研究重大項(xiàng)目(編號(hào):313010)

賈寧(1991.07—),女,碩士研究生,研究方向:針刺干預(yù)2型糖尿病的作用機(jī)制研究,E-mail:qyzjianing@126.com

李瑞(1963.12—),男,博士,教授,研究方向:針灸經(jīng)典理論及腧穴的臨床實(shí)驗(yàn)研究,E-mail:tingxuezhai@126.com

R245.31+1

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.05.040